五加科植物鲨烯合酶核苷酸及其编码氨基酸序列的生物信息学分析

鲨烯合酶(squalene synthase,EC2.5.1.21,简称SQS)是三萜类化合物生物合成通路的关键酶之一。采用生物信息学方法对13种五加科植物的SQS核苷酸及其编码氨基酸序列的结构、理化性质、磷酸化位点、亲/疏水性、信号肽、导肽、跨膜结构域、亚细胞定位、二级结构、功能域、三级结构及进化关系进行初步预测和分析,并构建SQS蛋白家族的系统进化树。结果表明,13种五加科植物的SQS氨基酸序列结构与理化性质基本一致,均表现出亲水性,没有信号肽,具有跨膜结构域;亚细胞定位分析显示,除 Panax sokpayensis 定位于内质网膜上,其余均定位于质膜上。α螺旋和无规则卷曲为SQS二级结构中最主要的结构元件,保守区包括底物结合区、镁离子结合位点、活性位点残基盖、催化残基和2个天冬氨酸富集区,具有典型的多聚异戊二烯基合成酶活性结构域和鲨烯/八氢番茄红素合成酶活性结构域。分析结果可为SQS的酶学特性及三萜类化合物生物合成的分子机制研究提供理论基础。

山银花总三萜超声辅助提取工艺优化及其抗菌抗氧化活性研究

采用响应面法优化山银花总三萜提取工艺,并研究其抑菌和抗氧化活性。以总三萜得率为评价指标,在考察单因素试验的基础上,根据响应曲面分析法优化山银花总三萜提取工艺,并分别采用倍比稀释法和清除自由基法研究山银花总三萜提取物对10种常见致病菌的抑菌作用及抗氧化活性。结果表明:山银花总三萜最佳提取工艺条件为:乙醇浓度60%、料液比1∶26(g/mL)、超声温度63℃、超声时间60 min。在此工艺条件下,山银花总三萜的得率为3.37%±0.02%,与模型预测值3.36%基本一致。山银花总三萜提取物对供试菌株均有不同程度的抑制,且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、化脓性链球菌和肺炎链球菌抑制作用最强,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均在12.5 mg/mL以下;且对DPPH和ABTS自由基具有较好的清除作用,清除效果与总三萜浓度呈剂量-效应关系。优化后的山银花总三萜超声辅助提取工艺稳定可行,且其具有较强的广谱抗菌作用和良好的抗氧化活性。

金银花总三萜提取工艺及其抗菌抗氧化活性

以金银花为原料,乙醇为溶剂,考察超声辅助提取金银花总三萜的最佳工艺。在单因素(料液比、乙醇浓度、超声时间和超声温度)试验基础上,利用响应面法,研究各因素间相互作用及对三萜提取率的影响,获得最佳提取工艺为料液比1 g∶30 mL、乙醇浓度75%、超声时间50 min、超声温度45℃,验证试验结果显示,三萜提取率为3.71%,与理论值接近;通过微量稀释法检测常见致病菌对金银花总三萜的敏感性,最小抑菌浓度范围在3~24 mg/mL之间,证明金银花三萜具有较强的抗菌作用;DPPH、ABTS自由基清除试验IC50分别为26.1、18.8 mg/mL,说明金银花三萜具有一定的抗氧化活性。本研究为金银花三萜进一步的研究开发提供了科学依据。

指纹图谱结合一测多评模式在连翘配方颗粒质量评价中的应用

目的:HPLC指纹图谱与一测多评(QAMS)相结合的质量评价模式的建立及其在连翘配方颗粒质量评价中的可行性和准确性分析。方法:建立连翘配方颗粒HPLC指纹图谱,以连翘苷为内参物,建立forsythenside F、连翘酯苷Ⅰ、(+)松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘酯苷A、连翘脂素的相对校正因子,分别用外标法和QAMS法计算6种成分的含量。结果:建立了10批连翘配方颗粒的HPLC指纹图谱,相似度均>0.95,标定了10个共有峰,指认了其中的6个色谱峰,分别采用外标法和QAMS法测得的含量无显著差异(P>0.05)。结论:指纹图谱与QAMS相结合评价连翘配方颗粒质量的方法准确、简便、可行,可为全面控制连翘配方颗粒的质量提供参考依据。