泰山赤灵芝多糖缓解大鼠动脉粥样硬化的分子机制研究

目的:研究泰山赤灵芝多糖处理动脉粥样硬化大鼠前后血脂的变化和胸主动脉细胞差异表达的基因,了解泰山赤灵芝多糖治疗动脉粥样硬化的分子机制。方法:全自动生化分析仪测定泰山赤灵芝多糖处理动脉粥样硬化大鼠前后血清TG、TC、HDL-C含量的变化;通过差异显示逆转录PCR(DDRT-PCR)技术研究泰山赤灵芝多糖处理动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞的基因表达差异,并用反向Northern证实差异显示基因片段。结果:泰山赤灵芝多糖处理动脉粥样硬化大鼠后,TG、TC含量均明显下降,而HDL-C和HDL-C/TC百分比明显升高;胸主动脉细胞出现一些表达上调和下调的基因片段。上调基因有细胞色素B561、ERP72、nitric oxide synthase 2和Gpx1;下调基因有胸腺素β4、FGFRI原癌基因伴随蛋白、FK506结合蛋白、ICAM-1、c-myc和TNF-α。结论:泰山赤灵芝多糖可减轻动脉粥样硬化风险,降低血脂。

泰山赤鳞鱼脂肪酸氨基酸组分分析

泰山赤鳞鱼为我国珍贵稀有鱼种。本文介绍首次分析泰山赤鳞鱼的脂肪酸及氨基酸组成。结果表明,赤鳞鱼的脂肪酸和氨基酸均有较高营养价值。

氮源对等鞭金藻生长和脂肪酸组成的影响

研究了在培养基中添加不同浓度的NaNO3、NH4 Cl、NH2 CONH2 对等鞭金藻生长和脂肪酸组成的影响。结果表明 ,当不在培养基中添加氮源时 ,等鞭金藻生长缓慢。但C16∶0 ,C18∶0 和多不饱和脂肪酸 (PUFAs)占总脂肪酸的比例最高。氮浓度在 0 9～ 7 0mmol/L之间 ,等鞭金藻的生长随着NH4 Cl浓度的增加而下降 ,随着NH2 CONH2 浓度的增加而升高 ,而受NaNO3浓度变化的影响不显著。以NaNO3或NH2 CONH2 为氮源 ,DHA占总脂肪酸的比例随着其浓度的增加先上升后下降 ,最适浓度为 3 5mmol/L。以NH4 Cl或NH2 CONH2 为氮源 ,PUFAs占总脂肪酸的比例随着氮浓度的增加而下降 ,且等鞭金藻DHA占干重的比例在 1 8mmol/L的浓度时达到最高 ,分别为1 8%和 1 6% ;以NO- 3为氮源 ,在浓度为 3 5mmol/L时DHA含量最高 ,为 2 2 %。在相同氮浓度下 ,DHA占干重的比例以NaNO3为氮源最高 ,以NH2 CONH2 为氮源时最低。

维生素C和芦丁对力竭运动小鼠组织自由基代谢的影响

目的:观察注射维生素C和芦丁后,急性疲劳性游泳运动小鼠机体各组织自由基代谢的变化情况。方法:实验于2004-09/12在泰山医学院基础医学研究所完成,选择雄性小鼠32只,随机分为4组,分别为生理盐水组、芦丁组、维生素C组和维生素C+芦丁组,每组8只。生理盐水组每天注射等量生理盐水,芦丁组注射芦丁5mg/d,维生素C组注射维生素C8mg/d,维生素C+芦丁组每天注射芦丁5mg和维生素C8mg,持续15d。各组小鼠进行池中游泳至力竭,力竭标准:动物不能在水中保持上浮,开始下沉,取出后尾部受刺激逃避呈踉跄步态,身体不能保持平衡,但呼吸心跳存在。麻醉后断头处死,测定小鼠脑、心、肝、肾和骨骼肌中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性分别采用硫代巴比妥酸比色法和氮蓝四唑光还原法。结果:所有小鼠全部进入结果分析,无脱失。①各组小鼠运动耐力比较:芦丁组、维生素C组及维生素C+芦丁组小鼠的耐力时间显著长于生理盐水组[(52.51±8.97,50.50±7.23和60.15±9.54,42.10±6.32)min(χ2=18.48～19.11,P<0.01)]。②各组小鼠各组织丙二醛/超氧化物歧化酶比值比较:芦丁组、维生素C组和维生素C+芦丁组小鼠心、肾、肝和肌组织中比值均显著低于生理盐水组(χ2=14.20～16.00,P<0.05),但维生素C+芦丁组的比值显著低于芦丁组和维生素C组(χ2=18.50～20.13,P<0.01)。结论:维生素C和芦丁均可降低丙二醛/超氧化物歧化酶比值,减少力竭运动后因脂质过氧化而产生的自由基,延长机体过度运动的耐力,但两者混合使用效果更好。

