左、右半结肠癌PD-L1表达、MSI状态、KRAS突变及临床病理特征的差异

目的:探讨左半结肠癌、右半结肠癌程序性死亡因子配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达、微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)基因突变以及临床病理特征的差异。方法:收集2021年1月至12月郑州大学附属肿瘤医院临床病理中心723例结直肠癌患者的临床病理与分子检测资料进行回顾性分析;采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测MSI、KRAS基因突变,免疫组织化学法评估PD-L1蛋白表达。结果:在723例结直肠癌中,左半结肠癌521例,右半结肠癌202例。相较于左半结肠癌,右半结肠癌具有女性多发、浸润深度更深、分化更差的特点(均P<0.05);同时,右半结肠癌MSI发生率显著高于左半结肠癌(P<0.001),且PD-L1的联合阳性分数也显著高于左半结肠癌(P=0.022)。此外,左、右半结肠癌在年龄、淋巴转移、脉管癌栓、神经侵犯和KRAS基因突变等方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:左半结肠癌、右半结肠癌的临床病理特征、MSI状态及PD-L1表达均存在显著差异,提示左、右半结肠癌可能是两种不同的肿瘤。

肿瘤浸润淋巴细胞在胆管癌中的作用

胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)是最常见的原发于胆道系统的恶性上皮性肿瘤,由于缺乏系统有效的治疗,通常生存率较低,预后较差。作为肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)重要的一类免疫细胞,肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)是人体进行免疫应答的重要组成成分,深入了解CCA的TME中TILs与肿瘤细胞的相互作用,对肿瘤免疫治疗效果和预后具有重要意义。CCA不同的病理学亚型在生物学行为及临床预后方面存在差异,同时TILs的组成、分布、时空表达特点也会影响患者免疫治疗效果及预后。在CCA中,CD8^(+)T和CD4^(+)T淋巴细胞大多隔离在肿瘤周围,CD20^(+)B淋巴细胞和自然杀伤(natural killer,NK)细胞数量较少。浸润在肿瘤中的调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)通常与免疫逃逸相关。进一步全面分析CCA各个病理学亚型中的TILs在肿瘤内部、浸润边缘、肿瘤周边等区域的表达规律,有助于探究基于CCA病理分型的相关免疫治疗。TILs评估方式有多种,基于CCA的苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色切片进行TILs的标准化半定量评估可适用于大规模临床试验以及日常病理实践。对CCA中TILs进行研究将为CCA免疫治疗及TME的进一步探究提供重要参考。

miR-23b-3p对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响

目的:探讨miR-23b-3p对结直肠癌奥沙利铂(OXA)化疗敏感性的影响。方法:选取68例行结直肠癌根治术并实施OXA同种联合化疗的患者,根据实体瘤疗效评价标准分为耐药组(n=32)和非耐药组(n=36)。采用qPCR技术检测两组患者血清及人结直肠癌细胞株(SW620)、OXA耐药株(SW620/OXA)中miR-23b-3p表达水平。比较miR-23b-3p高、低表达组患者的生存率。采用双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p与HMGB2的靶向关系。SW620/OXA细胞按实验Ⅰ分为空白对照组、miR-23b-3p mimic组、mimic-NC组,按实验Ⅱ分为sh-NC组、sh-HMGB2组和sh-HMGB2+miR-23b-3p抑制剂组。采用CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,另根据OXA细胞毒性实验计算半数抑制浓度(IC50);采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率;采用Western blot检测各组细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:与非耐药组比较,耐药组血清miR-23b-3p表达水平降低;与SW620细胞比较,SW620/OXA细胞中miR-23b-3p表达水平降低(P<0.05)。miR-23b-3p高表达组的生存率高于miR-23b-3p低表达组(P<0.001)。双荧光素酶报告实验证实miR-23b-3p靶向调控HMGB2的表达。过表达miR-23b-3p或抑制HMGB2的表达能有效抑制SW620/OXA细胞增殖,降低OXA杀伤细胞的IC50,促进细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白的表达;但同时抑制HMGB2和miR-23b-3p的表达则能促进SW620/OXA细胞增殖,降低细胞对OXA的化疗敏感性,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-23b-3p过表达可逆转结直肠癌SW620/OXA细胞对OXA的化疗耐药性,其机制可能与靶向下调HMGB2的表达有关。

