野生酸枣果硒多糖纯化与光谱分析

采用热水浸提、乙醇沉淀法获得酸枣果硒多糖粗品。苯酚-硫酸法测其多糖含量为(92.6±4.72)mg/g,原子荧光光度法测其硒含量为(17.8±2.05)μg/kg。DEAE-25纤维素和Sephadex G-75凝胶层析柱进一步分离纯化得白色絮状多糖。薄层层析和高效阴离子交换色谱法分析其单糖组成。结果表明:该多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖等单糖组成,其摩尔比为3.21∶8.36∶5.61∶0.96∶1.82。红外光谱分析表明具有明显的多糖特征吸收峰,核磁共振波谱表明该多糖结构主要为β-糖苷键连接的吡喃型葡聚糖。

多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定

为了克隆和转化多枝赖草(Leymus multicaulis)的耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因,利用脉冲电泳分离纯化2Mb以上核DNA,酶切后回收10～200kb DNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B,在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆.用两种TAC载体pYLTAC17和pYLTAC747H/sacB分别构建了文库Ⅰ和Ⅱ,约16.5和23.6万个克隆,估计覆盖3～5倍多枝赖草基因组大小.文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中,每孔1.2mL菌液中含300～600个克隆,40多万个克隆转存到3块384孔板,留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液,可用于后续文库鉴定.此外,从文库Ⅰ和Ⅱ分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中.17块384孔板都用GeneTACTMG3复制了2份,点高密度杂交膜6张,以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5′RACE-GR和3'RACE-GR为探针初步筛选到19个阳性克隆.两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础。