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肌细胞分化基因与大鼠肝再生的相关性分析(英文) 被引量:1
1
作者 赵利峰 张明真 徐存拴 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期387-394,共8页
肌细胞是组织器官的重要组成部分。为在基因转录水平了解肌细胞分化相关基因在大鼠肝再生中的作用.本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(liver regeneration,LR)中表达情... 肌细胞是组织器官的重要组成部分。为在基因转录水平了解肌细胞分化相关基因在大鼠肝再生中的作用.本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(liver regeneration,LR)中表达情况,用比较真、假手术基因表达的差异性方法确定肝再生相关基因。初步证实上述基因中52个基因与肝再生相关。根据肝再生中基因表达的时间相关性将上述基因聚合为0.5-1h:2-12h;16、30、42、96h;18-24、36、48-60h;66-72、120- 168h等5类,表达上调和下调的基因数分别为8和10,24和8,21和24,53和64,28和36。它们表达的相似性分为均上调、上调占优势、均下调、下调占优势、上调和下调次数相近等5类,涉及15、10、17、7和3个基因,共上调表达143次、下调136次,分为8类表达方式。表明肌细胞分化相关基因表达变化多样和复杂。根据上述结果推测,肝再生中成肌细胞和平滑肌细胞分化增强;骨骼肌和心肌细胞分化相关基因参与肝再生的生理生化活动。 展开更多
关键词 部分肝切除 Rat GENOME 230 2.0芯片 肌细胞分化 肝再生相关基因
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软骨细胞发生和分化基因与大鼠肝再生的相关性(英文)
2
作者 赵利峰 李鹏鸽 徐存拴 《河南科学》 2007年第4期571-577,共7页
肝脏由多种细胞构成,肝再生与细胞分化密切相关,细胞分化受基因转录水平调控.为在基因转录水平了解软骨细胞的发生和分化相关基因在大鼠肝再生中作用,通过搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与软骨细胞发生和分化的基因,用Rat Geno... 肝脏由多种细胞构成,肝再生与细胞分化密切相关,细胞分化受基因转录水平调控.为在基因转录水平了解软骨细胞的发生和分化相关基因在大鼠肝再生中作用,通过搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与软骨细胞发生和分化的基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(liver regeneration,LR)中表达情况,用比较真、假手术中基因表达差异确定肝再生相关基因.初步证实上述基因中23个基因与肝再生相关.肝再生启动(PH后0.5~4 h)、G0/G1过渡(PH后4~6 h)、细胞增殖(PH后6~66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168 h)等四个阶段起始表达的基因数为15、4、8和0;基因的总表达次数为15、10、22和17.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.它们共表达上调100次、下调77次,分为17种表达方式,表明肝再生中软骨细胞发生和分化相关基因活动多样和复杂.根据本文研究结果推测,上述基因不仅调节软骨细胞发生和分化,而且参与肝再生的生理生化活动. 展开更多
关键词 部分肝切除 RAT GENOME 230 2.0芯片 软骨细胞发生和分化 鼠肝再生相关基因
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肝细胞生长和分化相关基因在大鼠肝再生中的表达方式及作用分析 被引量:1
3
作者 徐存拴 赵利峰 +1 位作者 常翠芳 陈晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期290-295,共6页
目的在基因转录水平了解肝再生中肝细胞的生长和分化情况。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝细胞生长和分化基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(LR)中的表达情况,通过比较手术组和假手术组中基因表... 目的在基因转录水平了解肝再生中肝细胞的生长和分化情况。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝细胞生长和分化基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(LR)中的表达情况,通过比较手术组和假手术组中基因表达差异性以确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中110个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为63、11、43和3,基因总表达的次数为63、43、101和80,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调488次,下调248次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动的多样性和复杂性。结论肝细胞生长和分化贯穿于整个肝再生中。 展开更多
关键词 部分肝切除(PH) 肝细胞生长 分化 肝再生相关基因 基因组2302.0芯片 大鼠
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细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用分析 被引量:5
4
作者 杜斌 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期316-322,共7页
