饲料中添加乳酸菌对肉鸡免疫器官的影响

乳酸菌是微生态制剂中的主要菌种,作为饲料添加剂具有促进动物生长、减少动物发病率和死亡率、增加动物抗应激能力等作用。试验采用单因素随机分组设计,将1日龄AA肉仔鸡96只随机分为4组,试验1组为对照组,试验2、3、4组为试验组,每组设3个重复,每个重复8只鸡。每隔10d分别灌服乳酸菌培养液0、200、300、400μL.只-1。对照组和试验组采用完全相同的日粮,自由采食和饮水。饲养至20和40d时分别宰杀。通过对免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊重量、尺寸和发育情况判断添加重组乳酸菌对肉仔鸡免疫功能的影响。结果表明,20日龄时试验组免疫器官指标有所增加,但各免疫器官指标组间差异不显著(P>0.05)。而40d时第2组法氏囊重与其他各组间差异显著(P<0.05),第2组法氏囊指数与第3、4组相比差异显著(P<0.05)。第3、4组脾脏直径与第1组间差异显著(P<0.05)。试验结果表明,添加乳酸菌能够促进肉鸡后期的免疫器官发育。

添加纤维素酶产生菌对鸡饲料养分消化率的影响

试验研究枯草芽孢杆菌对肉鸡日粮粗纤维消化率的影响。选用1日龄AA肉仔鸡96只,随机分为4组(对照组和试验1、2、3组),每组3个重复,每个重复8只鸡。对照组每10日灌服乳杆菌培养液400μL,试验组每10日分别口腔灌服乳杆菌和枯草芽孢杆菌菌液200、300、400μL。结果表明,产纤维素酶枯草芽孢杆菌对鸡前期(1～20d)和后期(21～40d)饲料粗纤维的消化率均有显著影响(P<0.05)。试验结果表明,口腔灌服400μL菌液效果最好,产纤维素酶枯草芽孢杆菌既能表达纤维素酶,又对动物有益生菌的作用,所产的纤维素酶特异性地降解纤维素,从而对饲料粗纤维的消化率具有显著提高作用。

一株降解呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的筛选与鉴定

目的:分离筛选能够降解呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的芽孢杆菌,以用于该毒素的生物降解。方法:采集霉变秸秆、土壤和粪便样品,先将样品加热80℃后,取上清液接种到以DON为唯一碳源的分离培养基富集DON降解菌。以LB培养基分离纯化富集菌,然后对分离到的菌株进行DON毒素降解能力检测。对降解能力最强的菌株进行形态学观察、生理生化实验和16S r DNA序列鉴定。结果:从16株分离菌中筛选得到一株对DON降解能力最强的菌株B.JG05,降解率最高可达80.61%,且对含DON饲料的降解率为82.68%。该菌株呈短杆状,能形成芽孢;生理生化特性符合蜡样芽孢杆菌的基本特征;16S r DNA序列进化树分析表明该菌株与蜡样芽孢杆菌的亲缘关系最近。结论:筛选获得了一株高效降解DON的蜡样芽孢杆菌B.JG05,为饲料和食品中DON毒素的生物降解提供了可能。

降胆固醇乳酸杆菌的筛选及对小鼠血清胆固醇的影响

目的:从羊新鲜粪便中分离筛选具有降胆固醇能力的乳酸杆菌,探讨其对小鼠血清胆固醇含量的影响。方法:以碳酸钙-MRS培养基和胆固醇-MRS培养基筛选具有高效降胆固醇能力的乳酸杆菌;利用形态特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析鉴定分离菌株L-3。为了验证其效果,将40只8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为基础饲料组(A)、高脂模型组(B)、高脂模型+生理盐水组(C)、高脂模型+菌株L-3组(D)。分别饲喂第15、30天,采血,测定总胆固醇(totalcholesterol,TC)、总甘油三酯(triglyceride,TG)和高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoprotein-cholesterol,HDL-C)的含量。结果:筛选得到一株能够高效降解胆固醇的菌株L-3,胆固醇降解率达到(35.93±0.43)%,经鉴定为植物乳杆菌。饲喂第15天,成功构建出高脂血症小鼠模型。灌胃第30天,与B组相比,D组TC、TG、动脉硬化指数水平均极显著降低(P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.05),HDL-C/TC水平极显著升高(P<0.01),而对照组几乎无降胆固醇效果(P>0.05)。结论:实验获得了1株在体内外均具有高效降胆固醇能力的植物乳杆菌LactobacillusplantarumL-3,为进一步开发其为功能性微生态制剂提供了可能。

