壁虎醇提物诱导人喉癌细胞Hep2凋亡的实验研究

本文研究了壁虎乙醇提取物(GEE)诱导Hep2细胞凋亡的作用。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测了GEE对Hep2细胞增殖的抑制作用,发现GEE可呈剂量-时间依赖性的抑制Hep2细胞的增殖,GEE作用24、48、72 h后其IC50值分别为336.858、237.949、188.991μg/mL。Hoechst 33258荧光染色后在显微镜下可观察到Hep2细胞发生了典型凋亡的形态学变化;利用Western blot法证实在Hep2细胞中GEE可诱导caspase-3和抑制VEGF蛋白的表达。这些结果表明GEE可能是通过上调Caspase-3和下调VEGF蛋白的表达诱导Hep2细胞的凋亡。

壁虎粗多肽诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的机制研究

目的:体外实验研究壁虎粗多肽(Gecko Crude Peptides,GCPS)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的机制。方法:采用MTT法检测GCPS对肝癌细胞HepG2增殖的影响;采用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,western-blot检测BAX和BCL-2蛋白的表达,观察壁虎粗多肽对人肝癌细胞凋亡的影响。结果:GCPS可以抑制肝癌细胞HepG2增殖,作用呈浓度和时间依赖性,其IC50为1.2 mg/mL;在GCPS的作用下,HepG2呈凋亡形态学改变,且GCPS(1.6 mg/mL、0.8 mg/mL)可以降低bcl-2的表达,升高蛋白bax的表达。结论:GCPS对HepG2细胞有增殖抑制作用,诱导其凋亡是其作用机理之一。

褪黑素受体激动剂Neu-P11对兔眼组织AQP1表达的影响

水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在眼内组织分布较广，其与房水的分泌、排出及调节关系密切；褪黑素受体激动剂5-MCA—NAT能降低实验兔眼压；Neu-P11是一种高效的非选择性褪黑素受体激动剂，能激活褪黑素受体，从而起到类似褪黑素的作用；

壁虎醇提取物对小鼠肾包膜下移植H22肝癌的抑制作用

目的研究壁虎乙醇提取物(GEE)在肾包膜下移植H22肝癌小鼠中的抗肿瘤作用。方法建立肾包膜下移植H22肝癌模型,连续腹腔注射GEE 6 d后,计算抑瘤率、胸腺和脾脏指数;观察各瘤组织的病理学变化并检测血清中白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果 GEE高、中、低组抑瘤率分别为81.08%、72.67%、54.18%;各用药组中肿瘤组织有不同程度的坏死且GEE能降低血清中IL-6和升高TNF-α蛋白的含量。结论升高TNF-α和降低IL-6蛋白的表达可能是GEE发挥抗肿瘤作用的两种途径。

蜗牛多肽提取物对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞脑源性神经营养因子表达的影响

目的研究蜗牛多肽提取物对H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤的抑制作用。方法采用醋酸沉淀法提取蜗牛多肽,在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤的基础上加入不同浓度的蜗牛多肽提取物,MTT法测定细胞存活率;细胞免疫化学技术和Western印迹技术分别检测脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol/L H2O2可引起SH-SY5Y细胞存活率下降,BDNF的表达明显降低;39 mg/L和156 mg/L蜗牛多肽提取物对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的存活率有显著地提高作用(P<0.05),BDNF的表达也呈浓度依赖性升高(P<0.01)。结论蜗牛多肽提取物对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞有保护作用,机制可能是通过上调BDNF的表达。

