国产两性霉素B治疗恶性血液病并发肺部真菌感染38例临床观察

目的：探讨国产两性霉素B对恶性血液病并发肺部真菌感染的疗效和安全性。方法：对河南省肿瘤医院血液科2001年12月～2005年12月期间经微生物学和临床资料证实的38例肺部真菌感染患者，随机分为2组（传统给药组即逐步加量组和改良给药组即起始足量组）接受国产两性霉素B治疗，观察2组疗效及不良反应。结果：38例应用国产两性霉素B患者中有3例因严重药物不良反应停药，其余35例患者比较显示改良给药组达显效时间短于传统给药组，2组问总体疗效及不良反应差异无统计学意义。结论：一开始即给足够剂量的国产两性霉素B治疗恶性血液病并发肺部真菌感染达显效时间短于逐渐加药的给药方法，其不良反应及总体疗效与后者差异无统计学意义。

中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞株K562/VCR耐药性的实验研究

本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂。采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用。结果表明:FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p<0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用。FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响。结论:复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物。

成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞血液血管干细胞特性观察

目的:检测脂肪源Flk1CD31CD34细胞是否具有血液血管干细胞的特性。方法:将脂肪源Flk1CD31-CD34-细胞分别于血管内皮及造血细胞诱导培养体系中培养,采用RT-PCR、免疫组织化学方法检测分析其生物学特性。结果:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞在内皮细胞诱导体系中可分化为CD31+/vWF+细胞,在基底膜胶中可形成血管样结构;在造血诱导培养体系中可定向分化为表达GATA-1、GATA-2、β及γ珠蛋白的细胞,在甲基纤维素造血培养基中,这类造血细胞可定向分化为红系集落单位。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞在体外可同时向血管内皮细胞和造血细胞分化,具有血液血管干细胞的特性。

河南省慢性髓性白血病患者伊马替尼治疗依从性观察及其对12个月时细胞遗传学反应的影响

目的观察2013年3月1日至2015年3月1日就诊河南省肿瘤医院血液科接受伊马替尼（IM）400mg／d治疗的513例慢性髓性白血病慢性期（CML—CP）患者的治疗依从性及其对12个月时细胞遗传学反应的影响。方法513例CML—CP患者均来自河南省，其中参加新型农村合作医疗保险456例，其他医疗保险57例。患者接受IM治疗后，对其进行常规患教，告知其定期复查骨髓象、BCR．ABL融合基因及染色体的重要性。每例患者随访12个月，根据其定期复查情况分别将其纳入依从性好组或依从性差组。通过卡方检验比较两组在12个月时的完全细胞遗传学反应（CCyR）率及Sokal评分危险度分布的差异；并记录患者诊断至开始IM治疗时间、受教育程度、个人年收入、居住地至医院的交通是否便利、年龄、性别等，通过Cox单因素及多因素分析影响12个月CCyR的因素。结果513例CML．CP患者在IM治疗12个月时依从性好组（354例）CCyR率达82．2％，依从性差组（159例）CCyR率为50．9％，差异有统计学意义（P〈0．001）；通过Sokal评分进行危险度分层，依从性好组低、中、高危分别为121、132、101例；依从性差组分别为58、61、40例，两组患者疾病危险度分布的差异无统计学意义（P=0．721）；COX单因素分析示，Sokal评分、年收入、受教育程度、诊断至开始治疗时间、依从性均与12个月时CCyR率显著相关（P值均〈0．05）。Cox多因素分析示：受教育程度低（B=0．457，P=-0．018）、年收入低（B=0．267，P=0．035）及治疗依从性差（B=0．587，P=-0．026）是IM治疗中影响患者12个月时CCyR率的独立危险因素。结论依从性好的CML—CP患者接受IM治疗12个月时获得较好的遗传学反应；低学历、低收入及依从性差是影响患者12个月时CCyR率的独立危险因素。

