抗菌肽Dermaseptin-PP协同化疗药物抗肿瘤并逆转A549/DDP细胞顺铂耐药性

目的:探究抗菌肽Dermaseptin-PP对多种化疗药物体外抗肿瘤活性的协同增效作用,以及其对人非小细胞肺癌顺铂(DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用,并进一步探究其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)染色法检测不同质量浓度的Dermaseptin-PP对人非小细胞肺癌A549、H157细胞或小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖抑制作用,考察低毒质量浓度Dermaseptin-PP与多烯紫杉醇(DTX)、阿霉素(DOX)或DDP联用对A549、H157或4T1细胞的协同抗肿瘤作用;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测低毒质量浓度Dermaseptin-PP对A549/DDP细胞DDP耐药性的逆转作用。采用流式细胞术检测Dermaseptin-PP对DDP诱导A549细胞凋亡的影响,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验及碘化丙啶(PI)摄取实验考察Dermaseptin-PP对A549和A549/DDP细胞膜完整性的影响,最后通过扫描电镜观察Dermaseptin-PP处理后A549和A549/DDP细胞膜形态的变化。结果:Dermaseptin-PP可在体外抑制A549、H157和4T1细胞增殖且呈剂量依赖性;与低毒质量浓度Dermaseptin-PP(0.002、0.020、0.200μg·mL^(-1))联用后,DTX、DOX及DDP对A549细胞的增殖抑制率均有不同程度的提高,半数抑制浓度(IC50)均有所降低,药物联合指数(CI)基本均小于0.9,其中Dermaseptin-PP与DDP的协同作用最强(CI<0.4)。此外,Dermaseptin-PP与DDP联用对H157和4T1细胞的CI也均小于0.9,表现为协同作用。低毒质量浓度Dermaseptin-PP(0.2、2.0、4.0μg·mL^(-1))均能显著逆转A549/DDP细胞的DDP耐药性,逆转倍数(RF)分别为2.83、5.09、9.73。相比于单用DDP,与0.2μg·mL^(-1) Dermaseptin-PP联用可显著提高A549细胞的凋亡率(P<0.05);不同质量浓度的Dermaseptin-PP均可显著增加A549、A549/DDP细胞的LDH释放率和PI摄取率,且呈浓度依赖性;扫描电镜观察发现,经2×IC50的Dermaseptin-PP处理后,A549细胞的细胞膜明显受损、质膜解体、细胞形态发生改变,A549/DDP细胞的细胞膜也出现明显孔洞。结论:Dermaseptin-PP对多种化疗药物体外抗肿瘤活性均具有协同增效作用,其中与DDP的协同作用最强,并且能够逆转A549/DDP细胞的DDP耐药性,其增效及逆转耐药的机制可能与破坏肿瘤细胞膜,进而提高化疗药物入胞药量有关。