2014年山东省1株柯萨奇病毒B5分离株全基因序列分析

肠道病毒属于小RNA病毒科（picornaviridae）、肠道病毒属（enterovirus，EV）。基于肠道病毒衣壳蛋白VP1序列，将人EV分为4个组：HEV-A、HEV-B、HEV-C和HEV-D，其中HEV-B包括所有的ECHO病毒、柯萨奇病毒（coxsackievirus, CV）B组（CVB）、CVA9、EV69以及近几年发现的一些新型别。目前，柯萨奇病毒B组有B1～B6血清型。

2013～2014年山东省4株柯萨奇B4型分离株遗传分析

尽管柯萨奇病毒B4（Coxsackievirus B4,CVB4）分离率不高,但是在我国引起儿童脑炎的病例屡屡报道。目前人们对CVB4基因组的遗传变异了解并不多,GenBank公共数据库仅仅存储有20几个CVB4全基因组序列,分离自我国的CVB4基因组序列不足10条。本研究对2013~2014年山东省分离的4株CVB4阳性样本进行高通量测序,测得其全基因组序列,利用Mega 5.1对CVB4型毒株全基因组及VP1片段进行系统发生及同源性分析,用RDP3和SimPlot 3.5.1软件进行基因重组分析。结果显示这4株病毒为柯萨奇病毒B4（Coxsackievirus B4,CVB4）型,全基因组序列长度分别为7 372bp、7 389bp、7 389bp和7 391bp,核苷酸同源性为97.1%~99.9%,氨基酸同源性为98.5%~99.9%。与2013年温州CVB4分离株CVB4/P11/2013/China（GenBank登录号：KP289433）分离株同源性最高,核苷酸及氨基酸同源性分别为97.1%~98.3%和98.6%~99.4%。对VP1基因进行系统发育树分析表明,VP1基因可划分成5个基因型,基因型内部序列距离小于15%,而基因型间距离均大于15%。另外,4株CVB4分离株VP1的进化关系较近,同近年来国内其他分离株单成一簇,属于基因型V分支。经RDP3和SimPlot 3.5.1软件分析发现,这四个CVB4分离株均发生了基因重组,分离株SDJN/CHN/2013可能发生了两次基因重组。综上,这4个CVB4分离株基因组高度相似,均位于基因型V分支,且基因组发生了基因重组。

碳青霉烯类抗生素超级耐药细菌检测及抗菌策略研究进展

抗生素的滥用导致越来越多"超级细菌"的出现,对几乎所有已知抗生素耐药,严重危害人类健康。碳青霉烯类抗生素是治疗革兰阴性杆菌感染的最强效β-内酰胺类药物,但近年来出现的耐碳青霉烯类肠杆菌可将其水解,对抗感染治疗构成极大威胁。由于传统抗生素类治疗发展缓慢且疗效有限,新型抗菌药物和疗法的研究开发成为对抗超级耐药菌感染的重要发展方向。本文总结了超级细菌的新型快速检测技术和抗菌策略等方面的研究进展,为实验室研究和临床治疗提供参考。

柯萨奇病毒B组4型VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立

目的 以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4,CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原,建立并优化间接ELISA方法,用于CV-B4的抗体检测.方法 采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因,构建重组表达载体pET-32VP1,并转化至表达菌株大肠埃希菌Rosetta(DE3),进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定目的蛋白成功表达.以纯化的重组蛋白为包被抗原,进行间接ELISA方法反应体系的建立和条件优化.结果 CV-B4的VP1基因可在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达,确定抗体间接ELISA检测方法的抗原最佳包被浓度为7.5μg/孔,血清最佳稀释浓度为1:100,临界值为OD450值≥0.376,重组蛋白可与CV-B4阳性血清特异识别,与CV-B3阳性血清存在一定交叉反应,但与柯萨奇A组病毒以及CV-B1和CV-B5均无反应,表明蛋白具有良好的免疫原性.结论 大肠埃希菌表达的VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于CV-B4血清抗体的检测.