干旱胁迫下外源一氧化氮促进银杏可溶性糖、脯氨酸和次生代谢产物合成

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)供体,研究其在干旱胁迫下对银杏叶片物质代谢的影响。结果表明,在土壤相对含水量为35%的干旱胁迫下,250μmol/L SNP显著提高可溶性糖含量、脯氨酸含量、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)活性、黄酮类化合物和银杏内酯含量。NO清除剂血红蛋白(hemoglobin)抑制了SNP对银杏叶片可溶性糖、脯氨酸、PAL酶活性、黄酮和银杏内酯合成的促进作用,说明SNP是通过其分解产物NO影响这些物质的合成。推测在干旱胁迫下次生代谢产物黄酮类物质和银杏内酯的作用类似脯氨酸和可溶性糖,NO通过促进这些物质的合成,来缓解干旱胁迫的不良影响。

辣(甜)椒种质资源的RAPD分析(英文)

用RAPD技术对我国的34个辣(甜)椒品种进行了分析,22个随机引物共扩增出119条带,其中67条具多态性。采用Nei、Jaccard和欧氏距离3种方法计算各品种间的遗传距离矩阵,分别根据3个遗传距离矩阵进行UPGMA聚类分析,得出3个树形聚类图。聚类结果表明,IBPGR将辣椒种划分为4个变种的建议更为合理,Nei方法与Jaccard方法的结果均认为圆锥椒与灯笼椒的亲缘关系较近,而欧氏距离法的结果则认为所有辛辣类型的亲缘关系较近。研究还发现,栽培及育种活动在变种的发展过程中起到了重要作用。

动脉粥样硬化和淀粉样变性疾病发病机制研究:血清淀粉样蛋白P与血浆脂蛋白的相互作用

目的:研究人血清中淀粉样蛋白P(serumamyloidP,SAP)与血浆脂蛋白中高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)、极低密度脂蛋白(verylowdensitylipoprotein,VLDL)和低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)相互作用机制,为了解动脉粥样硬化和淀粉样变性疾病的发病机制提供理论依据。方法:①Sepharose4B(Pharmacia)亲和层析法提取人血清SAP,DEAE-Sepharose层析纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与标准SAP(Sigma)检测。②采用免疫探针生物素化试剂盒(Sigma)以1:10比例接合于生物素氨基己酸-N-羟基-硫琥珀酰亚胺酯。得到生物素-SAP。③VLDL,LDL,HDL用超速离心法分离。④以四甲基联苯胺(TMBZ)底物试剂盒用固相平板测定法检测SAP与脂蛋白相互结合。结果:①生理条件的Ca2+水平下,生物素-SAP以剂量依赖方式选择性地与HDL,VLDL结合。当SAP水平分别达到1.5nmol/L和2nmol/L时,SAP与HDL,VLDL的结合达到半饱和,当SAP水平达到4nmol/L和16nmol/L时,SAP与HDL,VLDL结合达到饱和。②SAP与HDL和VLDL的结合具有Ca2+依赖性。③EDTA可影响SAP和HDL,VLDL结合。④无论有无Ca2+和EDTA存在,未发现SAP和LDL间的结合。结论:SAP与HDL和VLDL结合而不与LDL结合。

产生志贺样毒素的噬菌体φ297整合酶基因(int)的克隆和序列分析

目的 :克隆并分析细菌性噬菌体 φ2 97的整合酶基因 (int)。方法 :采用加接头的基因DNA片断为模板进行步移PCR ,根据溶源性噬菌体 φ2 97的染色体DNA上类似于噬菌体 933W的整合酶基因的一个 40个核苷酸设计引物 ,进行扩增、克隆、亚克隆、测序和序列分析。结果 :得到了噬菌体 φ2 97编码的整合酶基因 (int)的完整序列 ,它的长度是 1 2 87bp ,编码了 42 8个氨基酸的Int蛋白质。将它们的序列与λ噬菌体的整合酶家族其它成员进行了比较 ,发现噬菌体 φ2 97的整合酶基因 (int)与噬菌体VT1 Sakai的整合酶基因有 79%的同源性 ,噬菌体 φ2 97的Int蛋白与噬菌体VT1 Sakai的Int蛋白在氨基酸序列上有 82 %的同源性。N 末端的氨基酸区域是完全保守的 ,而中心区和C 末端则显示出较大差异。结论 :噬菌体 φ2 97与λ噬菌体的int基因来源于同一基因库 ,噬菌体 φ2 97可能属于λ噬菌体家族。

