酶法辅助提取人工培育蝉花多糖工艺优化及其动力学、热力学、抗氧化研究

目的:优化酶法辅助提取人工培育蝉花多糖的工艺,考察料液比、酶添加量、酶解温度、提取时间等单因素对多糖得率的影响。方法:借助Box-Behnken设计的四因素三水平法建立了该多糖提取工艺的理论模型,并研究多糖对三种自由基的清除效果,根据Fick第二定律建立了人工培育蝉花提取的动力学模型,并根据速率常数、相对萃余率、活化能等参数,研究其动力学和热力学性质。结果:经响应面分析得到该多糖最佳提取工艺为:料液比1:30 g/mL、酶添加量1.6%、酶解温度67℃、提取时间90 min,在此条件下蝉花多糖的得率可达7.91%,与理论值接近。在该工艺下的人工蝉花粗多糖的DPPH自由基和羟自由基的IC_(50)值分别为0.54和0.60 mg/mL,ORAC值是45.62 Troloxμmol/g,具有良好的体外抗氧化活性。结论:利用酶法辅助提取人工培育蝉花多糖,为该类已商业化的蝉花资源的多糖组分开发提供了理论基础。

蝉花虫草酒延寿及抗氧化作用的研究

通过果蝇寿命实验及果蝇体内SOD活性、MDA含量的测定,研究蝉花虫草酒的延寿及抗氧化作用。结果显示,白酒对果蝇寿命及抗氧化有负面作用,而蝉花的加入能抵消白酒的负面影响,并能一定程度上提高雌雄果蝇的平均寿命,半数死亡时间及最高寿命,提高果蝇体内的SOD活性,降低其MDA含量。综合所有实验结果,发现1.0%剂量的蝉花虫草酒延寿及抗氧化效果最为显著(p < 0.05)。

蝉花虫草酒免疫功能研究

本研究通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和二硝基氟苯诱导小鼠DTH实验、抗体生成细胞实验和血清溶血素实验、小鼠碳廓清实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验及NK细胞活性测定实验分别研究了蝉花虫草酒对小鼠细胞免疫、体液免疫、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性的影响作用。结果表明,蝉花虫草酒低、高剂量组均无明显细胞免疫增强功能;高剂量组能提高小鼠的溶血空斑数和小鼠抗体积数,具有增强体液免疫功能;与阴性对照组比较,高剂量组能够明显提高小鼠的碳廓清吞噬指数和巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数,具有增强单核巨噬细胞的功能;高、低剂量组无明显提高小鼠NK细胞活性的作用。根据上述实验结果和2003版《保健食品检验与评价技术规范》的规定判定蝉花虫草酒有增强机体免疫力的作用。

桦褐孔菌抗肿瘤活性部位的筛选及化学成分研究

目的研究桦褐孔菌抗肿瘤活性部位及化学成分。方法将桦褐孔菌乙醇提取物(FT)、石油醚萃取物(FA)、乙酸乙酯萃取物(FB)、正丁醇萃取物(FC)以及水层萃余物(FD)作用于人肝癌Hep G2、胃癌SGC-7901及肺癌A549细胞,检测各提取部位对肿瘤细胞的生长抑制活性,并进一步对活性部分进行化学成分研究。结果活性数据分析表明FT、FA及FB均有抑制肿瘤活性,IC50值分别为56、28、47mg/L。从活性部位FA及FB分离得到10个化合物,分别鉴定为羊毛甾醇(1)、3β-羟基8,24-羊毛甾二烯-21-醛(2)、桦褐孔菌醇(3)、白桦脂醇(4)、5α,8α-表二氧-6,22-麦角甾二烯-3-醇(5)、4,6,8(14),22-麦角甾四烯-3-酮(6)、豆甾-4-烯-3-酮(7)、Inonotsuoxides B(8)、Inonotsutriols A(9)、胡萝卜苷(10)。结论 FA及FB是桦褐孔菌的抗肿瘤活性部位,从活性部位分离鉴定10个化合物,其中6、7、10首次在桦褐孔菌中发现。