目的在基因转录水平了解12条细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术中基因... 目的在基因转录水平了解12条细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术中基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中491个与肝再生相关,其中226个基因之间有742种直接作用关系。细胞因子和趋化因子介导的酶联受体、G蛋白耦联受体、谷氨酸;抗原受体介导的,整合素介导的,脂多糖介导的,Notch、Osmosensory、Smoothened、Toll、Wnt等12条信号通路中与肝再生相关的上调基因数和下调基因数,分别为26和23、164和54、59和51、5和1、22和14、21和10、1和1、4和11、23和11、32和17。肝再生中基因上调表达次数和下调表达次数分别为188和128、464和190、308和207、13和5、88和46、123和50、2和1、20和43、148和30、174和62。结论除Osmosensory和脂多糖介导的信号通路在肝再生中作用较小,Smoothened信号通路作用减弱外,其他9条信号通路在肝再生中作用增强。 展开更多
关键词 部分肝切除 细胞表面受体 信号通路 肝再生 基因组2302.0芯片 大鼠
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胃肠道5-HT内分泌细胞和肥大细胞与肝再生的关系 被引量:3
5
作者 张文学 卢正 +2 位作者 唐超智 荣换玲 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期228-234,共7页
目的探讨胃肠道及肝中5-HT免疫活性(5-HT-IR)内分泌细胞和肥大细胞(MC)与肝再生的关系。方法150只SD大鼠随机分为对照组、手术对照(OC)组和实验组。实验组大鼠切除2/3肝(部分肝切除,PH),分别于术后不同时段取胃、小肠、肝组织... 目的探讨胃肠道及肝中5-HT免疫活性(5-HT-IR)内分泌细胞和肥大细胞(MC)与肝再生的关系。方法150只SD大鼠随机分为对照组、手术对照(OC)组和实验组。实验组大鼠切除2/3肝(部分肝切除,PH),分别于术后不同时段取胃、小肠、肝组织。用免疫组织化学技术检测组织中5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IRMC,用甲苯胺蓝(TB)染色技术检测组织中MC。OC组除不切除肝叶外,其他同实验组。结果1.实验组和OC组胃肠中5-HT-IR内分泌细胞数均于PH后2h较对照组下降(胃P〈0.05,肠P〈0.01),但实验组PH后6~72h极显著多于对照组(P〈0.01),肝中未见5-HT-IR内分泌细胞。2.除PH后48~96h肝中MC数显著少于对照组(P〈0.05)外,实验组和OC组胃肠及肝中MC数较对照组均无显著差异。3.在胃中5-HT-IRMC数于PH后3~6h和96h显著多于对照组(P〈0.05),12~72h极显著多于对照组(P〈0.01);在小肠中PH后2h和120h显著多于对照组(P〈0.05),3~96h极显著多于对照组(P〈0.01);肝中PH后48~72h显著少于对照组(P〈0.05)。OC组胃肠和肝中5-HT-IRMC数较对照组均无显著差异;4.MC的5-HT阳性率在胃中于PH后2~96h,在小肠中于PH后0.5~120h逐渐增大,在肝中于1.5~24h有所增加,48~72h明显下降。OC组胃肠和肝中的阳性率较对照组均无明显变化。结论肝切除后的肝细胞增殖期内胃肠道5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IRMC数显著增多,两种细胞可能提供了在肝再生中起重要作用的5-HT。 展开更多
关键词 肝再生 5-HT 肥大细胞 胃肠道 免疫组织化学 甲苯胺蓝 大鼠
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部分肝切除后大鼠结肠黏膜层超微结构的变化 被引量:2
6
作者 唐超智 张文学 +3 位作者 高道文 张新胜 傅山岗 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期545-548,共4页
目的探讨部分肝切除(PH)对大鼠结肠黏膜层超微结构的影响。方法选取健康SD大鼠35只,分为1个正常对照组、3个假手术(SO)对照组和3个2/3 PH组,正常对照组大鼠直接处死,SO组和PH组大鼠分别于术后6、12和24 h处死,均取结肠固定后超薄切片,... 目的探讨部分肝切除(PH)对大鼠结肠黏膜层超微结构的影响。方法选取健康SD大鼠35只,分为1个正常对照组、3个假手术(SO)对照组和3个2/3 PH组,正常对照组大鼠直接处死,SO组和PH组大鼠分别于术后6、12和24 h处死,均取结肠固定后超薄切片,透射电镜下观察结肠黏膜层超微结构的变化。结果与正常对照组相比,SO组大鼠结肠黏膜层超微结构无明显变化。PH 6和12 h组结肠黏膜层超微结构发生了较明显变化:微绒毛萎缩,上皮细胞间隙增大,杯形细胞线粒体损伤,内分泌细胞分泌增强,肥大细胞脱颗粒明显,巨噬细胞吞噬活跃,中性粒细胞富集。PH 24 h组,内分泌细胞仍然活跃,其他变化不明显。结论 PH后结肠黏膜屏障结构破坏,易发生感染;内分泌细胞和肥大细胞等活化,有利于残肝的修复和再生。 展开更多
关键词 部分肝切除 结肠 黏膜层 超微结构 透射电镜 大鼠
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5-羟色胺4受体调节剂对肝部分切除大鼠胃肠5-羟色胺分泌和肝再生的影响 被引量:2
7
作者 张文学 卢正 +2 位作者 王峥 高道文 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期592-597,共6页
