汝南县花生白绢病菌的鉴定、生物学特性及室内抗病药筛选

为探究引起河南省汝南县花生白绢病的病原种类及其生物学特性,利用形态学和分子生物学方法对分离自汝南县的花生白绢病原真菌进行鉴定,同时研究了病原菌的生物学特性及室内药剂筛选.结果表明,引起汝南县花生白绢病的病原菌为罗氏阿太菌(Athelia rolfsii),其无性态为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii).生物学特性研究表明花生白绢病的病原菌生长的最适温度为30℃,最适pH为6.0.该菌能利用供试的碳源、氮源进行营养生长,但在以葡萄糖、麦芽糖或淀粉为唯一碳源和以尿素作为唯一氮源的培养基上均不能产生菌核.菌核的抑制萌发温度为55℃,时间为10 min.室内抗病药毒力测定结果表明,戊唑醇对罗氏阿太菌的毒力最强,EC50值为0.4629 mg/L.

贝莱斯芽孢杆菌HYN-9的分离、鉴定及其对花生白绢病的生防作用

本研究旨在分离和鉴定对花生白绢病菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)具有高效拮抗作用的细菌菌株。采用稀释涂布平板法从废弃的黄芩药渣中分离到18株细菌,其中菌株HYN-9对S.rolfsii的抑菌活性最强,抑菌带宽度为10.92 mm。基于形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列,将菌株HYN-9鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。菌株HYN-9的无菌发酵滤液对S.rolfsii菌丝生长的抑制率为70.01%,并对菌核的形成和萌发也均有较强的抑制作用。此外还发现HYN-9产生的挥发性气体能明显抑制S.rolfsii的生长,抑菌率达88.79%。盆栽试验表明拮抗细菌HYN-9能够明显降低花生白绢病的发病率和感病指数,对花生白绢病的防效为73.23%,显著高于接种多菌灵药剂47.62%的防效(P<0.05)。拮抗细菌HYN-9也能提高花生防御酶活性,接种HYN-9后花生叶片的苯丙氨酸酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性显著增加,进而增强花生对病害的系统抗性。以上结果表明贝莱斯芽孢杆菌HYN-9对S.rolfsii具有较强的拮抗作用,是一株具有开发应用潜力的花生白绢病生防菌株。

耐辐射球菌辐射耐受机制的研究进展

耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans,Dr)是迄今为止地球上发现的最具辐射抗性的生物之一,对紫外线、干旱和诱变剂等损伤因子均表现出极强的抗性,备受世界各国科学家的广泛关注。目前关于其抗辐射机理已有大量的文献报道。根据国内外最新的研究成果,从DNA损伤修复机制、抗氧化防御系统、特殊的生存方式及细胞净化系统等方面,对耐辐射球菌辐射抗性机理的研究进行了简单的概述,并对未来Dr耐辐射机制的研究趋势进行了展望,以期为进一步研究该菌的辐射耐受机制奠定基础。

绣球菌原生质体制备及再生条件的初步研究

为进一步改善绣球菌栽培特性、提高栽培产量,对绣球菌原生质体制备与再生条件进行了初步探索.以绣球菌原生质体再生量为指标,对等渗剂、酶反应温度、pH和反应时间等影响因素进行了优化.结果表明,采用2%的溶壁酶溶解绣球菌菌丝细胞壁,制备原生质体的最佳条件是,以0.6 mol/L蔗糖为等渗剂,在30℃、pH值6.0环境下反应3 h.在此条件下,原生质体的再生量为11 850个/mL.

