MAPK/ERK特异性抑制剂对结核杆菌低分子多肽抗原活化γδΤ细胞的影响

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（MAPK/ERK）特异性抑制剂PD98059对结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）活化γδΤ细胞的影响。方法分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC），分别使用佛波醇酯＋离子霉素（PMA＋IM）、MtbAg刺激PBMC，流式细胞术检测处理0、6、12、24、48和72 h后γδΤ细胞CD69的表达。浓度为0、1、10和100μmol/L的PD98059预处理PBMC后再分别加入MtbAg（MtbAg组）、PMA＋IM（PMA＋IM组）处理24 h，流式细胞术检测活化γδΤ细胞CD69的表达；Mtb-Ag组继续培养10 d后收集细胞计数细胞总数、检测γδΤ细胞比例并计算γδΤ细胞的绝对数量。结果使用PMA＋IM处理6 h，γδΤ细胞CD69表达达高峰；使用Mtb-Ag处理24 h，γδΤ细胞CD69表达达高峰。处理后同一时点两组γδΤ细胞CD69表达比较，差异均具有统计学意义（均P〈0.05）。使用终浓度分别为0、1、10和100μmol/L的PD98059预处理PBMC后再分别加入Mtb-Ag、PMA＋IM处理24 h，流式细胞术检测显示Mtb-Ag组γδΤ细胞CD69表达分别为（79.0±0.8）%、（75.0±0.7）%、（54.0±0.5）%和（17.0±0.2）%，而PMA＋IM组γδΤ细胞CD69表达均在98%以上；MtbAg组继续培养10 d后，细胞总数由培养前的1.5x106分别增殖到（10.3±2.5）x106、（9.5±2.1）x106、（5.8±1.8）x106和（2.1±0.5）x106，γδΤ细胞数分别增殖到（6.2±0.9）x106、（5.0±0.8）x106、（2.1±0.5）x106和（0.4±0.1）x106。结论 Mtb-Ag可以通过MAPK/ERK信号转导通路特异性活化γδΤ细胞。