目的探讨5-羟色胺4(5-HT4)受体调节剂(激动剂和抑制剂)对肝部分切除(PH)后大鼠胃肠道5-羟色胺(5-HT)和肝再生的影响。方法 60只成年SD大鼠PH后分为对照组、西沙必利(激动剂)组和GR113808(抑制剂)组3组;西沙必利组PH后每12h按10mg/kg体... 目的探讨5-羟色胺4(5-HT4)受体调节剂(激动剂和抑制剂)对肝部分切除(PH)后大鼠胃肠道5-羟色胺(5-HT)和肝再生的影响。方法 60只成年SD大鼠PH后分为对照组、西沙必利(激动剂)组和GR113808(抑制剂)组3组;西沙必利组PH后每12h按10mg/kg体重的西沙必利灌胃,GR113808组PH后每12h按3mg/kg体重的GR113808腹腔注射;分别于PH后0h、24h、48h、72h计算肝/体重比,并取血液、胃、小肠和肝组织;用免疫组织化学技术显示胃肠中5-HT免疫阳性(5-HTIR)细胞,用图像分析系统测定胃肠5-HTIR细胞平均灰度,用酶联免疫吸附法(ELESA)检测血液中的5-HT,用银染技术显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)。结果与对照组比,1.西沙必利组胃肠中5-HTIR细胞数于PH后48~72h显著下降(P<0.05)、细胞的灰度于PH后24~72h显著上升(P<0.05),血中5-HT的含量于PH后24~72h显著上升(P<0.05),肝/体重比和肝组织AgNORs颗粒数在PH后48~72h显著增加(P<0.05);2.GR113808组在PH后24~72h期间,5-HTIR细胞数较对照组无显著性差异,但细胞的灰度显著下降(P<0.05或P<0.01),血中5-HT的含量显著下降(P<0.05或P<0.01),肝/体重比于48~72h显著下降(P<0.05或P<0.01),肝中AgNORs颗粒数于24~72h显著减少(P<0.05或P<0.01)。结论用5-HT4受体调节剂改变胃肠道5-HT的分泌量,可导致肝/体重比和肝细胞的转录活性发生相应的改变;胃肠道分泌的5-HT具有促进肝细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 5-羟色胺4受体 西沙必利 GR113808 肝再生 核仁组成区相关嗜银蛋白 免疫组织化学 酶联免疫吸附法 大鼠
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大鼠再生肝8种细胞的丝氨酸族氨基酸代谢相关基因的转录谱 被引量:2
8
作者 常翠芳 王改平 +4 位作者 朱秋实 王磊 张富春 马纪 徐存拴 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期829-838,共10页
为了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的丝氨酸族氨基酸代谢相关基因转录谱,文章用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选分离大鼠的8种再生肝细胞,用Rat Genome 230 2.0芯片等检测它们中丝氨酸族氨基酸代谢相关基因的表达变化,用Cluster和Tree... 为了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的丝氨酸族氨基酸代谢相关基因转录谱,文章用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选分离大鼠的8种再生肝细胞,用Rat Genome 230 2.0芯片等检测它们中丝氨酸族氨基酸代谢相关基因的表达变化,用Cluster和Treeview等软件分析上述基因在肝再生中表达模式,用生物信息学和系统生物学等方法分析上述细胞中丝氨酸族氨基酸代谢活动。结果表明,在27个发生有意义表达变化的基因中,肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、肝星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞的基因数分别为13、16、11、14、13、11、12、14,相应细胞的上调、下调和上/下调的基因数分别为7、6和0,2、10和4,2、8和1,8、3和3,6、5和2,4、6和1,2、10和0,6、6和2。总的来看,肝再生中各细胞的表达下调基因占优势,但在肝再生启动阶段,肝星形细胞和窦内皮细胞的表达上调基因占优势。上述丝氨酸族氨基酸代谢相关基因转录谱预示丝氨酸族氨基酸的合成主要在肝再生启动阶段的肝细胞、肝星形细胞、窦内皮细胞和库普弗细胞中增强,它们的降解主要在肝再生进展阶段的肝细胞、胆管上皮细胞、陷窝细胞和树突状细胞中进行。 展开更多
关键词 肝再生 RatGenome 2302.0芯片 甘氨酸 丝氨酸 半胱氨酸
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辅酶Q_(10)对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换的影响 被引量:2
9
作者 翟心慧 来小海 +2 位作者 吴清华 赵爱景 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期44-48,共5页
目的了解辅酶Q10(CoQ10)对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换(MPT)的影响。方法雌性SD大鼠120只,用不同剂量CoQ10灌胃后行部分肝切除术(PH),于术后不同时间取肝组织分离线粒体,分光光度计法测定线粒体悬液的A540nm值,之后再加入钙离子诱... 目的了解辅酶Q10(CoQ10)对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换(MPT)的影响。方法雌性SD大鼠120只,用不同剂量CoQ10灌胃后行部分肝切除术(PH),于术后不同时间取肝组织分离线粒体,分光光度计法测定线粒体悬液的A540nm值,之后再加入钙离子诱导并检测A540nm值。结果 PH后6~48h,高剂量(60mg/kg)CoQ10处理组的再生肝线粒体通透性明显低于对照组,而低剂量(6mg/kg)处理组只在48h明显低于对照组,其他时间均无显著差异。用钙离子诱导后,各组各时间点的线粒体通透性随时间延长而不同程度的增强,但PH后6~48 h的CoQ10处理组的再生肝线粒体通透性稍小于对照组。结论一定剂量的CoQ10能降低大鼠再生肝线粒体通透性,作用主要体现在肝再生的细胞增殖阶段。 展开更多
关键词 辅酶Q10 线粒体通透性转换 钙离子 肝再生 分光光度计法 大鼠
