弗氏柠檬酸杆菌对动物和人致病性研究进展

弗氏柠檬酸杆菌在自然界广泛分布,是一种典型的人-畜-鱼共患病条件性致病菌,一般情况下不引起动物和人发病。近年来,陆续有报道弗氏柠檬酸杆菌强毒株也能引起动物败血症甚至急性死亡,且对水产动物的致病报道较多。人类可因弗氏柠檬酸杆菌感染而发生腹泻、食物中毒和继发感染。弗氏柠檬酸杆菌引起动物和人感染时有携带如β-内酰胺酶等新型耐药基因的可能,且发现有cfa、ST和SLT等多种毒力因子。综合研究表明弗氏柠檬酸杆菌可能是一种尚未被人们充分认识的病原菌,且有危害加重的趋势。因此,在动物和人类疾病防治中不能忽视弗氏柠檬酸杆菌。论文主要阐述了弗氏柠檬酸杆菌对动物和人的致病性方面取得的进展,旨在引起研究者对弗氏柠檬酸杆菌致病性的重视,并展望了弗氏柠檬酸杆菌未来研究的方向。

支气管败血波氏杆菌dnt基因的克隆、表达及活性鉴定

通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。

百日咳杆菌粘附素中针对支气管败血波氏杆菌的保护性抗原肽的筛选

【目的】本研究通过百日咳杆菌黏附素（PRN）基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。【方法和结果】利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RⅠ和RⅡ区域多肽（双拷贝）的表达,命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC、GST-2PRⅠ和GST-2PRⅡ。Westernblot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3LD50的支气管败血波氏杆菌（Bb）强毒株HH0809进行鼻腔攻击后,GST-2PRⅠ的保护率为66.7%（6/9）,其余4者的保护率均为100%（9/9）;当使用10LD50的HH0809攻击时,其保护率分别为77.8%（7/9）、33.3%（3/9）、66.7%（6/9）、10%（1/10）和60%（6/10）。在被动免疫保护试验中,当使用10LD50的HH0809进行腹腔攻击时,GST-2PRⅠ抗血清对小鼠的保护率为20%（2/10）,其余4者的保护率均为100%（10/10）;但经天然PRN吸附后的5种兔抗血清均无任何保护力（0/5）。【结论】本研究表明PRN的N端和C端表达多肽均具有较强的针对Bb的保护力,且C端强于N端;而C端RⅡ区域的保护力也显著强于N端RⅠ区域。