中心实验室的消毒管理

随着医学科学的飞速发展和科技水平的不断提高,医院科研工作受到医院管理层的重视,我院中心实验室现已成为各专业技术人员开展医学科学实验研究的重要基地.实践证明,医院实验室不仅会接触到大量已知感染性生物因子,也可能会接触到未知感染性生物因子,因此加强实验室消毒管理非常重要.

VEGF反义寡核苷酸对舌鳞癌影响的实验研究

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人舌癌肿瘤的生长抑制作用。方法:20只BALB/C裸鼠分为4组,每组5只,实验1～3组建立人舌癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂;第4组为未荷瘤对照组。①VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg。②错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg。③生理盐水组:注射生理盐水。各组每3天注射1次,共注射7次。实验结束后2d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片用免疫组织化学方法检测VEGF、PCNA、CD34的表达,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNALabelindex,PLI),分子原位杂交测VEGFmRNA表达。结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,肿瘤的体积和重量,VEGFmRNA及其蛋白和PCNA、CD34的表达均显著低于对照组。结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制舌癌细胞的生长、增殖。

成年大鼠嗅球成鞘细胞的原代培养及形态学研究

目的探讨大鼠嗅球成鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)分离与纯化培养方法并对形态学进行研究。方法取材后采用差速贴壁和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅鞘细胞,并分不同阶段进行观察和NGFRp75和GFAP免疫组化染色鉴定。结果成功培养出高纯度的嗅鞘细胞,胞体呈梭形、多突起形及油煎蛋形三种类型,突起细长编织成网状为其特点。结论差速贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法兼收了两者的优点,实践证实是一种简单经济而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。

重症监护病房获得性感染的发生及其相关危险因素分析

目的探讨重症监护病房(ICU)获得性感染的发生率及其相关危险因素。方法对2006年4月-2007年3月在ICU住院时间>48h的150例患者进行ICU获得性感染的调查分析。结果150例ICU患者中发生了106例次获得性感染,感染率为70.7%;肺炎(35.4%)和败血症(18.2%)是主要的感染;大肠埃希菌(32.4%)和铜绿假单胞菌(27.0%)是分离到最常见病原菌;多因素Logistic回归分析结果表明,ICU获得性感染的危险因素有ICU住院时间(>7d)(OR:7.02,95%CI:2.80～17.56);作为入ICU的一个主要原因的呼吸衰竭(OR值:3.7,95%CI:1.41～9.70);镇静药物的应用(OR值:3.34,95%CI:1.27～8.79);手术(入ICU之前和之后)(OR值:2.56,95%CI:1.06～6.18)。结论该研究提示了医院感染的高发病率,明确ICU获得性感染的相关危险因素,采取有效的预防措施,防止ICU获得性感染的发生。

人脐血清代替胎牛血清体外培养脐血树突状细胞

目的 探讨人脐血清取代胎牛血清对脐血来源的树突状细胞体外诱导的影响。方法 无菌采集脐血 ,密度梯度离心法获取界面细胞 ,采用Mini MACS分离技术 ,分离CD34+ 造血干细胞 ,分成 3组 :脐血清组 (加入含 10 %UCS的RPMI 16 4 0培养液及细胞因子 ) ,胎牛血清组 (加入含 10 %FCS的RPMI 16 4 0培养液及细胞因子 ) ,对照组 (含10 %FCS但不含细胞因子 )。细胞因子为IL 4、GM CSF和TNF α ,第 8天收集部分细胞做细胞表型分析、形态学观察。结果 脐血清培养的DC(UCS DC)表面CD80、CD5 4和HLA DR的表达率与胎牛血清培养DC(FCS DC)比较无明显差异 ,UCS DC、FCS DC表达率与对照组比较均明显增高。结论 脐血清代替胎牛血清体外培养脐血来源的DC前体细胞 ,可以诱导出成熟DC ,为临床应用提供了一种新的选择。

偏侧咀嚼对大鼠颞下颌关节滑膜影响的研究

目的:研究偏侧咀嚼对大鼠颞下颌关节滑膜的影响。方法:30只大白鼠随机分为6组,实验组间断磨除右上、下颌磨牙牙冠至龈下,对照组末做处理,饲养条件相同。实验1组磨除牙冠后4周末、实验2、3组磨除牙冠后10、16周末处死动物,取其双侧TMJ进行光镜切片检查,结果与对照组对照。结果:实验1、2、3组双侧颞下颌关节滑膜均出现受损的病理变化。结论:偏侧咀嚼可引起颞下颌关节滑膜损伤,是颞下颌关节紊乱病的病因之一。