鸡源高产淀粉酶丁酸梭菌的分离鉴定

为了获得产淀粉酶的丁酸梭菌,本研究从鸡小肠表面黏液中进行丁酸梭菌的分离与筛选,首先对样品进行80℃水浴10min除去非芽孢菌后,然后接种到TSN培养基进行菌株的分离与筛选。对分离到的菌株进行菌落形态、显微形态初步观察,然后对疑似丁酸梭菌的菌株进行产酸能力和淀粉酶酶活检测,最后对既产酸又高产淀粉酶的菌株进行生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。结果表明分离到一株革兰氏阳性厌氧菌C.B1,菌体呈短杆状,能形成圆形或椭圆形芽孢,生理生化结果也符合丁酸梭菌的基本特征,16SrDNA序列长度为1 450bp,与丁酸梭菌的同源性高达99%以上,因此确定该分离菌株为丁酸梭菌,为进一步开发新的微生态制剂奠定了基础。

双纤维素酶基因在乳酸杆菌中的融合分泌表达

为提高纤维素的降解效率,将两种不同的纤维素酶基因在乳酸杆菌中融合表达,实现双纤维素酶在乳酸杆菌中的高效表达。根据两纤维素酶的基因序列设计两对引物,并在两基因间引入一段连接肽。通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增得到两纤维素酶基因CelL15和CelL73,将其融合后连接到乳酸杆菌分泌性表达载体pMJ67中,构建重组表达质粒pMJ-CelL15-CelL73,电转化入乳酸杆菌Lactobacillus casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,通过PCR验证获得了分泌表达双纤维素酶的重组乳酸杆菌。电泳实验结果表明重组乳酸杆菌成功表达了1个约为83 kD的融合蛋白。平板酶活力检测发现重组乳酸杆菌能明显降解底物中的羧甲基纤维素钠,培养液上清中纤维素酶酶活力可达1.25 U/mL。

一株犬细小病毒CPV-2a变异株的分离鉴定及生物学特性研究

为研究犬细小病毒(CPV)地方分离株的变异情况,本研究从洛阳市某宠物医院临床表现为出血性肠炎的患犬肛拭子样品中分离到一株病毒,对其进行血凝试验、间接ELISA试验、PCR试验及动物回归试验。结果表明该病毒分离株能够凝集猪红细胞;利用兔抗CPV血清进行检测,结果呈阳性。采用CPV检测引物进行PCR扩增,获得大小为559 bp的特异性片段,并且利用针对CPV VP2基因设计的特异性引物能够扩增到大小为1 755 bp的特异性片段。同源性比较和进化树分析均表明该分离株为一株CPV,将其命名为CPV-henan32-2013。氨基酸序列分析表明该分离株为CPV-2a型,并且发生了T322S、Y324I、P333A、A334G、S348C 5个位点突变。动物回归试验复制出了CPV典型症状的出血性肠炎、心包液增多及肺脏水肿充血。病理切片观察可见心肌细胞、肠粘膜上皮细胞和肺脏均有出血、坏死或脱落等特异性病变。本实验结果为进一步了解CPV的变异规律、疫苗株的选择和CPV病的有效防控奠定了基础。

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定

利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离菌中筛选了一株酶活较大的菌株B.A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16S rDNA序列长度是1 463 bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99%,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2.19×103U·mL-1。

高产淀粉酶枯草芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究

为了提高产淀粉酶枯草芽胞杆菌BacillussubtilisN21的酶活，试验采用紫外线对该菌株进行诱变，并对该淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明，淀粉酶酶活由出发株的32．96U／mL增加到86．24U／mL．比原菌株酶活提高了161．65％。该酶的最适反应温度为35℃，最适pH值为7．0，在30—40℃，pH值为5．0～8．0条件下较稳定。Ca2＋和Mn2＋对酶有激活作用，Cu2＋、Zn2＋对酶有抑制作用，而Mg2＋、Fe2＋对其影响较小。说明筛选出1株产酶活性较强的突变菌株。

一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定

为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌,从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份,利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌,采用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活,结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16SrDNA序列进行鉴定。结果表明,从样品中分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B.LY02,纤维素酶活力可达0.5351U/mL。该菌株呈短杆状,革兰氏染色阳性,能形成芽孢。基于16SrDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus licheniformis strain CICC10095的亲缘关系最近,基因序列的同源性为96.5%,因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。