一株花生白绢病菌拮抗细菌的筛选、鉴定及发酵液中活性物质稳定性研究

为筛选对花生白绢病菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)具有高效拮抗活性的细菌菌株,采用平板对峙法和菌丝生长速率法对4株细菌进行抑菌活性的测定,并对筛选的高效拮抗菌株进行鉴定和活性物质稳定性研究。结果表明,菌株WS3-1对花生白绢病菌的抑制作用最强,其发酵滤液对病菌的抑菌率达95.04%。通过细菌形态特征、生理生化特征及16S rDNA和gyrB序列分析,将菌株WS3-1鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株WS3-1发酵液中活性物质在温度为40℃、60℃、80℃以及pH为8~10的条件下,抑菌活性稳定,抑菌率均在80%以上,同时活性物质具有较好的抗紫外线分解能力。以上结果说明解淀粉芽孢杆菌WS3-1是一株具有开发和应用潜力的花生白绢病生防菌株。

菌株Trametes hirsuta zlh237发酵液对污染土壤中多环芳烃的降解及群落结构分析

【目的】利用中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室分离获得的菌株Trametes hirsuta zlh237,研究生物强化(接种菌株T.hirsuta zlh237发酵液)对污染土壤中3种多环芳烃(PAHs)[Phenanthrene、Pyrene和Benzo[a]pyrene(BaP)]的降解效果,为该菌株在PAHs污染土壤中的应用提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)检测7个处理土壤(接种菌株T.hirsuta zlh237发酵液的Phenanthrene、Pyrene和BaP污染土壤分别标记为PheBA、PyrBA和BaPBA,接种灭菌发酵液的污染土壤分别标记为Phe、Pyr和BaP,原始土壤标记为CK)中3种PAHs含量,利用ABTS法检测土壤中漆酶活性,并运用高通量测序技术分析修复后土壤中细菌群落结构的变化。【结果】菌株T.hirsuta zlh237在3种PAHs污染土壤中均能生长,接种菌株发酵液15 d后,3种PAHs均有一定降解,其中BaP降解效果最佳,降解率达33.99%;且菌株T.hirsuta zlh237在3种污染土壤中均能分泌漆酶。高通量测序Alpha多样性指数分析结果表明,污染土壤接种菌株T.hirsuta zlh237发酵液后,Chao1指数和Shannon指数显著增加(P<0.05),不同处理土壤样品的Chao1指数和Shannon指数排序均为:PheBA>PyrBA>BaPBA>CK>Phe>Pyr>BaP。Beta多样性的主成分分析(PCA)结果表明,接种菌株T.hirsuta zlh237发酵液能改变污染土壤细菌群落结构组成;在门分类水平上,污染土壤样品中变形菌门(Proteobacteria)为优势门;在属分类水平上,接种菌株T.hirsuta zlh237发酵液的污染土壤样品中鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)为优势菌属,接种灭菌发酵液的污染土壤Phe和Pyr样品中苯基杆菌属(Phenylobacterium)为优势菌属,而BaP样品中假单胞菌属(Pseudomonas)为优势菌属。【结论】菌株T.hirsuta zlh237发酵液在PAHs污染土壤中能分泌漆酶,对3种PAHs均有一定的降解效果,且能改变污染土壤细菌群落结构组成,在一定程度上对PAHs污染土壤有较好的修复效果。

一株高产纳豆激酶菌株的鉴定与分析

鉴定高产纳豆激酶菌株Td,分析纳豆激酶的分子特征。利用菌体形态、生理生化特征、以及分子生物学方法对菌株Td进行鉴定;并采用MALDI-TOF质谱测定与分析、SDS-PAGE和纤溶活性测定等方法检测纳豆激酶特性,利用PCR方法扩增纳豆激酶的基因全长。结合菌体形态、生理生化特征和16S r DNA、gyr A基因序列、DNA-DNA杂交率等实验结果,鉴定菌株Td为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis);菌株Td发酵产生的纳豆激酶产量可达300 mg/L以上,占发酵液总蛋白的40%以上;纤溶活性达230 U/m L以上;氨基酸序列与subtilisin E的序列相似性最高;基因全长序列为1 143 bp。枯草芽孢杆菌枯草亚种Td是一株高产、高活性纳豆激酶的产生菌,具有优良的工业化开发价值。

血液杆菌Haematobacter sp.细胞脂肪酸测定的影响因素

应用美国MIDI公司Sherlock MIS系统检测一株归属于血液杆菌属的新菌种Haematobacter sp.HNMC11807的细胞脂肪酸组成,探讨不同培养方法和条件对其细胞脂肪酸组成的影响。采用不同培养条件培养微生物细胞,即不同的培养基组成、固液类型和培养时间;分析比较细胞脂肪酸检测结果存在的差异。同时对比分析仪器专用的两种检测体系,即常规标准和快速标准体系,对样品脂肪酸测定结果的影响。结果发现,细胞脂肪酸组成与其培养条件密切相关,且差异显著。因此,在应用该系统做微生物分类鉴定时,必需严格遵守特定的、统一的培养条件平行进行。

