核孤儿受体Nur77促进α-突触核蛋白自噬性降解在帕金森病中的作用

目的研究帕金森病(PD)细胞模型中,核孤儿受体Nur77激动剂真菌聚酮(Csn-B)对帕金森病神经细胞产生保护作用。方法将细胞分为空白组、对照组(Csn-B组)、模型组(MPP^+组)和实验组(MPP^++Csn-B组)。通过噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖影响;用Western blotting法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/Ⅰ和α-synuclein蛋白表达情况;用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测LC3和α-synuclein mRNA表达情况;用免疫荧光观察LC3和α-synuclein蛋白在各组细胞内的表达情况。结果随着MPP^+浓度增高,其对SH-SY5Y细胞的抑制作用逐渐增强,抑制作用与浓度呈剂量依赖性。Western blotting结果显示,空白组、对照组、模型组和实验组LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白分别为0.21±0.02,0.23±0.03,0.32±0.03,0.69±0.05,模型组、实验组明显高于空白组(P<0.01),实验组明显高于模型组(P<0.01);空白组、对照组、模型组和实验组α-synuclein分别为0.30±0.05,0.51±0.06,2.18±0.12,0.73±0.08,模型组、实验组明显高于空白对照组(P<0.01),实验组明显低于模型组(P<0.01)。qPCR显示,空白组、对照组、模型组和实验组LC3 mRNA分别为3.94±0.18,4.04±0.13,6.01±0.21,7.43±0.35,模型组、实验组明显高于空白组(P<0.01),实验组明显高于模型组(P<0.01);空白组、对照组、模型组和实验组α-synuclein mRNA 3.09±0.19,3.47±0.24,7.18±0.30,4.60±0.27,模型组、实验组明显高于空白组(P<0.01),实验组α-synuclein明显低于模型组(P<0.01)。免疫荧光可见LC3蛋白主要定位在细胞质,模型组、实验组LC3表达量明显高于空白组,实验组LC3表达量高于模型组;α-synuclein蛋白在细胞质和细胞核中均匀分布,模型组、实验组表达量高于空白组,实验组表达量低于模型组。结论在帕金森病的细胞模型中,Nur77激动剂可以促进α-synuclein的降解,其机制可能与增加自噬水平有关。