重组卡介苗感染树突细胞的研究

在体内外试验中 ,树突细胞 (DC)均能摄取表达大肠杆菌麦芽糖结合蛋白 (MalE)的重组卡介苗 (rBCG·MalE)。应用流式细胞术测得荧光标记的rBCG·MalE在体内感染DC的水平在 1 % 2 % ,与感染巨噬细胞 (MΦ)的水平相当。体外抗原提呈试验结果显示 ,DC和MΦ能吞噬、加工rBCG·MalE并向T细胞杂交瘤FBU·B1 1提呈MalE蛋白抗原表位 ,而在体内试验中 ,从rBCG·MalE免疫小鼠脾脏中纯化的DC ,可检测到MalE表位MHCⅡ复合物 ,而纯化的MΦs却测不到。这表明DC在起始抗分枝杆菌的免疫保护中发挥关键作用。

重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8^＋T细胞表位的运送研究

目的:分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8+ T细胞表位的效应。方法:将携带融合表达绿色荧光蛋白(GFP)与OVA CD8+ T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A(pG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应。同时,重组菌13A(pG2F)以静脉注射方式免疫C57BL/6小鼠,应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞。结果:感染试验表明,大肠杆菌13A能向APC中运送真核表达质粒,并且外源GFP基因获得了表达。体外抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2小时),LKb和BMDC均可提呈重组菌13A(pG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48小时),LKb细胞对CD8+ T细胞表位的提呈效应增强。在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb细胞。体内结果显示,大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答。结论:重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。

重组减毒细菌运送CD8^+T细胞表位的效应分析

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8+T细胞表位的效应。方法:以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)CD8+T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2h),LKb、LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48h),LKb细胞对OVA257-264CD8+T细胞表位的提呈效应降低,LLd细胞对LCMV118-132CD8+T细胞表位的提呈效应增强。3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞。结论:重组菌能运送CD8+T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。

应用ELISPOT试验测定重组卡介苗诱导的T细胞应答

应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏细胞中CD4+或CD8+T细胞后 ,在酶联免疫斑点试验中证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗 (rBCG·MalE)诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的。对MalE、PPD特异T细胞应答的动态分析结果表明 ,rBCG·MalE、BCG诱导的特异CD4+T细胞应答存在Th1/Th2平衡转换现象 ,即起始阶段为Th1应答 ,一段时间后出现Th2应答 ,并逐步形成Th1/Th2混合应答。这些结果 ,为分枝杆菌T细胞应答规律提供了新的认识 ,同时 ,亦表明BCG是优良的外源抗原表达与运送载体。

表达GFP的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌体内感染抗原呈递细胞的动态变化

目的 :阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞 (APC)的动态变化规律。方法 :用一定剂量的表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0(pYAGFP)口服接种BALB/c小鼠。 3d后 ,取腹腔巨噬细胞培养 2 4h ,用荧光显微镜观察。另以该细菌静脉注射小鼠 ,于感染后 3、6和 12h,制备脾脏、肝脏低浮密度细胞。用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率。结果 :巨噬细胞感染X4 5 5 0 (pYAGFP)的百分率 ,腹腔中约为 5 0 % ,肝脏和脾脏中约为 2 0 %～ 4 0 %。树突状细胞感染X4 5 5 0 (pYAGFP)的百分率 ,脾脏中约为 4 %～ 10 % ,肝脏中约为 10 %～ 2 0 %。巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞。结论 :感染早期 ,重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取 ,为诱导有效的免疫应答提供了先决条件。

破伤风毒素及其AB片段对金鱼的毒力

作者研究了破伤风毒素及其 AB 片段对金鱼和小鼠的毒力,发现16ng 的毒素即可使金鱼麻痹和死亡;26μg 的 AB 片段即可使小鼠麻痹和死亡,而对金鱼却无作用。当抗 C 或 AB 片段的抗体与毒素结合后,可阻断毒素对金鱼的致麻痹作用。上述结果表明,破伤风毒素可作用于金鱼的外周神经系统,而 AB 片段则不能。毒素与其受体结合是毒素对金鱼作用所必需的。

Epstein-Barr病毒相关疾病的IgG/Z抗体检测

血清中Epstein-Barr病毒(EBV)的IgG/Z抗体对鼻咽癌和传染性单核细胞增多症是较特异的,其阳性率分别为85.7％和84％。50％的伯基特淋巴瘤病人亦有IgG/Z抗体。正常人则没有,但有IgG/VCA等抗体,表明IgG/Z抗体在初次感染后是容易消失的。Z抗原与EBV复制相关,故IgG/Z抗体对鼻咽癌不仅有诊断意义,还可能有预后的意义。