加拿大箱栽羊肚菌技术简介

加拿大森林面积4亿多公顷,占其国土总面积的31%。加拿大地处亚寒带及寒带地区,森林以亚寒带针叶林为主。山火过后的森林土壤适合野生羊肚菌的生长,每年都有大批羊肚菌采摘者前往加拿大西北地区＂淘金＂,野生羊肚菌的价格大致在每磅30加元（约328元/kg）。加拿大人工栽培羊肚菌较少,所以羊肚菌价格还有上升的空间。

基于高通量测序分析花生不同器官内生细菌群落多样性

通过Illumina MiSeq高通量测序技术,对花生根、茎、叶、花不同器官内生细菌16S rRNA的V5~V7可变区进行测序,研究花生内生细菌群落多样性。从花生不同器官内一共获得61396条有效序列和468个OTU(Operational Taxonomic Units)。物种分类显示花生内生细菌种类隶属于21个门、43个纲、107个目、177个科和284个属。根部内生细菌优势属为假单胞菌属(Pseudomonas)、慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)和魏斯氏菌属(Weissella),相对丰度分别为37.67%、25.13%和7.38%;茎部内生细菌优势属为假单胞菌属(Pseudomonas)和红球菌属(Rhodococcus),相对丰度分别为73.12%和8.88%;叶部内生细菌优势属为假单胞菌属(Pseudomonas)和红球菌属(Rhodococcus),相对丰度分别为78.65%和8.55%;花部内生细菌优势属为假单胞菌属(Pseudomonas),相对丰度为15.15%。PICRUSt功能预测表明,叶部内生细菌中参与调控各种代谢通路的物种丰度最高,茎部和根部次之,花部最低。以上研究结果表明花生内生细菌具有丰富的种群多样性,为今后开发利用花生内生细菌资源奠定了基础。

花生不同组织内生真菌群落多样性及其生态功能结构分析

本试验通过高通量测序技术研究花生不同组织内生真菌群落多样性,一共获得763 200条有效序列,聚类后得到308个OTU,隶属于9个门,25个纲,51个目,107个科,155个属。根部内生真菌优势属为镰刀菌属(Fusarium)、曲霉属(Aspergillus)、丝孢酵母属(Trichosporon)、Apiotrichum和篮状菌属(Talaromyces),相对丰度分别为13.35%、10.74%、8.32%、6.29%和5.09%;茎部内生真菌优势属为Apiotrichum、丝孢酵母属(Trichosporon)、皮状丝孢酵母属(Cutaneotrichosporon)和曲霉属(Aspergillus),相对丰度分别为17.99%、13.81%、7.60%和5.92%;叶部内生真菌优势属为小光壳属(Leptosphaerulina)和暗球腔菌属(Phaeosphaeria),相对丰度分别为65.64%和27.18%;花部内生真菌优势属为小光壳属(Leptosphaerulina),相对丰度达到95.45%。经FUNGuild软件分析,花生内生真菌共包含地衣共生真菌、未定义腐生菌、动物病原菌、内生菌、木腐菌、植物病原菌、粪生菌、丛枝菌根真菌等17种生态功能群。

