Xanthomonas oryzae pv.oryzae LAMP可视化检测方法的建立

由Xanthomonas oryzae pv.oryzae引起的水稻白叶枯病严重影响我国水稻安全生产,尤其在杂交稻上,损失高达40%~60%,在水稻种子市场监管过程中由于缺乏快速检测手段,造成带菌种子在市场中流通。利用SYBR Green I作为荧光指示剂,建立了水稻白叶枯病菌的环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。以水稻白叶枯病菌为对象,通过Primer Explorer V4.0软件一共设计出四条特异性的LAMP引物以及两条环引物,优化并建立了水稻白叶枯病菌的可视化快速检测方法。结果表明:在65℃恒温条件下反应1 h,LAMP检测特异性和灵敏度,加入SYBR Green I荧光染料,水稻白叶枯病菌呈现荧光绿色,对照菌株则保持不变,依然呈橙色。LAMP反应检测灵敏度DNA的浓度大小为为100 fg/μL,菌悬液为3×103 cfu/mL。应用LAMP技术检测水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae具有特异性强、灵敏度高、操作简单快捷的特点,可用于市场监管过程中快速检测水稻白叶枯病菌。