胃SWI/SNF复合体缺失的伴横纹肌样特征未分化癌临床病理学及分子特征

目的探讨胃SWI/SNF复合体缺失的伴横纹肌样特征未分化癌的临床病理学和分子遗传学特征。方法收集河南省肿瘤医院2019年1月至2021年12月诊断胃SWI/SNF复合体缺失的伴横纹肌样特征未分化癌6例, 对其进行组织学观察、免疫组织化学染色及二代测序, 并行错配修复(MMR)蛋白、EB病毒编码的RNA(EBER)、HER2检测, 总结其临床病理及分子特点, 进行相关文献复习。结果 6例患者均为男性, 年龄48~75岁, 首发症状主要为腹痛、黑便、吞咽不利, 内镜提示胃部溃疡型肿物, 镜下形态相似:肿瘤细胞呈弥漫浸润性生长, 细胞异型性明显, 核分裂象易见, 并可见到比例不等的丰富嗜酸性胞质呈横纹肌样形态细胞。免疫组织化学3例广谱细胞角蛋白(CKpan)为阴性, 但其他上皮标志物如上皮细胞膜抗原(EMA, 6/6)、细胞角蛋白(CK)8/18(4/6)、CK7(1/6)可见灶性区阳性表达;p53蛋白4例弥漫强阳性(4/6), 1例为阴性(1/6);Ki-67阳性指数60%~90%。其他间叶源性肿瘤、淋巴造血系统肿瘤、色素细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤等相关标志物均为阴性表达。SWI/SNF复合体亚基检测, 即INI1(SMARCB1)、BRG1(SMARCA4)、ARID1A蛋白检测, 5例为SMARCA4缺失表达(5/6), 1例为ARID1A缺失表达(1/6), 所有病例SMARCB1均未缺失;进行MMR检测, 其中1例为MMR缺陷。3例HER2表达为0(3/6), 1例为1+(1/6), 2例为2+(2/6), 行荧光原位杂交(FISH)检测HER2基因均无扩增;6例患者EBER均为阴性。4例手术根治标本行二代测序, 3例检测到TP53突变(3/4), 1例检测到ARID1A基因移码缺失突变, 同时存在ATM、PTEN等突变, 1例检测到SMARCA4基因拷贝数变异, 同时存在ALK、BRAF、CDKN1B、BRCA2等基因突变。结论胃SWI/SNF复合体缺失的伴横纹肌样特征未分化癌是一种分化极差且罕见的肿瘤, 进行SWI/SNF复合体相关蛋白检测有助于诊断, 与SWI/SNF复合体相关的基因改变将成为以后诊断、预后评估的新指标以及潜在的分子治疗新靶点, 值得进一步关注。

CXCR4拮抗剂AMD3100通过增强抑制性神经传递减弱大鼠痫性活动

目的探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法(1)动物实验:36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组,每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型,剂量为40 mg/kg;AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5μL(5 mg/mL)AMD310020 min后腹腔注射同等剂量PTZ;对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期,采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况,采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位(GABA_(A)Rα1)mRNA水平。(2)细胞实验:另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元,培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型;AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h,随后换为Neurobasal继续培养;对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。结果(1)动物实验:AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84)s、(164.40±17.20)s],差异有统计学意义(t=6.490,P<0.001);AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次],差异有统计学意义(t=4.680,P<0.001)。ELISA实验结果显示,3组大鼠GABA含量差异有统计学意义(F=17.850,P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,3组大鼠GABA_(A)Rα1 mRNA含量差异有统计学意义(F=14.400,P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均有统计学意义(P<0.05)。EEG结果显示,与癫痫组大鼠比较,AMD3100处理组大鼠放电频率有所降低。3组大鼠EEG功率差异无统计学意义(F=3.220,P=0.062),但与癫痫组、对照组大鼠比较,AMD3100处理组大鼠EEG功率有所降低。(2)细胞实验:膜片钳技术检测结果显示,3组神经元sIPSCs的频率和波幅差异均有统计学意义(F=13.670,P<0.001;F=10.920,P<0.001)。与对照组、癫痫组比较,AMD3100处理组神经元sIPSCs的频率和波幅均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CXCR4拮抗剂AMD3100可通过增强抑制性神经传递降低癫痫发作频率。