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大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:7
10
作者 王文博 谢来峰 +2 位作者 王望 王磊 徐存拴 《河南科学》 2008年第12期1492-1498,共7页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 肝细胞 基因表达 标记蛋白
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树突状细胞在大鼠再生肝中分布及数量变化 被引量:1
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作者 谢来峰 王文博 +2 位作者 王磊 王望 徐存拴 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第2期22-26,F0003,共6页
探讨树突状细胞在大鼠再生肝中分布及数量变化,为深入研究其在肝再生进程中的作用奠定基础。制作大鼠2/3肝切除模型(PH),用两步灌流法分散肝脏细胞,用Percoll密度梯度离心和ox62免疫磁珠分离相结合方法分离树突状细胞(DC),用免疫组织化... 探讨树突状细胞在大鼠再生肝中分布及数量变化,为深入研究其在肝再生进程中的作用奠定基础。制作大鼠2/3肝切除模型(PH),用两步灌流法分散肝脏细胞,用Percoll密度梯度离心和ox62免疫磁珠分离相结合方法分离树突状细胞(DC),用免疫组织化学方法定性、定位CD86和CD103在再生肝(RL)、分散的肝脏细胞及分离的树突状细胞中分布,用蛋白免疫印迹方法定量树突状细胞的CD86和CD103,用RT-PCR定量分离的树突状细胞CD86和CD103的mRNA。结果表明,0h再生肝树突状细胞分布于肝血窦、中央静脉、胆管周围,12h在远离中央静脉和胆管的部位出现,24h呈弥散状分布,168h分布与对照相同;从肝切除后0、2、6、12、24、30、36、72、120、168h等10个时间点的大鼠再生肝中收获的树突状细胞平均数分别为每只大鼠1.55、1.59、1.87、2.46、1.49、2.73、3.87、6.04、6.52、8.40百万个,CD86和CD103阳性细胞数目、细胞活性均在95%以上。上述结果说明在肝再生进程中树突状细胞的分布由肝血窦、中央静脉、胆管周围逐渐向全肝弥散,24h弥散达到高峰,之后回落,至168h分布与对照相同,但其数量随肝再生进程而增加。 展开更多
关键词 大鼠再生肝 树突状细胞 ox62免疫磁珠 标记蛋白 分布及数量变化
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IL-18的毕赤酵母表达及其激活NF-κB和p38途径促进BRL-3A细胞增殖
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作者 张继红 许晓亚 +2 位作者 杨刚刚 马诚凯 徐存拴 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期458-466,共9页
目的:探讨白细胞介素18(IL-18)在毕赤酵母中的表达条件及其对BRL-3A细胞的增殖作用和作用机制.方法:构建表达载体p PIC9K-IL-18,电转化至毕赤酵母GS115,PCR、Western blotting和SDS-PAGE方法鉴定表达产物的正确性,并对发酵条件进行... 目的:探讨白细胞介素18(IL-18)在毕赤酵母中的表达条件及其对BRL-3A细胞的增殖作用和作用机制.方法:构建表达载体p PIC9K-IL-18,电转化至毕赤酵母GS115,PCR、Western blotting和SDS-PAGE方法鉴定表达产物的正确性,并对发酵条件进行优化,再经双水相萃取偶联DEAE离子交换层析分离纯化表达产物.然后,MTT法检测重组大鼠IL-18(rr IL-18)对BRL-3A细胞的增殖作用,RT-PCR和Western blotting方法检测IL-18信号通路相关基因的表达变化.结果:在3 L发酵罐规模下600的菌体密度、p H=6.0、诱导温度23℃、体积分数分别为20%DO和0.25%甲醇浓度条件下表达质量浓度最高约为280 mg/L,经分离纯化后纯度可达95%.此外,质量浓度为15-20 ng/m L rr IL-18孵育48 h,能明显促进BRL-3A细胞增殖(P〈0.5),且IL18R、My D88、NF-κB及其下游靶蛋白cyclin B1和cyclin B2的表达量均显著高于对照组(P〈0.5).同时,p38途径的ATF2及其下游靶蛋白cyclin A2和Bcl-2的表达量也随之升高(P〈0.5).结论:成功构建大鼠IL-18表达载体,优化在毕赤酵母中的发酵条件和纯化工艺,并首次证实IL-18能通过NF-κB和p38/ATF2途径激活细胞增殖相关靶蛋白cyclin B1、cyclin B2、cyclin A2和Bcl-2,进而促进BRL-3A大鼠肝细胞增殖。 展开更多
关键词 白细胞介素18 毕赤酵母 双水相萃取 细胞增殖 信号通路
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细胞核结构与发生相关基因在大鼠肝再生中表达模式的分析
13
作者 蔺芳 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期310-315,共6页
目的了解大鼠肝再生中细胞核结构与发生相关基因的表达动态。方法用查阅网站资料和相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术组中基因的有意义表达异同,确定肝再生相关... 目的了解大鼠肝再生中细胞核结构与发生相关基因的表达动态。方法用查阅网站资料和相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术组中基因的有意义表达异同,确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中406个基因与肝再生相关。部分肝切除(PH)后,肝再生早期(0.5~4h)、前期(6~12h)、中期(12~66h)、后期(72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为200、29、179和5;基因的总表达次数为374、290、1 876和603。共上调1 224次,下调496次。肝再生前期和中期核形成与发生相关基因表达增强;中期核被膜、核基质和核质相关基因表达增强;中期和后期核染色体、核仁和核功能蛋白复合体相关基因表达增强。结论细胞核结构与发生相关基因在大鼠肝再生中表达活跃,并与肝再生密切相关。 展开更多