褪黑素受体激动剂Neu-P11促进兔眼组织AQP1的表达

目的观察褪黑素受体激动剂Neu-P11对眼压的影响以及水通道蛋白1(aquaporin protein 1,AQP1)在正常眼压兔眼组织中的表达,探讨药物Neu-P11降低眼压的作用以及其与AQP1的相关性。方法雄性新西兰大白兔30只(60眼),分为正常对照组和Neu-P11组,每组各15只(30眼)。采用局部麻醉下双眼局部点眼法,50μmol·L-1Neu-P11点眼,每3 d做一次眼压测量实验。1个月后处死动物,留取包含角膜、虹膜、睫状体、房角及前部巩膜的眼前段组织,用RT-PCR、免疫组织化学和Western blot技术检测AQP1转录和蛋白表达。结果与正常对照组比较,Neu-P11组在局部用50μmol·L-1Neu-P11点眼后0.5 h(t=3.990,P=0.004)、1 h(t=5.704,P=0.000)、2 h(t=7.393,P=0.000)、3 h(t=4.445,P=0.002)、4 h(t=2.869,P=0.021)眼压明显下降,差异均有统计学意义。50μmol·L-1Neu-P11点眼,可使兔眼压降低,1 h达到最低(11.99±2.45)mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),与用药前比较差异有显著统计学意义(P=0.000),6 h后恢复正常水平(18.66±2.42)mmHg(P=0.365)。免疫组织化学染色结果显示:正常对照组AQP1仅分布于睫状体非色素上皮细胞、虹膜色素上皮细胞等少数细胞胞质和胞浆中,而Neu-P11组角膜内皮细胞、虹膜基质血管内皮细胞和色素上皮细胞、睫状体非色素上皮细胞、小梁网组织细胞和Schlemm管的胞膜和胞浆均可见阳性表达颗粒,且阳性反应细胞数明显增多。Neu-P11组较正常对照组眼前节组织AQP1 mRNA表达上调,AQP1蛋白表达增高(为正常对照组的3.77倍),两组差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论褪黑素受体激动剂Neu-P11能够降低兔眼压,并能够使兔眼组织中AQP1的表达增高。

蜗牛多肽混合物对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞PCNA表达的影响

采用H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞损伤,MTT法测定细胞存活率,不同浓度蜗牛多肽混合物(SPM)处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡,细胞免疫化学技术和Western blot技术检测细胞PCNA的表达。结果发现1.54 mmol/L H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,PCNA的表达明显降低。经用39 mg/L(SPM-L组)和156 mg/L(SPM-H组)浓度的SPM处理后,SH-SY5Y细胞凋亡明显减少(H2O2VS.SPM-L:58.39±8.67%VS.44.06±4.35%,P<0.05;H2O2VS.SPM-H:58.39±8.67%VS.32.45±9.44%,P<0.01),同时PCNA的表达呈浓度依赖性升高。提示SPM可抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA的表达有关。

角膜塑形镜对青少年近视患者角膜形态变化的短期影响

目的：观察日戴和夜戴角膜塑形镜片的临床应用情况,评价角膜塑形术矫治青少年轻中度近视的安全性及有效性,分析其相关因素。方法：收集2012/2014年配戴角膜塑形镜的青少年近视患者45例89眼,年龄9-20岁,屈光度≤-6.00D,顺规散光≤-1.50D,逆规散光≤-0.75D。随机分成两组,日戴组29眼,夜戴组60眼,戴镜时间8-10h,检查戴镜后1wk;1,3,6mo患者裸眼视力、残余屈光度、角膜中央厚度及角膜曲率的变化情况,观察角膜有无损伤、感染等并发症。结果：戴镜1wk后,裸眼视力明显提高,残余屈光度明显降低,与戴镜前比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）;角膜曲率明显变平坦,平均K值从42.28±1.13D下降为40.79±1.26D（日戴组）,42.18±1.03D下降为40.35±0.99D（夜戴组）,差异均有显著统计学意义（P〈0.05）,而1,3,6mo与1wk比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。戴镜1mo后角膜中央厚度变薄最为显著,与戴镜前比较分别下降了7.26±1.38μm（日戴组）和15.15±0.50μm（夜戴组）,差异均有显著统计学意义（P〈0.01）;戴镜后角膜上皮染色阳性数增加,分别为9眼（31%,日戴组）和28眼（47%,夜戴组）。结论：角膜塑形镜能有效降低近视度,显著提高裸眼视力;但不能忽视验配带来的风险,应以规范的验配流程、熟练的验配技术提高配戴的安全性。

DNA修复基因XPC多态性与乳腺癌易感性关系的Meta分析

目的利用Meta分析探讨DNA修复基因着色性干皮病基因组C(XPC)Ala499Val多态性与乳腺癌易感性的关系。方法通过Pub Med、Embase、Web of Science和中国生物医学文献数据库,检索XPC基因多态性与乳腺癌易感性相关的文献。由2位研究者独立筛选文献并提取相关数据资料,采用STATA 12.0软件进行Meta分析。结果按照纳入标准,最终纳入Meta分析的研究有9项。Meta分析结果显示:XPC Ala499Val在纯合子模型[(Val/Val)vs(Ala/Ala)]和隐性模型[(Val/Val)vs(Ala/Val+Ala/Ala)]下与乳腺癌易感性之间存在相关性(纯合子模型:OR=1.21,95%CI:1.02~1.45;隐性模型:OR=1.23,95%CI:1.05~1.43)。结论 XPC Ala499Val多态性与乳腺癌易感性之间存在相关,但上述结论尚需要大样本量的研究予以验证。