软腐白菜细菌群落结构多样性与生长环境的相关性

【目的】通过对比分析不同生境白菜软腐病变组织与根系土壤相关细菌的群落结构,探讨白菜软腐细菌种群的多样性,以及与生境土壤细菌种群的相关性。【方法】样品采自河南省2个不同生态型白菜田,以成熟白菜软腐组织及病株根系土壤为目标,利用模拟原环境的培养基成分和条件,对样品中的细菌进行高通量分离培养和细胞16S rRNA基因序列比对分析,获得各样品细菌种群结构及其丰度,进而对各样品的优势菌群进行对比分析。【结果】两种不同生境白菜软腐组织细菌总量M05T为4.0×108 cell/g、Q2T为1.2×1011 cell/g,分别获得纯菌56株和85株。M05T优势菌为萎蔫短小杆菌萎蔫亚种(Curtobacteriumflaccumfaciens pv.Flaccumfaciens);Q2T优势菌为假单胞菌(Pseudomonas spp.)(栖木槿假单胞菌(P.hibiscicola)、台湾假单胞菌(P.taiwanensis)、托木尔假单胞菌(P.tuomuerensis)、莫塞尔假单胞菌(P.mosselii))。根系土壤细菌总量M05S为2.7×105 cell/g、Q2S为6.2×107 cell/g,分别获得纯菌36株和70株。M05S优势菌为巨大芽胞杆菌(Bacillus megatherium);Q2S优势菌为假单胞菌(Pseudomonas spp.)(香鱼假单胞菌(P.plecoglossicida)、栖木槿假单胞菌(P.hibiscicola)、类黄色假单胞菌(P.parafulva)、蒙氏假单胞菌(P.monteilii)、膝形假单胞菌(P.geniculata))。【结论】依据不同生境的白菜软腐组织和根系土壤细菌群落结构对比分析,认为白菜软腐菌可能具有多样性和多种致病来源,本研究为软腐病多种防治措施的制定提供基础研究和菌种资源。

软腐白菜根系土壤中香味类香味菌的分离与鉴定

目的鉴定软腐白菜根系土壤中分离的条件致病菌——香味类香味菌。方法采用选择性培养基,从软腐白菜根系土壤中分离出15株产生芳香气味的细菌,通过对菌株进行形态学观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列测定、比对分析和系统发育树构建,对该类群菌株进行初步分类鉴定。结果软腐白菜根系土壤中分离获得的15株产生芳香气味的细菌中,有一株菌其形态学特征及生理生化特性均与香味类香味菌Myroides odoratus ATCC4651T(M58777)一致,16S rRNA部分基因序列与香味类香味菌基因序列同源性达99.99%。初步鉴定该菌为香味类香味菌。结论采用选择性培养基,结合经典分类学方法和16S rRNA基因序列比对分析、构建系统发育树,可分离并鉴定软腐白菜根系土壤中的香味类香味菌。

麦田除草剂苯磺隆耐受菌株的筛选和初步鉴定

目的对采自河南省临颍县麦田的土壤样品进行苯磺隆耐受菌的筛选和初步鉴定。方法利用选择性培养基,经富集培养,从长期施用苯磺隆的麦田土壤中筛选苯磺隆耐受菌。采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析和生物学特性研究,对菌株进行初步分类鉴定。结果共分离到耐受苯磺隆的纯菌12株,其中一株LYBRD3-3对苯磺隆耐受能力最强,苯磺隆耐受浓度为150μg/L。经过对该菌形态观察、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,LYBRD3-3与无色菌属的Achromobacter insolitus LMG 6003T(AY170847)序列具有最高的相似性,同源性为99.58%,初步鉴定该菌为无色菌属菌。结论分离自麦田土壤的苯磺隆耐受菌为进一步筛选苯磺隆降解功能菌株提供菌种资源,进而为污染土壤的原位生物修复提供基础研究。

软腐白菜根系土壤中湖生代夫特菌的分离和鉴定

目的筛选并鉴定软腐白菜根系土壤中分离出的细菌。方法从河南省大白菜田成熟白菜病株根系土壤采集样品,利用模拟原环境的培养基成分和条件,对样品中的细菌进行分离和培养。对菌株进行形态学观察、生理生化特征鉴定以及16S r RNA基因序列测定、比对分析和系统发育树构建,对菌株进行初步分类鉴定。结果分离到的一株编号为Q2S2-18A2的菌株16Sr DNA与代夫特菌属内的Delftia lacustris 332 T(EU888303)具有最高的相似性,相似值为98.60%。结论模拟原环境培养基,结合经典分类学方法和16S r RNA基因序列比对分析、构建系统发育树,可分离并鉴定软腐白菜根系土壤中的机会致病菌湖生代夫特菌。