关键词 部分肝切除 细胞核结构 发生 肝再生 基因组2302.0芯片 大鼠
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液压转基因技术应用于大鼠肝脏转基因实验 被引量:6
14
作者 徐存拴 邢雪琨 +5 位作者 谢来峰 张明 方方 崔胜男 王磊 张富春 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期103-107,共5页
目的探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法。方法以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP—C1,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备玲冻切片,在波长488nm的荧光显微镜... 目的探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法。方法以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP—C1,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备玲冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况。结果在一次性注射浓度为30mg/L质粒、注射速度为2ml/s、注射体积为大鼠体重9%的条件下,注射pEGFP-C1质粒后6h,绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高,占肝脏总细胞的20%以上,从24h起绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均基本难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞。在上述最佳条件下,绿色荧光蛋白在各肝叶的表达情况是:蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为30%,左叶、中叶、右叶约为20%,尾状叶约为10%。结论液压转基因技术可应用于大鼠肝脏转基因,其适宜条件是:质粒溶液的浓度为30mg/L,注射量为大鼠体重的9%,注射速度为2ml/s,观察转染率的适宜时间是转基因后6~24h。 展开更多
关键词 肝脏 绿色荧光蛋白 液压转基因技术 大鼠
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液压转基因技术应用于大鼠再生肝转基因实验 被引量:6
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作者 徐存拴 邢雪琨 +5 位作者 杨献光 朱秋实 窦磊 刘帅帅 李幼 张富春 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期599-603,共5页
目的探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法。方法以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除(PH),于PH后不同恢复时间称量大鼠体重(g)和再生... 目的探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法。方法以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除(PH),于PH后不同恢复时间称量大鼠体重(g)和再生肝重(g),计算肝系数(Lc),并从Lc±Lc*0%、*5%、*10%、*15%、*20%、*25%、*30%、*35%等15组中找出最佳组,作为计算不同恢复时间再生肝最适注射质粒溶液量的校正系数(Trc);取大鼠肝右叶中部组织制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数1万个细胞中的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率。结果PH后注射生理盐水和注射空质粒对肝再生的影响与对照(只进行PH)相比无显著差异。PH前液压转基因的合适时间是PH前≥12h;PH后所有时间均可进行液压转基因。PH后对肝再生大鼠进行液压转基因的转基因溶液体积为大鼠体重(g)×9%×1/3×相应的校正系数(Trc)。转入基因在体内的表达时间和丰度既受载体影响,又受插入的目的基因影响。结论液压转基因技术亦可有效地应用于大鼠再生肝转基因研究。 展开更多
关键词 肝再生 液压转基因技术 基因表达 大鼠
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大鼠肝再生中细胞周期相关基因表达谱与肝脏细胞增殖活动关系分析 被引量:2
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作者 徐存拴 邵恒熠 +2 位作者 刘慧娟 王文博 胡浩鹏 《自然科学进展》 北大核心 2008年第6期628-639,共12页