人脐带和骨髓源间充质干细胞生物学特征的对比研究

为了对比人脐带组织源间充质干细胞(UC-MSC)与骨髓源间充质干细胞(BM-MSC)的生物学特性,从足月胎儿脐带组织和成人骨髓中分离出间充质干细胞(MSC)。用有限稀释法、流式细胞术、倒置显微镜检及RT-PCR等方法检测UC-MSC和BM-MSC的分离成功率、细胞产量、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、增殖特性、免疫表型和多向诱导分化能力等并对比性研究二者的生物学特性。结果表明,UC-MSC和BM-MSC的分离成功率均达100%;虽然由脐带组织中分离的有核细胞数低于骨髓(1×106/cmvs5.5×107/ml)(p=0.0002),但在培养第14天由脐带和骨髓中得到的贴壁细胞数无差异(8.6×105/cmvs8.4×105/ml)(p>0.05);UC-MSC形态、大多数分子表型、细胞周期状态、脂肪和骨诱导分化能力与BM-MSC相似,但UC-MSC的CFU-F比例(1∶1609±0.18)高于BM-MSC的CFU-F比例(1∶35700±0.01)(p<0.05)。此外,UC-MSC具有比BM-MSC更强的增殖能力(p<0.05)。UC-MSCHLA-ABC和CD106分子表达低于BM-MSC(p<0.05)。结论:脐带组织源间充质干细胞产量和绝大多数生物学特征与BM-MSC的相似,且具有比BM-MSC更高的增殖能力、较低的HLA-ABC和HLA-DR表达,UC-MSC有望成为BM-MSC理想的替代来源。

中药复方君子汤对白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响

本研究探讨中药复方君子汤(FFJZ)对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的生物学特点及其可能的作用机制。应用细胞形态学、台盼蓝拒染法观察细胞生长状态;四氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果表明:一定浓度范围的FFJZ作用于K562细胞后,随FFJZ药物浓度的升高其对K562细胞生长的抑制率明显增加(p<0.01),其半数抑制浓度(IC50)约为5.6mg/ml。在FFJZ浓度为4mg/ml时,细胞凋亡以早期凋亡为主,而至8mg/ml组时晚期凋亡比例显著增多,与未加药组比较有显著差异(p<0.01)。结论:在体外FFJZ一定浓度范围内可以抑制白血病K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

用单倍体相合小鼠FBL-3红白血病细胞株移植建立CB6F1小鼠红白血病模型

本研究探讨建立F1代单倍体相合小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察FBL-3细胞在小鼠体内的生物学特性。将FBL-3H2-d小鼠红白血病细胞经尾静脉分别接种给小鼠C57BL/6和CB6F1H-2b/d(C57BL/6×BALB/c),观察两种小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电子显微镜检查。分析骨髓和脾脏细胞染色体核型及MHC分子表达情况。结果表明:静脉接种103-107个白血病细胞的情况下,C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠发病率分别为100%和92.5%;接种的细胞数量与存活时间呈线性关系;接种相同数量FBL-3细胞的CB6F1小鼠平均生存时间较C57BL/6小鼠延长。白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均为阴性。电子显微镜观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,且H-2b表达率升高,H-2d表达率降低。结论:经尾静脉接种FBL-3细胞可以建立CB6F1小鼠红白血病模型。

热疗提高RPMI 8226细胞对阿霉素敏感性的实验研究

本研究探讨热疗对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226化疗敏感性的影响及其可能机制。用MTT法确定阿霉素的工作浓度。RPMI8226细胞分为对照组、热疗组(42℃)、化疗组(ADM)、热化疗组(42℃+ADM)并分别对其进行相应的处理。48小时后采用台盼蓝拒染法检测各组细胞的存活率,MTT检测热疗对肿瘤细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、细胞内阿霉素浓度和细胞表面P-gp蛋白的表达情况。以作用48小时的1/4IC50值作为实验的工作浓度。结果表明,热疗促进G0/G1期细胞进入S期和G2/M期;热疗组和热化疗组细胞表面P-gp蛋白表达减低;热化疗组细胞内的ADM浓度明显增加。结论 :热疗与阿霉素联合对RPMI8226细胞增殖有明显的抑制作用。热疗通过降低细胞表面P-gp蛋白的表达水平和增加细胞内阿霉素的药物浓度,提高RPMI8226细胞对化疗的敏感性。

