pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞PKA表达的影响

目的:观察pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞疼痛模型兴奋性的抑制作用。方法:取新生大鼠的皮质神经元细胞培养,以106mL-1的密度种植于培养皿中。细胞分为4组:对照组(神经细胞)、前列腺素刺激组(神经细胞+42 ng/L前列腺素)、脑啡肽组(神经细胞+42 ng/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞)和纳洛酮拮抗组(10 mmol/L钠洛酮+神经细胞+42 ng/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞)。继续培养24 h后收集神经元细胞,提取总蛋白,采用Western blot测定各组神经元细胞中蛋白激酶A(PKA)的量。结果:4组细胞PKA的量比较,差异有统计学意义(F=59.873,P<0.001)。与对照组相比,前列腺素刺激组PKA增多(P<0.05);与前列腺素刺激组相比,脑啡肽组PKA减少(P<0.05);与脑啡肽组相比,纳洛酮拮抗组PKA增多(P<0.05)。结论:pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽可以抑制神经细胞PKA系统的活化,其抑制作用可被纳洛酮拮抗。

表达载体pEGFP—C3一PENK的构建以及在NIH3T3细胞中的表达

目的：构建质粒pEGFP-C3-PENK,并观察其在真核细胞中表达的时效.方法：构建质粒pEGFP-C3-PENK;低浓度裸质粒、高浓度裸质粒、脂质体介导分别转染NIH3T3细胞,观察转染率、绿色荧光蛋白表达情况;放射免疫法和免疫细胞化学法检测脑啡肽的表达情况.结果：质粒pEGFP-C3-PENK成功构建;低浓度裸质粒转染率5%;高浓度裸质粒转染率8%,脂质体介导转染率为20%;转染5周后仍有绿色荧光蛋白表达.结论：成功构建质粒pEGFP-C3-PENK,可在NIH3T3细胞中表达超过5周.