褪黑素受体激动剂(Neu-P11)对兔眼压降低的实验研究

目的观察褪黑素受体激动剂(Neu-P11)对眼压的影响以及水通道蛋白1在正常眼压兔眼组织中的表达。方法新西兰兔30只随机分为对照组、褪黑素组和Neu-P11组。用局部点眼法,1个月后处死动物,取眼前段组织;用免疫组化法、RT-PCR法和Western blot法检测。结果 50μmol·L-1Neu-P11点眼,可使兔眼压降低,1 h达到最低(P<0.01)。Neu-P11组和褪黑素组,角膜内皮、虹膜基质血管和色素上皮细胞、睫状体非色素上皮以及小梁网组织细胞的胞膜和胞浆均可见阳性表达,且阳性反应数明显增多。Neu-P11组和褪黑素组AQP1mRNA和蛋白质水平较对照组上调,且Neu-P11组比褪黑素组更高,2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Neu-P11能够降低兔眼压,并能够使兔眼组织中AQP1的表达增高。

2型糖尿病大鼠氧化应激与骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4转位相关性的研究

目的研究2型糖尿病大鼠氧化应激与骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4转位间的相关性。方法雄性SD大鼠40只,按照体重随机分为模型组、对照组和正常组。采用左下腹注射链脲佐菌素(STZ)50 mg·kg^(-1)并结合高脂高糖饮食,制备2型糖尿病大鼠模型。对照组和正常组,注射相同剂量的柠檬酸缓冲液,对照组喂以高脂高糖饲料,正常组喂以普通饲料。3个月后,处死各组动物,心脏取血,分离血清,以正常组和对照组作为对照,检测模型组各项生化指标和氧化应激指标;用免疫印迹法检测骨骼肌细胞GLUT4的转位。结果正常组和模型组的空腹血糖分别为(5.59±1.04),(36.68±11.95)mmol·L^(-1)、三酰甘油分别为(0.86±0.54),(2.73±2.13)mmol·L^(-1)、总胆固醇分别为(1.65±0.29),(3.08±1.35)mmol·L^(-1)、空腹胰岛素分别为(18.09±3.41),(133.68±42.87)m U·L^(-1)、CAT分别为(24.25±2.17),(5.96±2.69)U·mg^(-1)protein、MDA分别为(6.12±1.25),(20.25±0.71)nmol·mg^(-1)protein、Mn-SOD分别为(40.96±1.24),(35.58±1.44)U·mg^(-1)protein、GSH-PX分别为(366.05±29.95),(297.65±10.39)U·mg^(-1)protein,模型组大鼠各项生化指标和氧化应激水平与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。模型组、对照组和正常组大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达水平分别为1.03±0.02,0.42±0.13,0.18±0.05,模型组和对照组大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达水平与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠的骨骼肌细胞膜GLUT4含量与CAT之间的相关系数为0.815(P<0.01),与MDA之间的相关系数为-0.798(P<0.01),与Mn-SOD之间的相关系数为0.799(P<0.01),与GSH之间的相关系数为0.752(P<0.01)。结论氧化应激对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞GLUT4转位有抑制作用,并且胞膜GLUT4表达水平与氧化应激存在相关性。

蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。

比较HMS5552和二甲双胍对2型糖尿病大鼠血糖及肝葡萄糖激酶的调节作用

目的研究二甲双胍对比HMS5552对2型糖尿病大鼠血糖及肝葡萄糖激酶的调节作用。方法以高脂高糖饮食和加一次性注射链脲佐菌素40mg·kg^(-1)诱导建立2型糖尿病大鼠模型。建模后,实验组大鼠灌胃HMS5552 30mg·kg^(-1),对照组灌胃二甲双胍80 mg·kg^(-1),正常组和模型组灌胃等体积0.9%Na Cl。连续给药4周,做口服葡萄糖耐量实验后,处死大鼠,心脏采血,检测各项生化指标。用免疫印迹法检测肝葡萄糖激酶(GCK)的蛋白水平。结果给药后,模型组、对照组和实验组在60,90 min血糖浓度分别为(27.27±3.48),(21.47±2.89),(23.67±5.75)mmol·L^(-1);(33.30±4.87),(20.72±3.34),(23.13±4.02)mmol·L^(-1);这3组的空腹血糖分别为(17.39±1.33),(7.23±0.61),(9.16±1.76)mmol·L^(-1);这3组的空腹胰高血糖素分别为(152.85±11.42),(64.76±13.62),(64.64±5.30)mmol·L^(-1),对照组和实验组与模型组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组和实验组与模型组的GCK蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HMS5552通过提升GCK的表达来降低血糖并具有改善胰岛β细胞分泌胰岛素的作用。