肝再生中细胞增殖必不可少.为在基因转录水平了解大鼠肝再生中细胞周期相关基因的表达动态和作用,文中用查阅网站资料和相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中表达情况,用比较真、假手术中基因的... 肝再生中细胞增殖必不可少.为在基因转录水平了解大鼠肝再生中细胞周期相关基因的表达动态和作用,文中用查阅网站资料和相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome 230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中表达情况,用比较真、假手术中基因的有意义表达异同确定肝再生相关基因.初步证实上述基因中290个基因与肝再生相关.其中,肝再生的肝细胞激活期(0.5—4h),G0/G1过渡期(4—6h),肝细胞的第一个细胞周期G1期(6—12h),S期(12—24h),G2期(24—30h)和M期(30—36h),肝细胞的第二个细胞周期(36—66h),细胞分化和组织结构功能重建期(72—168 h)等8个时期起始表达的基因数为148,32,30,92,16,16,14和2;基因总表达次数为307,155,224,484,235,239,824和467.根据基因表达变化推测,肝再生中有38%的细胞周期相关基因的表达谱发生了变化. 展开更多
关键词 部分肝切除 Rat GENOME 230 2.0芯片 细胞周期 肝再生相关基因
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大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:3
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作者 张永晶 谢来峰 +2 位作者 王磊 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第6期670-674,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regen... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞,用RT-PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM.初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 肝星形细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
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作者 王泽 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第8期930-934,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation ... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation 14,CD14)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT-PCR定量窦内皮细胞的CD14和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白.初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 窦内皮细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠胆管上皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
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作者 李永霞 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第7期804-808,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%~90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl ... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%~90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transferase,GGT)和角蛋白19(cyto-keratin19,CK19)免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的胆管上皮细胞,用RT-PCR定量胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA,用蛋白免疫印迹定量胆管上皮细胞的GGT、角蛋白18(cytokeratin 18,CK18).初步证实分离的细胞中GGT和CK19阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离胆管上皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,方便适用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 胆管上皮细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
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作者 丁博 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第11期1377-1381,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌酶(lysozyme,LYZ)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT-PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白.初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 库普弗细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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