多学科联合培养研究生的实践与体会

通过分析研究生、导师和授课教师队伍以及实验环境的特点和优势,结合专业特点,介绍了多学科联合培养研究生的过程和经验:以学位课程教学、学位论文研究过程为线索,寻找学科交叉点和知识突破口;针对不同知识结构研究生设立专业基础课、专业选修课,达到强化基础理论和基本技能训练,确保培养质量的目的。

pDsRed-hAPJ质粒载体构建及在人HEK293细胞中的表达(英文)

背景:Apelin/APJ系统具有广泛的生理作用,但其在细胞内信号转导,特别是apelin受体的脱敏,内化、复敏降解等方面仍无一致性见解。目的:构建人apelin受体APJ与红色荧光蛋白pDsRED-express-C1融合的真核表达载体并检测其在人胚胎肾293细胞中的表达。方法:以质粒pcDNA3.1-hAPJ为模板,扩增人APJ,用EcoRI和BamHI分别酶切扩增的产物和pDsRED-express-C1载体,常规连接、转化感受态大肠杆菌TOP10。提取质粒,进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染,PI染色,激光共聚焦显微镜观察。结果与结论:PCR扩增出约1.2kb的片段,与预期的人APJ大小序列相符,酶切结果显示重组质粒被切成2条片段,其中一条为pDsRED载体大小,另一条为目的片段大小。共聚焦显微观察显示APJ主要表达在细胞膜上。说明实验成功构建了pDsRed-hAPJ真核重组质粒,此表达载体为研究人APJ的亚细胞区域的位移、内吞定位提供了重要的工具。

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

目的 观察针刺干预对于大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙、Caspase-3 mRNA及大鼠双前肢抓力的影响.方法 145只成年雄性SD大鼠随机分成对照组（sham）、缺血再灌注组（1/R）和针刺组（I/R＋EA）.选用Longa改良线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO）.实验大鼠处死后取材制成单细胞悬液,经Fluo-3/AM标记,用激光扫描共聚焦显微镜检测脑细胞[Ca^2＋]i浓度.应用RT-PCR技术检测大鼠大脑皮层和纹状体内Caspase-3 mRNA表达的变化.大鼠双前肢抓力试验检测大鼠神经功能重建情况.结果 ①针刺干预6h后[Ca^2＋]i为10.96±1.18,针刺12h后为20.9±4.73,与缺血再灌注组[16.87±3.56,34.10±1.06]比较显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）.②I/R组大脑皮层及纹状体Caspase-3 mRNA表达增强;电针干预后Caspase-3 mRNA表达与I/R组比较明显下调.③针刺7d、14d大鼠抓力明显高于脑缺血再灌注7d、14d,针刺30d、60d、90d大鼠抓力与脑缺血再灌注30d、60d、90d组大鼠抓力无明显差异.采用单因素方差分析,I/R＋EA与sham及I/R组比较（P＜0.05）,差异有统计学意义.结论 缺血急性期针刺干预显著降低大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙的浓度及Caspase-3 mRNA的表达;并有效促进大鼠神经功能的恢复.

大鼠尾核内Apelin的痛觉调制作用及其机制的实验研究

目的探究Apelin在尾核内对大鼠的痛觉调制作用及其可能的作用机制。方法采用辐射热作为伤害性刺激，以安静状态下大鼠的甩尾潜伏期（TFL）为测痛指标，尾核内注射Apelin、吗啡、纳洛酮等，观察给药90min内Apelin的痛觉调制作用及其对吗啡中枢镇痛作用的影响。检测给药40min后大鼠尾核组织和血浆中cAMP与cGMP水平，探究Apelin在痛觉调制过程中可能的作用机制。结果Apelin有显著的痛敏作用，在10^-4mol／L时作用最显著，给药10min后大鼠痛阈下降[（-9．22±1．26）％]，40min后痛阈下降至最低[（-16．95±1．46）％]，分别与生理盐水组[（-0．32±1．2）％、（0．17±0．80）％]比较有统计学意义（P〈0．01）；大鼠尾核内微量注射吗啡后再注射Apelin，结果表明Apelin能抑制吗啡的中枢镇痛作用（P〈0．01）；大鼠尾核内注射Apelin后，尾核cAMP含量为（14．08±2．25）nmol／g，血浆cAMP含量为（19．94±4．43）nmol／L，分别与生理盐水组[（133．05±20．41）nmol／g、（38．66±6．73）nmol／L]比较，有非常显著的统计学意义（P〈0．01）。结论Apelin有中枢痛敏作用，这种痛敏作用可能与阿片系统有某种内在联系并通过细胞内第二信使cAMP发挥效应。