颜面皮肤癌中NOS和VEGF的表达及其临床病理意义

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在颜面皮肤癌中表达的相关性;探讨三者与颜面皮肤癌血管生成和临床病理特征的关系;研究一氧化氮(NO)和 VEGF的相互作用及 NO在 VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 应用免疫组织化学方法检测47例颜面皮肤癌手术切除标本 VEGF、iNOS和 eNOS的表达,Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果 (1)32例颜面皮肤癌组织表达VEGF,30例表达iNOS,35例表达eNOS;(2)VEGF与iNOS的表达呈正相关,与eNOS的表达无相关;(3)VEGF、iNOS的表达与颜面皮肤癌MVD呈正相关, eNOS的表达与颜面皮肤癌MVD的差异无显著性意义;(4)VEGF的表达与颜面皮肤癌淋巴结转移和肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度呈正相关;与临床分期无关。iNOS表达与颜面皮肤癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度正相关;eNOS表达与颜面皮肤癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度均无关。结论 (1)iNOS对 VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响;(2)MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对颜面皮肤癌血管生成具有促进作用。

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒美洲株与猪Ⅱ型圆环病毒混合感染仔猪的血液病理学研究

选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSVATCCVR-2332株）并与猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）人工共同按种，在不同时期取外周血，进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测，比较不同按种组中各指标的差异性。外周血淋巴细胞采用碘化丙啶（PI）单染色法染色，借助流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明，两病毒感染对外周血各种指标都有一定的影响，WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TBIL感染组高于对照组；RBC、HGB、PLT及ALB感染组低于对照组；PRRSV单独感染以及与PCV2在混合感染的变化规律基本相同，但混合感染多项指标的变化幅度更大；MCV及TP无明显差异；两病毒接种组外周血淋巴细胞的凋亡比率显著高于对照组，攻毒后2～3d达到高峰，此后逐渐下降并趋于恢复，混合感染组的凋亡比率又高于单独感染组。文章就这些病理现象的发生及影响进行了分析讨论。

口腔鳞癌中NOS和VEGF的表达与血管生成及临床病理因素的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)在口腔鳞癌中表达的相关性 ;探讨三者与口腔鳞癌血管生成和临床病理特征的关系 ;研究一氧化氮 (NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 :应用免疫组织化学方法检测 64例口腔鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达 ,Ⅷ因子相关抗原 (FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色 ,计数肿瘤微血管密度 (MVD )。结果 :( 1) 3 9例口腔鳞癌组织表达VEGF ,42例表达iNOS ,45例表达eNOS ;( 2 )VEGF与iNOS的表达正相关 ,与eNOS的表达无相关 ;( 3 )VEGF、iNOS的表达与口腔鳞癌MVD呈正相关 ,eNOS的表达与口腔鳞癌MVD的差异无显著性意义 ;( 4 )VEGF的表达与口腔鳞癌淋巴结转移和肿瘤分化程度正相关 ;与临床分期无关。iNOS表达与口腔鳞癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移正相关 ;eNOS表达与口腔鳞癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移均无关。结论 :( 1)iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响 ;( 2 )MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加 。

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05)。结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长。

老年缺铁性贫血与幽门螺杆菌感染的临床分析

目的探讨铁剂合并抗幽门螺杆菌(Hp)治疗对老年人缺铁性贫血(IDA)伴Hp阳性慢性胃炎患者的贫血纠正效果,探讨Hp感染与IDA形成的相关性。方法将59例IDA伴Hp阳性慢性胃炎患者,分为A、B2组。A组单纯补铁治疗,B组联合应用补铁及Hp根除治疗;检测治疗前后其血红蛋白及血清铁、总铁结合力、铁蛋白水平,并对Hp进行检测。结果补铁联合抗Hp治疗较单纯补铁治疗效果显著(P<0.05)。结论Hp感染可造成或加重机体铁吸收不良,抗Hp治疗有助于提高IDA伴Hp感染患者的临床疗效。

成年大鼠嗅球成鞘细胞的分离培养及形态学研究

目的:探讨大鼠嗅球成鞘细胞(olfactoryensheathingcellsOECs)的分离培养方法并观察其形态。方法:采用差时贴壁和阿糖胞苷(Ara-c)抑制相结合的方法培养嗅鞘细胞,并在不同阶段进行观察和行NGFRp75和GFAP免疫组化染色鉴定。结果:成功培养出高纯度的嗅鞘细胞,胞体呈梭形、多突起形及油煎蛋形3种类型,突起细长编织成网状。结论:差时贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法是一种简单而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。

VEGF和NOS在口腔鳞癌组织中的表达

目的:研究口腔鳞癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达与癌细胞增殖的相关性。方法：应用免疫组化方法检测64例口腔鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS、eNOS和增殖细胞核抗原(PCNA)的分布及表达。结果：①39例(60.94％)口腔鳞癌组织表达VEGF，42例(65.63％)表达iNOS；45例(70.31％)表达eNOS；②VEGF与iNOS的表达具有明显相关性，VEGF与eNOS的表达无明显相关性；③表达VEGF的口腔鳞癌PCNA标记指数(PLI)明显高于不表达VEGF的口腔鳞癌；表达iNOS的口腔鳞癌PLI明显高于不表达iNOS的口腔鳞癌。表达eNOS的口腔鳞癌PLI与不表达eNOS的口腔鳞癌无显著性差异(P＞0.05)。结论：①VEGF与iNOS的表达具有明显相关性，说明iNOS在VEGF的生成和发挥作用过程中起重要作用；②PLI随着VEGF和iNOS表达的增加而增加；提示二者对口腔鳞癌细胞增殖具有促进作用。