桦褐孔菌乙酸乙酯部位化学成分及体外抗肿瘤活性研究

目的研究桦褐孔菌乙酸乙酯部位化学成分,初步筛选出具有抗肿瘤活性的单体化合物。方法用制备型高效液相、大孔树脂HPD100、Sephadex LH-20凝胶、小孔树脂MCI、硅胶等柱层析方法对桦褐孔菌乙酸乙酯部位进行分离纯化,综合应用光谱法(1HNMR、13CNMR、HRMS)鉴定结构。体外培养人胃癌SGC-7901、肝癌HepG2及神经胶质瘤U-87细胞,不同浓度(12. 5、25、50、100、200μmol/L)单体化合物刺激后,MTT法观察各单体化合物对肿瘤细胞增殖的影响。结果从乙酸乙酯部位分离鉴定12个成分(酚类、羊毛脂烷型三萜和甾醇),分别为:原儿茶醛(1)、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮(2)、大黄酚(3)、Coelarthenol(4)、1,2-Benzenedicarboxylic acid dibuty ester(5)、栓菌酸(6)、柠檬酸三乙酯(7)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(8)、Aquilarin A(9)、1,4-benzenedicarboxylic acid 1-butyl-4-(2-methylpropyl) ester(10)、3β-羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯(11)、(24S)-Ergost-7-en-3-ol (12)。结论化合物2、6、8具有较强的抗肿瘤作用,其中化合物2、9首次从桦褐孔菌中分离得到。

培育蝉花改善小鼠睡眠功能的试验研究

观察不同剂量的人工培养蝉花子实体及菌丝体对小鼠睡眠的改善作用,健康昆明小鼠,随机分成8组,每组10只.每天经口灌胃给予不同剂量的人工培养蝉花子实体及蝉花菌丝体,连续给予受试物30 d后进行直接睡眠作用试验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏实验测定小鼠直接睡眠时间、戊巴比妥钠诱导的睡眠时间及阈下剂量的睡眠发生率、巴比妥钠诱导的睡眠潜伏时间.结果表明,与空白对照组比较人工培养蝉花子实体300 mg/kg、900mg/kg及菌丝体900 mg/kg对阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠一定的促进作用(P<0.05),且没有明显的剂量依赖关系;与空白对照比较,300 mg/kg人工培养蝉花子实体和900 mg/kg蝉花菌丝体对戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间有明显的延长作用,但不同剂量的两种受试药物对巴比妥钠睡眠潜伏期基本无影响,且均无直接至眠作用.人工培养蝉花子实体和蝉花菌丝体对小鼠睡眠有一定的改善作用.

IL-6、IL-6R和IL-4多态性与上海地区汉族人群慢性牙周炎患者的关联研究

目的研究IL-6、IL-6R和IL-4基因组单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与上海地区汉族人群慢性牙周炎患者的相关性。方法应用TaqMan荧光实时定量PCR方法,对128例牙周正常者和198例中度以上慢性牙周炎患者的IL-6-572G/C、IL-6R 48892A/C和IL-4-590C/T等3个单核苷酸多态性位点进行分析。应用SPSS 17.0软件包对数据进行χ2检验分析。结果分析显示这3个位点的基因型频率与等位基因频率在牙周正常组和慢性牙周炎组间的分布差异均无显著性。结论 IL-6-572G/C、IL-6R 48892A/C和IL-4-590C/T基因组单核苷酸多态性位点与上海地区汉族人群的慢性牙周炎易感性无显著相关性。

乌岩岭自然保护区的虫草研究

该文对乌岩岭自然保护区的7种虫草类真菌(蝉花、细脚棒束孢、鲜红虫草、发丝线虫草、长座线虫草、小蝉草、蜂头线虫草)进行调查,并对几种虫草及其无性型进行讨论,为乌岩岭自然保护区虫草的进一步开发利用提供依据。