移植性C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的建立及其生物学特性

目的探讨利用国内传代培养的FBL-3细胞建立H-2相合C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察模型的生物学特性。方法把FBL-3小鼠红白血病细胞经尾静脉接种C57BL/6小鼠,观察小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电镜检查。结果静脉接种1×10^3-1×10^7个白血病细胞,C57BL/6小鼠发病率分别为100%;接种细胞的数量与存活时间呈线性关系;白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均阴性。电镜下观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,只表达H-2b。结论经尾静脉接种FBL-3细胞可建立C57BL/6小鼠红白血病模型。

替尼泊甙、阿糖胞苷化疗联合鞘内注射治疗中枢神经系统白血病

目的探讨以替尼泊甙、阿糖胞苷的联合化疗方案配合氨甲喋呤（MTX）椎管内注射治疗中枢神经系统白血病的疗效。方法联合应用替尼泊甙、中剂量阿糖胞苷的化疗方案配合氨甲喋呤、地塞米松椎管内化疗。结果16例病人（73％）在化疗同时行2～3次鞘内注射后脑脊液即恢复正常且临床症状恢复，2例（9％）病人脑脊液恢复正常后临床症状未能完全恢复，4例（18％）直接给予全身化疗，化疗后其中3例临床症状恢复，1例骨髓抑制较重、体质较差并发感染死亡。结论替尼泊甙、阿糖胞苷的联合化疗方案配合氨甲喋呤（MTX）椎管内注射治疗中枢神经系统白血病，疗效显著。

再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞转化生长因子β1及Smad3表达下调的发病学意义

目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)中转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad3的表达下调与再生障碍性贫血(再障)发生的可能关系。方法取20例重型再障患者骨髓MSC,分离制备出Flk1+CD34–MSC后进行以下试验:①体外定向诱导MSC向脂肪细胞分化,倒置显微镜观察成脂分化情况,油红O染色法鉴定脂肪细胞,用实时荧光定量PCR检测分化过程中脂蛋白酯酶(LPL)基因的表达;②用蛋白质印迹法检测MSC中TGF-β1及Smad3的表达,用ELISA检测MSC分泌TGF-β1的能力;③观察不同剂量(0、5、10、15、20ng/ml)TGF-β1对再障患者骨髓MSC成脂分化和增殖的影响。以7名健康成人的骨髓MSC相应检测为对照。结果再障患者骨髓MSC经4d培养后即分化为脂肪细胞,而健康成人骨髓MSC中仅见少量细胞出现脂肪滴。再障患者MSC培养4和8d时LPL基因表达水平分别为0.091±0.028、0.142±0.033,均高于健康成人骨髓MSC(分别为0.021±0.011及0.049±0.010,均P<0.01);而TGF-β1及Smad3表达水平明显低于健康成人骨髓MSC,TGF-β1分泌水平(3.4μg/L±0.9μg/L)也明显低于健康成人骨髓MSC(11.6μg/L±1.2μg/L,P<0.01)。在向脂肪细胞分化过程中,仅加入5ng/ml的TGF-β1即可明显抑制再障患者骨髓MSC向脂肪细胞定向诱导分化,同时促进其增殖。结论再障患者骨髓MSC中TGF-β1及Smad3表达水平的显著下调可能参与了再障的部分发病环节。

非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷小鼠体内成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞的多向分化

目的:探讨成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞用于移植的可能性。方法:将男性成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞按106个/只剂量经尾静脉输入10只6～8周龄、接受亚致死剂量射线照射的非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内(实验组),对照组10只输注等体积的RPMI1640培养基,2个月后处死动物,检测植入情况。结果:在实验组小鼠体内,脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞不仅有助于造血重建及体内微血管损伤的修复,参与血管新生,还能分化为消化道上皮细胞;而对照组小鼠则在2周内全部死亡。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞极有可能成为一种理想的种子细胞用于移植。