成年大鼠嗅粘膜细胞原代培养及形态学研究

为了探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞(OECs)的分离与纯化培养方法并对其形态学进行研究,我们自鼻腔嗅粘膜取材后采用差速贴壁、机械刮除和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅粘膜细胞,并分不同阶段进行镜下观察及p75NGFR和GFAP免疫组化染色鉴定。结果显示,自嗅粘膜组织可以培养出四种细胞:梭形细胞、双极细胞、窝形细胞和大细胞。其中大部分梭形和双极细胞呈p75NGFR或GFAP免疫反应阳性,属于OECs。结果提示本文介绍的培养方法可以培养出嗅粘膜OECs;差速贴壁、机械刮除和Arac抑制相结合方法可纯化OECs。

ALV-J和REV诱导雏鸡胸腺细胞凋亡

应用原位末端标记法和HE染色法对人工感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和禽网状内皮增生症病毒(REV)的SPF雏鸡胸腺细胞的凋亡情况进行了检测,同时辅以电镜超薄切片观察。结果表明,ALV-J和REV均可诱导雏鸡胸腺细胞发生凋亡,混合感染诱导的细胞凋亡更加严重;切片中可出现局灶状凋亡,凋亡细胞多于坏死细胞。研究结果表明,细胞凋亡是导致感染鸡胸腺萎缩的主要原因。

高强度聚焦超声热疗法对原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

目的:探讨高强度聚焦超声热疗(highintensityfocusedultrasound,HIFU)对原发性肝癌患者免疫功能的影响。方法:泰安市中心医院肿瘤内科2002-10/2004-04原发性肝癌患者42例。分别取42例肝癌患者HIFU治疗前和治疗后4周外周血2mL,用流式细胞仪检测NK细胞,CD4+,CD8+T细胞百分数和CD4/CD8。结果:经HIFU治疗后肝癌患者的NK细胞百分数显著升高(t=7.475,P<0.05),CD4+T细胞百分数和CD4/CD8比值明显升高t=2.272,P(<0.05;t=3.216,P<0.01),CD8+T细胞百分数则下降(t=2.148,P<0.05)。结论:应用HIFU技术的物理热疗法可以改善肝癌患者体内的细胞免疫功能。

涎腺腺癌COX-2表达和肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)表达和涎腺腺癌血管生成的关系。方法免疫组化检测涎腺腺癌COX-2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,并测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果涎腺腺癌COX-2表达与VEGF、iNOS表达密切相关(P<0.05)。涎腺腺癌COX-2表达阳性组和阴性组MVD差异有统计学意义(P<0.01)。结论涎腺腺癌COX-2表达和肿瘤血管生成有关,iNOS和VEGF可能参与COX-2对肿瘤血管生成的促进作用。

普罗布考对血管性痴呆大鼠行为学及海马细胞凋亡的影响

1材料和方法 1.1材料 雄性3月龄清洁级Wistar大鼠60只,体质量（220±10）g,购于山东中医药大学。 1.2方法 将大鼠60只随机分为模型组、假手术组和普罗布考组,每组20只。模型组和普罗布考组大鼠以两血管法制作血管性痴呆模型[1],假手术组仅分离双侧颈总动脉不接扎。血管性痴呆模型采用Zea[Longa等5分制评分2]评价,1～3分表示造模成功,入组实验。最终,假手术组、普罗布考组和模型组分别有20只、18只和17只大鼠入组实验。普罗布考配制成浓度为5%的溶液,普罗布考组以普罗布考安体质量500mg／kg，1次／d，灌胃4周，模型组和假手术组以等体积羧甲基纤维素钠灌胃。

口腔鳞癌COX-2表达和肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)表达和口腔鳞癌血管生成的关系。方法免疫组化检测口腔鳞癌COX-2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,并测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果口腔鳞癌COX-2表达与VEGF、iNOS表达密切相关(P<0.05)。口腔鳞癌COX-2表达阳性组和阴性组MVD有显著差异(P<0.01)结论口腔鳞癌COX-2表达和肿瘤血管生成有关,iNOS和VEGF可能参与COX-2对肿瘤血管生成的促进作用。

大肠癌患者围手术期免疫治疗的意义

目的研究大肠癌患者的细胞免疫功能及外科手术对它的影响.方法分别应用APAAP法和乳酸脱氢酶释放法测定了43例大肠癌患者手术前后的外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性（NKCC），结果患者术前CD3，CD4，CD4／CD8比值和NKCC分别为53．8％±5．4％，35．7％±6．1％，1．21±0．14，17．1％±8．9％，较对照明显降低；CD8明显升高，为29．7％±5．3％；接受围手术期免疫治疗的10例患者，术后1wkCD3，CD4，CD4／CD8比值及NKCC较术前明显升高；而对照组术后2wk内各指标除NKCC有升高外，余无明显变化，至4wk～6wk各指标达正常水平．结论术后2wk内患者仍处于免疫抑制期，围手术期免疫治疗可提高患者的围手术期细胞免疫功能，缩短术后的免疫抑制期.