蝉花和蝙蝠蛾拟青霉复合浸泡虫草酒免疫活性研究

本文通过0.45 g/kg∙BW/d (低剂量)和0.9 g/kg∙BW/d (高剂量)两个剂量组的复合虫草酒经口给予小鼠饲喂1个月实验,进行小鼠免疫器官系数、体液免疫功能和单核巨噬细胞活性的测定,研究复合虫草酒的免疫调节作用。结果表明,高剂量组复合虫草酒能够显著提高小鼠抗体积数,较空白对照组提高了62.94%;高、低剂量组均能明显提高小鼠的鸡红细胞吞噬指数,较对照组分别提高了44%和40%,吞噬百分率分别较对照组分别提高了21.57%和19.61%。高剂量组复合虫草酒具有提高小鼠抗体积数和增强小鼠单核巨噬细胞吞噬活性的作用。

染色体9p21.3区域基因多态性与汉族人群慢性牙周炎的相关性研究

目的:研究染色体9p21.3区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与汉族人群中慢性牙周炎的相关性。方法:应用TaqMan荧光实时定量PCR方法,对172例牙周正常者和221例中度以上慢性牙周炎患者的rs2891168、rs1333048和rs1333042 3个单核苷酸多态性位点进行分析。采用SPSS16.0软件包对数据进行χ2检验。结果:rs2891168与慢性牙周炎存在显著性关联(P=0.003),病例组中,等位基因G的频率显著高于对照组(OR=1.209,95%CI:1.001～1.461,P=0.045),而rs1333048、rs1333042基因型与等位基因频率在牙周正常组和慢性牙周炎组间的分布差异均不显著。结论:染色体9p21.3区存在与慢性牙周炎关联的SNP,显示该区域可能是慢性牙周炎易感区域,但其作用机制有待进一步研究。

广东虫草研究进展

广东虫草在自然界十分稀有,是我国独有的虫草资源,其子实体可以进行人工培育。广东虫草具有较高的食用和药用价值,其体内含有的活性成分具有重要的药理活性。本文就近几年的研究成果,对广东虫草的药理作用、有效成分、人工栽培、安全性4个方面的研究展开论述,为广东虫草进一步研究和社会推广提供参考。

一株小菜蛾高致病性球孢白僵菌菌株的筛选及其可湿性粉剂的田间药效试验

通过比较产孢量等性状,选择29株分离自鳞翅目昆虫的球孢白僵菌进行室内生物测定,从中筛选出1株对小菜蛾毒力强的菌株Bb2390,其对小菜蛾2龄幼虫的致死中浓度为1.56×105孢子.mL 1,在1.0×107孢子.mL 1浓度下的致死中时为4.61 d。该菌株对小菜蛾各虫态均有致病力,对卵、2龄幼虫、蛹和成虫的侵染率分别为37.2%、90.3%、58.8%和24.5%。在田间试验中,进一步测定了该菌株的可湿性粉剂对小菜蛾幼虫防治效果达65.85%,显著高于分生孢子水悬液的防效51.66%。

蝉花宝牌蝉花片免疫功能评价

将蝉花宝牌蝉花片(商品名)设低、中、高3个剂量组,分别相当人体推荐量的5、10、30倍,同时设阴性对照组(1%羧甲基纤维素钠),连续1个月经口给予小鼠不同剂量的样品,进行迟发型超敏反应(DTH)、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、抗体生成细胞检测、自然杀伤(NK)细胞杀伤活性和脾淋巴细胞转化等实验,以评估其免疫功能。结果表明,与阴性对照组比较,受试3个剂量组足跖肿胀度极显著增加(P<0.01);中、高剂量组溶血空斑数和血清溶血素抗体积数值均极显著增加(P<0.01),腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、吞噬指数显著增加(P<0.05,P<0.01);高剂量组NK细胞活性显著升高(P<0.05)。蝉花宝牌蝉花片(商品名)具有显著的免疫调节功能。