融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。

固氮粪产碱菌ntrC-lacZ融合基因的构建及其在水稻根部的表达

将粪产碱菌（Alcaligenesfaecalis）A1501ntrC基因和lacZ基因正向克隆于广泛性转移载体pLA2917上，获得多拷贝ntrC质粒pLAC1和含ntrC－lacZ融合基因的重组质粒pLAC2，采用双亲结合方法，将上述两个重组质粒导入A1501中，获得含ntrC－lacZ融合基因的结合子A15C2和ntrC多拷贝结合子A15C1。采用X－gal原位显色技术、显微切片、扫描电镜观察及ntrC部分缺失突变株研究粪产碱菌ntrC在根部的表达及功能，结果表明粪产碱菌A1501在水稻根部有较强的定殖能力，并能侵进入水稻根内定殖。在水稻主侧根伸长区及根内皮层薄壁细胞及侧根分生区ntrC－lacZ融合基因表达活性明显高于别的部位。高铵条件下多拷贝ntrC结合子根表定殖能力大于野生型，而ntrC突变株则低于野生型。表明ntrC基因参与固氮菌根表结合的过程。

肉类消费：营养功效与健康影响

肉类消费常被认为是导致一些疾病的原因。对于代谢性疾病(肥胖、代谢综合征、糖尿病)和心血管疾病来说,肉类消费本身不是引起疾病的原因,但饮食模式可能与疾病的产生有关。至于结直肠癌,已有数据分析结果显示,过量食肉(特别是烹饪方式不当的情况下)的确会增加患病的风险。一些相关的营养学和遗传学因素可以有保护(或抗癌)作用。适当食肉,并配以健康的烹饪方式,对平衡饮食是很重要的。

向合成细胞迈进:细胞与计算机复制过程中的遗传问题

对生命机制的理解预示着人类总有一天能重建细胞。对于生命表征的深入分析显示,细胞的分裂、繁殖与计算机间的复制非常相似。这要求我们在亚细胞水平上进行分析比较。首先,细胞必须被看作是一个独立于其遗传物质的机器。在此意义上,遗传物质在数代间复制,而机器也可以再生。繁殖是一个可以在子代间累积有用信息的过程,从大量无用的信息海洋中提取有用信息是一个依赖能量的过程,并借助能量阻止功能性实体的降解。细菌基因组的分析显示,核心基因(即维持必需功能的基因)负责执行这种类似于棘齿运行的信息累积过程。本文提出,磷酸化矿物盐类可能是广泛的能量来源。

基因工程生物会导致“基因污染”吗？

几年前，一些杂志引发了一场关于基因工程系统玉米的白热化争论，认为基因工程玉米中的基因会扩散到环境中，造成基因污染，但是，对生物技术之间基因转移的研究还远远没能够证明这种风险的存在。然而，生命本质上是不可预测的。

新疆出血热病毒S基因片段的测序和分析

目的 认识新疆出血热（ ＸＨＦ） 病毒不同分离株基因区别的本质，从分子水平揭示其基因结构与功能的关系，寻找传播及流行的原因。方法 对１９６５ 年自我国首例病人及１９８４ 年自蜱分离的两株ＸＨＦ 病毒进行了Ｓ 基因片段的克隆测序和分析。结果 两株病毒核苷酸序列同源性为９６ ．７ ％ ，与已经发表的１９６８ 年分离自我国蜱（ＨＹ１３） 和羊（Ｃ６８０３１） 的两株病毒核苷酸序列同源性均较高（９６ ．７ ％ ～９９ ％ ） ；与其它ＣＣＨＦ 病毒相比Ｓ 基因同源性为７７ ．４ ％ ～９２ ．７ ％ 。结论 计算机绘出的系统发生树状图显示我国分离的４ 株病毒形成一单个群体并进一步分为三组，提示流行源自我国。

HIV-1来源的慢病毒载体转染大鼠脊髓神经干细胞

目的介绍人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficieney virus-1,HIV-1)载体的构建及转染大鼠脊髓神经干细胞的实验方法。方法将含有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的4种质粒通过293T细胞构建成GFP-HIV载体。用Elisa法及Hela细胞分别验证其高浓度及强感染力后将其转染大鼠脊髓神经干细胞。结果GFP-HIV载体浓度达56672．93pg/ml,荧光显微镜下Hela细胞胞浆内充满深浅不一的绿荧光,大鼠脊髓神经干细胞球发强烈的绿荧光。结论此实验方法操作简单、快捷,具有高效性及安全性。HIV载体将是基因治疗的理想工具。

重组卡介苗表达的MalE蛋白T细胞表位的鉴定

目的 鉴定重组卡介苗表达的MalE蛋白T细胞表位。方法 用抗原提呈试验、T细胞增殖试验、ELISPOT试验和表位作图测试重组MalE蛋白的T细胞表位。结果 重组BCG MalE功能性表达了MalE蛋白的 4种H 2 d 限制性T细胞表位。结论 在 4种表位中 ,p6 8～ 82是重组MalE蛋白的主要T细胞表位 ,而其余

噬菌体疗法：用病毒杀灭致病菌

人们通常把病毒视为致病源，一般没人会认为它们是治病的灵丹妙药。但有一些病毒对于人类和动物来说是无害的，它们就是噬菌体，这类病毒只会攻击细菌。只要选择正确的噬菌体，我们就有可能治愈某些细菌感染，这就是一个世纪前出现的噬菌体疗法的指导思想。