以大肠杆菌β—葡萄糖醛酸酶培育牛黄实验研究

牛黄,即牛的胆结石。根据胆结石的成因,我们利用大肠杆菌产生的β-葡萄糖醛酸酶,在牛体外培育牛黄获得成功。

药物预适应对各部位心肌细胞缺氧再复氧的保护作用

目的:分析硝酸酯类药物预适应对不同部位的心肌细胞缺氧再复氧的保护作用。方法:实验于2003-05/2005-09在泰山医学院中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只,无菌取出心脏,培养不同部位的心肌细胞(心房、左心室、右心室),分为4组:①空白对照组:不作任何处理。②单纯缺氧/再复氧组:在含有体积分数为0.95的N2、0.03的CO2和0.02的O2混合气体的缺氧培养箱内孵育2h,正常培养箱内孵育1h。③L-精氨酸处理+缺氧/再复氧组:先用10mmol/LL-精氨酸处理细胞2h,然后进行缺氧再复氧。④缺氧预适应组:先将细胞缺氧15min,再复氧15min,循环4次,然后进行缺氧再复氧。观察各组细胞坏死率、细胞凋亡情况、培养液中乳酸脱氢酶浓度及细胞内游离钙离子浓度等。结果:①单纯缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著高于空白对照组(P<0.01),不同部位间比较差异无显著性意义(P>0.05)。②缺氧预适应组、L-精氨酸处理+缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著低于单纯缺氧/再复氧组(P<0.05)。结论:L-精氨酸的预适应同经典的缺氧预适应一样,可以对缺氧再复氧损伤产生明显的保护作用,其可能是通过降低心肌细胞内钙离子的浓度来发挥作用的,而不同部位的心肌细胞产生药物预适应的能力无明显差别。

食品中铬元素的含量分析

目的 了解常见食品中铬的含量 ,指导人群合理摄取铬元素 ,对糖尿病、动脉粥样硬化、冠心病患者的合理膳食提供理论依据。方法 用石墨炉原子吸收分光光度法测定 2 5种食品中铬含量。选用 35 7 9μm波长 ,采用二步干燥。测定回收率为 92 6 %～ 98 1% ,相关系数r =0 9987,回归方程Y =0 0 119C +0 0 76 6。结果 肉、蛋类中铬含量在 10 2～ 5 32 μg/kg之间 ,谷、豆和坚果类铬含量在 10 4 1～ 35 5 μg/kg之间 ,蔬菜、水果类铬含量在 35 8～ 2 14 7μg/kg之间。结论 铬含量以动物性食品最高 ,谷类食物居中 ,蔬菜。

血清淀粉样蛋白P与血浆脂蛋白作用机制的研究

目的 探讨人血清中淀粉样蛋白P(SAP)与血浆脂蛋白中HDL、VLDL和LDL相互作用机制。方法 ①Sepharose 4B(Pharmacia)亲和层析法提取人血清SAP ,DEAE Sepharose层析纯化。SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与标准SAP(Sigma)检测。采用免疫探针生物素化试剂盒 (Sigma)以 1∶10比例接合于生物素氨基己酸 N 羟基 硫琥珀酰亚胺酯。得到生物素 SAP。②VLDL、LDL、HDL用超速离心法分离。③以TMBZ底物试剂盒用固相平板测定法检测SAP与脂蛋白相互结合。结果 ①生理条件的Ca2 +浓度下 ,生物素 SAP以剂量依赖方式选择性地与HDL、VLDL结合。当SAP浓度分别达到 1.5nM和 2nM时 ,SAP与HDL、VLDL的结合达到半饱和 ,当SAP浓度达到 4nM和 16nM时 ,SAP与HDL、VLDL结合达到饱和。②SAP与HDL和VLDL的结合具有Ca2 +依赖性。③EDTA可影响SAP和HDL、VLDL结合。④无论有无Ca2 +和EDTA存在 ,未发现SAP和LDL间的结合。结论 SAP与HDL和VLDL结合而不与LDL结合。

高质量的丹参叶片DNA的提取方法研究

目的从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较4种DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。此法包括:CTAB-free buffer清洗,4倍CTAB抽提和固体PVP和Vc防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNA OD260/OD280为1.86,由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量DNA。