茶园昆虫病原真菌群落组成及生态位

本文系统调查了安徽省石台县仙寓山粗放经营茶园昆虫病原真菌物种多样性和生态位特征。结果表明,在植被单一、干扰较多的茶园,昆虫病原真菌种群结构较为单一。共采集到116株标本,其中优势种群为环链棒束孢、球孢白僵菌和粉棒束孢,分别占总数的32.8%、27.6%和19.8%。分析了3种优势种昆虫病原真菌的时间和营养生态位。结果表明,环链棒束孢的时间生态位最大,粉棒束孢最小;球孢白僵菌营养生态位宽度最大,粉棒束孢营养生态位宽度最小。昆虫病原真菌之间以环链棒束孢和球孢白僵菌的时间生态位重叠度最大,为0.776,环链棒束孢和粉棒束孢的营养生态位重叠度最大,为0.785。可见,粗放经营茶园中环链棒束孢发生时间长,分布范围广,生存能力强。

野外繁育蝉花菌株的筛选及分子标记分析

【目的】拟通过蝉花野外繁育菌株的子实体培养筛选和分子标记分析,建立蝉花野外繁育菌株鉴别体系,获得可用于生产的优质菌株。【方法】以蝉花A17-7-1菌株野外繁育获得的7个蝉花菌株进行子实体培养筛选,并用A17-7-1菌株特异的SCAR分子标记对菌株进行分析。经SCAR标记确认的繁育菌株再以ISSR分子标记分析判定繁育菌株遗传性状。【结果】经子实体培养筛选,2个菌株子实体产量高于A17-7-1;SCAR分子标记分析显示,从这2个子实体产量提高的菌株基因组NDA中扩增出A17-7-1菌株特有的DNA片段;ISSR分子标记分析表明,一株子实体产量明显提高的菌株与A17-7-1具有完全相同的条带,另一个子实体产量提高不显著的菌株有2个条带缺失。【结论】野外繁育蝉花可提高子实体产量,SCAR标记可快速鉴别菌株是否为繁育菌株,ISSR标记能够初步判断菌株遗传特性。

添加蝉花菌质饲料对鮰鱼养殖的效果评价分析

通过在鮰鱼养殖饲料中添加1%的人工培养采收蝉花子实体后的蝉花菌质,对鮰鱼死亡率、增重率、饲料系数、免疫功能及营养成分等进行分析。结果显示,与对照组相比,在鮰鱼养殖饲料中添加1%蝉花菌质对鮰鱼的死亡率、平均增重率、总产量等均无显著影响,对饲料系数及营养成分不会产生明显损失。但在提高鮰鱼机体免疫力方面效果明显,与对照组相比,试验组各项免疫指标升高有极显著差异(P < 0.01)。

蝉花菌质的改良和营养成分分析

通过米曲霉和酵母对蝉花菌质进行发酵改良以提高其蛋白质含量,采用国际通用的蛋白质评价方法对菌质改良前后蛋白质营养价值进行分析。结果显示,经过改良,蛋白质含量从14.60%增至26.16%,除半胱氨酸、谷氨酸、脯氨酸外的其余氨基酸含量均有所上升,单位蛋白质的质量有所下降,第一限制氨基酸从赖氨酸变为含硫氨基酸,综合来看,改良后菌质营养价值和氨基酸平衡性均高于改良前,是一种高蛋白、低胆固醇、低钠,富含膳食纤维、维生素和矿物质的优质原料。

