双调蛋白诱导乳腺癌细胞表达尿激酶型纤溶酶原活化物

目的:在人乳腺癌模型上研究双调蛋白与尿激酶型纤溶酶原活化物表达之间的关系。方法:乳腺癌NS2T2A1细胞经双调蛋白反义cDNA质粒转染后经潮霉素B筛选获得表达双调蛋白反义RNA的AR-AS1及AR-AS3两个细胞克隆,转染空载体获得NS2T2A1V对照细胞,接种至裸鼠皮下形成肿瘤。测定细胞及肿瘤uPA表达水平,并研究uPA与细胞侵袭性之间的关系。结果:AR-AS1及AR-AS3细胞体外及体内uPA表达均被抑制。外源性双调蛋白可刺激对照细胞uPA的表达,并部分恢复AR-AS1及AR-AS3细胞uPA的表达水平。双调蛋白反义cDNA质粒转染及抗uPA抗体均导致乳腺癌细胞体外侵袭性的降低。结论:在乳腺癌模型上,uPA表达与肿瘤细胞的侵袭密切相关。双调蛋白反义RNA表达可有效地抑制uPA的表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭性。

双调蛋白反义核酸表达对裸鼠乳腺癌血管生成的抑制作用

目的研究双调蛋白(AR)反义RNA表达对乳腺癌血管生成的抑制作用。方法乳腺癌NS2T2A1细胞经AR反义cDNA质粒转染后,经筛选获得表达AR反义RNA的AR-AS1及AR-AS3克隆,转染空载体获得NS2T2A1V对照细胞,接种裸鼠皮下形成肿瘤。研究条件培养液对人微血管内皮细胞(HMEC)增殖的影响,以ELISA法测定细胞血管内皮生长因子(VEGF)分泌量。以定量RT-PCR分析肿瘤组织的VEGF表达水平。以免疫组化法标记CD31研究肿瘤内血管数量。结果HMEC在AR-AS1和AR-AS3细胞条件培养液中的增殖比例明显降低。AR-AS1和AR-AS3细胞VEGF分泌量亦降低。AR-AS1和AR-AS3肿瘤的血管数量仅有对照组的50%左右,且VEGF表达显著降低。结论AR反义RNA表达可有效抑制乳腺癌的血管生成,应作为新治疗靶点进一步研究。