成纤维细胞影响心肌细胞搏动频率的观察

目的:观察影响心肌细胞搏动频率的各种因素并探讨其作用。方法:实验于2003-05/2005-09于泰山医学院生化教研室、中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只,无菌的取出心脏,培养不同浓度(0.5×108L-1,1.0×108L-1,1.5×108L-1,2.0×108L-1)的心肌细胞和成纤维细胞,分别在培养的第2,3,4天,利用Recorder-8050磁带式录像机观察并记录心肌细胞的搏动频率。同时将培养的心肌细胞分别用不同浓度的成纤维细胞培养液(80%,50%,20%)和不同时间间隔的成纤维细胞培养液(2,4,6d)进行处理,在培养的第2,3,4天观察心肌细胞的搏动频率。最后采用内皮素受体阻断剂BQ123(1.0×10-6mmol/L)处理心肌细胞,观察并分析内皮素能否影响心肌细胞的搏动频率。结果:①心肌细胞单独培养时,其浓度越大,培养时间越长,搏动频率越高。②低浓度组(0.5×108L-1)的搏动频率在96h达高峰,高浓度组(2.0×108L-1)的搏动频率在96h达高峰,两者之间有显著性差异(88.9±5.8次/min,144.2±6.2次/min,P<0.05)。③用成纤维细胞培养液培养心肌细胞,发现与对照组相比,第2天收集的培养液在48h时的作用最强(116.6±6.6次/min,89.7±4.2次/min,P<0.05);高浓度组在48h时的作用也最强,与对照组有显著性差异(100.3±7.9次/min,85.2±6.1次/min,P<0.05)。④BQ123能显著降低成纤维细胞培养液诱发的增加细胞搏动频率作用(113.9±6.5次/min,95.1±5.次/min,P<0.01)。结论:心肌细胞的搏动频率受多种因素的影响,是多种因素综合作用的结果。细胞的浓度、培养时间都能影响其频率;成纤维细胞培养液也能调节心肌细胞的频率;而内皮素可能是其发挥作用的关键物质之一。

健康成年人终末呼出气中戊烷的测定

利用气相色谱测定健康成年人终末呼出气中的戊烷,结果对照组0.136ppm±0.074ppm,吸烟组0.22dppm±0.156ppm,饮酒组0.128ppm±0.092ppm,吸烟伴饮酒组0.208ppm±0.109ppm。吸烟组和吸烟伴饮酒组高于对照组(P<0.05),说明吸烟可促进机体脂质过氧化作用,有害于身体健康。饮酒组与对照组无显著差别,饮酒对机体脂质过氧化作用的影响需进一步研究。

体内外啤酒对血清酶活性的影响

目的研究体内外啤酒对血清酶活性的影响。方法利用17名健康志愿者,观察口服啤酒(4 ml/kg)前后不同时间血液中酒精浓度及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)活性的变化,同时在体外加入血清中与体内浓度相近的啤酒,以观察啤酒对酶活性的直接影响。结果啤酒在体内可使血清AST活性由(25.08±3.52)U/L降至(23.00±3.78)U/L,使血清ALP活性由(220.67±26.17)U/L升至(237.73±24.05)U/L。其余酶活性均有不同程度的升高。等浓度啤酒在体外对所有酶活性均有一定程度的抑制作用。结论体内外啤酒对血清酶活性均有一定的影响(P<0.01),在常规血清酶学检测中,应注意和避免饮用啤酒对检测结果的干扰。

火鸡疱疹病毒繁殖非必须基因重组病毒用转移载体的构建

目的 构建用于基因工程疫苗制作的火鸡疱疹病毒 (HVT)外源基因转移用载体。方法 利用PCR技术 ,从感染火鸡疱疹病毒的鸡胚成纤维细胞 (CEF)基因组中成功地扩增出火鸡疱疹病毒的繁殖非必须基因 US基因 ,将该PCR产物克隆进PGEM T载体中 ,利用末端平滑化技术和连接反应 ,把报告基因LacZ基因插入到US基因中。结果 构建出了用于制作重组HVT病毒的转移载体。结论 本研究以LacZ作为报告基因 ,成功的将其插入到US基因中 。

复方二仙汤有效成分提取工艺的研究

目的优化复方二仙汤的提取工艺。方法以总黄酮、总生物碱和总皂苷及干膏收率为考察指标,以不同浓度乙醇索氏提取,并用正交试验设计乙醇回流法提取二仙汤。结果正交试验优选的乙醇回流提取法优于索氏提取,最佳工艺为10倍量60%乙醇回流,提取3次,每次提取60分钟。结论最佳提取方法有效成分溶出率高,工艺稳定可行。