蝉花子实体对几种微量营养素的富集筛选

本实验通过固体发酵,比较锌、锰、叶黄素、维生素D3、β-胡萝卜素、叶酸等几种微量营养素在蝉花子实体中的富集效果及其对生长的影响。在罐头瓶的小麦培养基中直接添加锌、锰、铬、叶黄素、维生素D3、β-胡萝卜素、叶酸等原料,发现最后培养所得蝉花子实体中,锌、锰、叶酸均有较好的富集效果,在0.25%添加量下,蝉花子实体中的锌含量由3.44 mg/100g升高至13.2 mg/100g,锰含量由0.91 mg/100g升高至10.3 mg/100g,叶酸含量由107 μg/100g升高至493 μg/100g,但锰原料组蝉花子实体生物量显著降低。进一步将固体培养扩大至培养盒,对锌、叶酸的添加浓度进行筛选,随着浓度上升,锌添加量0.9%时,在蝉花子实体中的富集量增加最快,超过0.9%,富集量的增速减缓,添加量达到1.5%,子实体生物量显著降低;叶酸添加量1.2%时,在蝉花子实体中富集量增加最快,而添加量达到1.5%,子实体生物量同样显著降低。

中国蜘蛛病原真菌物种多样性

蜘蛛是节肢动物门蛛形纲蜘蛛目一类动物的总称,蜘蛛病原真菌是以蜘蛛为寄主的一类病原体。蜘蛛病原真菌不仅在持续控制蜘蛛种群和维护生态平衡上具有不可代替的作用,而且一些种类富含多种生物活性,具有重要的经济价值。本研究以蜘蛛病原真菌为研究对象,结合经典形态学和分子系统学分类方法,依据虫生真菌新的分类系统对标本及分离菌株进行物种鉴定,确定蜘蛛病原真菌的物种多样性。研究发现,从全国各地采集到蜘蛛病原真菌标本80份,共发现有2科8属21种,其中新种3个(已发表),未知种7个,新记录种1个。其中,紫孢菌属是优势属,相对多度达26.25%;其次是球束梗孢属,相对多度为20.00%;而刺束梗孢属仅1种1株。本研究将部分类棒束孢重新修订为刺束梗孢和鳞翅虫草属,并重点描述了中国新记录种—灰绿孢菌。此外,本研究收集了全球已发表的蜘蛛病原真菌相关文献,统计所有已发表的菌种,共计18属119种,均分布在子囊菌门Ascomycota,肉座菌目Hypocreales。多数种类分布在虫草科Cordycipitaceae,约12属106种;少数分布在线虫草科Ophiocordycipitaceae,4属11种;生赤壳科Bionectriaceae有1属1种,分类地位介于线虫草科与麦角菌科之间的未确定属绿孢菌属Chlorocillium v1种。麦角菌科Clavicipitaceae尚未发现。

蝉花水提物及蝉花复方对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的阐明蝉花水提物及蝉花子实体复方对小鼠免疫功能的影响,探讨其调节免疫的作用机制。方法 BALB/c小鼠70只随机分为7组(n=10):对照组,蝉花水提物高、中、低剂量(0.300、0.150、0.075 g/kg)组,蝉花复方高、中、低剂量(1.2、0.6、0.3 g/kg)组,ig给药15 d后检测小鼠胸腺指数、脾脏指数,通过脾淋巴细胞转化实验、溶血空斑实验以及碳廓清实验,观察淋巴细胞转化率、巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素形成情况,评价蝉花水提物及蝉花子实体复方的免疫调节作用。结果与对照组比较,低、中剂量蝉花水提物,中剂量蝉花子实体复方均能明显增加小鼠免疫器官脾脏、胸腺指数(P<0.05);低剂量蝉花水提物,低、中、高剂量蝉花子实体复方均能促进淋巴细胞增殖反应(P<0.05);低剂量蝉花水提物,低、中剂量蝉花子实体复方均能提高巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)。结论蝉花水提物及蝉花子实体复方均可明显提高机体免疫力,且复方在调节免疫功能强度方面较单用蝉花水提物有一定优势,说明蝉花预防和治疗免疫功能失调相关疾病有较好的应用前景。