Ly49C基因SiRNA对小鼠NK细胞抗白血病活性的影响

目的:观察SiRNA转染小鼠KIR(Ly49C)基因对NK细胞抗白血病活性的影响。方法:应用免疫磁珠分选法纯化C57BL/6小鼠脾细胞中的NK细胞,体外化学合成以Ly49C基因为靶标的SiRNA,联合用脂质体转染小鼠NK细胞,以未处理组为对照,流式细胞仪检测在SiRNA转染后淋巴细胞表面Ly49C分子的表达率。以空转染和未转染的NK细胞作对照,LDH法检测转染后NK细胞对红白血病细胞FBL-3的的杀伤活性。结果:免疫磁珠分选后NK细胞纯度可达90%以上。Ly49C基因SiRNA转染小鼠NK细胞48 h后Ly49C分子表达率为(30.28±1.41)%,未转染对照组为(58.45±3.32)%。相同效靶比时,转染组NK细胞杀伤活性较未转染组显著提高,二者之间差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:转染Ly49C SiRNA的C57 BL/6小鼠NK细胞对FBL-3细胞的杀伤活性明显增强,为提高异基因骨髓移植后移植物抗白血病作用提供了实验依据。

不同方法检测同种异基因造血干细胞移植受者巨细胞病毒感染的探讨

本研究探讨同种异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后早期有效检测巨细胞病毒(CMV)感染的方法。应用荧光定量PCR和ELISA试剂盒分别检测19名allo-HSCT受者,214份标本的血浆DNA负荷量和血清IgM抗体,同时应用流式细胞术检测188份标本白细胞pp65抗原。结果表明:pp65抗原、DNA定量和IgM抗体的阳性检出率分别为30.85%(58/188)、35.51%(76/214)和13.08%(28/214),连续阳性病例和临床诊断的符合率分别为7/8、7/8和3/8。DNA定量与pp65抗原阳性检出率的差别无统计学意义(P>0.05),但两种检测方法有明显的相关性(P<0.05)。IgM抗体阳性检出率明显低于DNA定量和pp65抗原,其差别均有统计学意义(P<0.05),与另两种检测方法虽有关系,但不密切。结论:流式细胞术和荧光定量PCR检测allo-HSCT受者CMV早期感染可靠、简便快速,值得临床推广使用。

PX-12促进硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞H929凋亡的实验研究

目的:研究PX-12对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响及机制。方法:以MM细胞株H929细胞为研究对象,将细胞分为PX-12组、硼替佐米组、联合组和对照组,分别加入单药PX-125.0μmol/L、单药硼替佐米20 nmol/L、两药联合和DMSO对照,培养24、48及72 h后观察细胞活性变化,通过MTT法检测MM细胞活性,采用流式细胞术检测各组细胞周期分布和凋亡情况,H2DCFDA探针标记法测定各组细胞内ROS水平。结果:培养72 h后,PX-12组和硼替佐米组的H929细胞活性均明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),而联合组的细胞活性下降最为显著,且明显低于其他3组(P<0.01)。PX-12组细胞在培养48 h后,G1期的细胞数下降至40%,而S期和G2/M期数目分别上升至28%和40%,硼替佐米组细胞作用后也出现类似的分布现象,而联合组细胞经过PX-12和硼替佐米共同作用后,G1期的细胞明显下降至19%,S期细胞也降至12%,但G2/M期细胞明显上升至68%,与PX-12组和硼替佐米组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。培养72 h后,联合组细胞凋亡率达71.3%,显著高于PX-12组、硼替佐米组和对照组(20.6%、33.3%和10.6%)(P<0.01)。培养24 h后,联合组细胞内ROS水平为12015±430.2,分别高于PX-12组、硼替佐米组和对照组(6729±352.8、2651±228.3和1098±164.6)(P<0.01)。结论:PX-12可以促使硼替佐米诱导MM细胞H929凋亡增加,可能是通过ROS水平升高而导致凋亡增加。

第58届美国血液病年会关于慢性粒细胞白血病的研究精选

自酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors,TKI）问世后,越来越多的慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）患者从中获益,且生活质量明显改善。但目前面临的不耐受、耐药、疾病进展、停药等问题,仍时刻使临床医师困惑。前不久召开的第58届美国血液病年会中,详细报道了CML相关的研究新进展,本文将其中的研究热点总结如下。

丹参注射液预防肝静脉闭塞症临床研究

目的:探讨预防造血干细胞移植(HSCT)后肝静脉闭塞症(HVOD)的有效方法。方法:对315例患者从预处理开始的体重、腹痛并肝大、腹水、总胆红素、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)等指标进行动态观察并分析结果。结果:仅2例发生HVOD。结论:丹参注射液可以有效地预防HVOD的发生。