皮肤增生性病变研究的最新进展:上皮间质过度增生的假上皮瘤样增生

假上皮瘤样增生(pseudoepitheliomatoushyperplasia,PEH)病变是临床上罕见的以上皮-间质过超长生为特征的良性病变,多继发于皮肤创(烧)伤、炎症刺激、慢性皮肤病和皮肤肿瘤等多种疾病。部分病例可见calretinin等神经相关蛋白异常表达和表皮生长因子受体信号通路的活化。上皮-间质细胞之间激烈的相互作用引起是上皮细胞过度增殖和异常分化,可能是PEH病变发生的重要机制,对研究肿瘤发生机制具有指导意义。就PEH的原发病、临床和病理组织学特征、组织学起源和发病机制等内容进行概述。

无细胞异体真皮基质的研究进展

真皮能充当薄的断层自体皮移植物(STSGs)和培养的表皮自体移植物(CEAs)稳定的载体,足够厚的真皮能抑制创面收缩和瘢痕形成,并改善 CEAs 的存活。近年,通过酶和去污剂联合脱细胞技术,能去除异体真皮组织内诱导炎症-免疫反应的细胞和部分细胞外基质成分,制成充当复合皮(CS)真皮替代物(DS)的无细胞异体真皮基质(Allo-ADM)。目前,Allo-ADM 与 STSGs 或 CEAs 重叠移植。

不同脱细胞方法对无细胞真皮基质抗原成分的影响

目的:异体/异种真皮无细胞化可直接关系到移植后局部炎症反应-免疫反应程度和复合皮的质量,因而探索不同的脱细胞方法对无细胞真皮基质抗原成分的影响。方法:实验于1999-07/2000-07在第四军医大学动物实验外科完成。将人和小猪正常中厚皮肤经体积分数为0.002的戊二醛交联后,用1.25g/L胰蛋白酶、1.25g/Ldispase和高渗盐(3mol/LNaCl)分别与体积分数为0.005的TritonX-100依次或同时进行脱细胞处理24h,制成的脱细胞真皮基质(ADM),再通过组织学和免疫组化方法进行抗原性比较。结果:单独使用胰蛋白酶、dispase和NaCl处理能使表皮有效地移除,但真皮中仍有较多细胞残留,如将其与TritonX-100联合或再经Tri-tonX-100处理24h后,真皮组织内细胞相关抗原(HLA-ABC,HLA-DR,波形蛋白,结蛋白,肌动蛋白,Ⅷ因子相关抗原和细胞角蛋白)全部消失,并且细胞外基质成分(透明质酸、纤连蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原)以及Ⅰ,Ⅲ和Ⅶ型胶原等抗原明显减弱。相比之下,戊二醛交联组和NaCl+TritonX-100处理的ADM浅层保留较多的Ⅳ型胶原、纤连蛋白和层粘连蛋白成分。各种方法制备ADM的抗原强弱依次为:NaCl(+TritonX-100)>dispase(+TritonX-100)>胰蛋白酶(+TritonX-100)。结论:采用胰蛋白酶联合去污剂制备ADM是一简单。

局部炎症反应与无细胞异种真皮基质移植物的降解吸收关系

目的 探讨不同方法制作的无细胞异种真皮基质(Xeno-ADM)移植物降解吸收与炎症反应之间的关系。方法 猪和兔断层中厚皮片经Trypsin和TritonX-100等脱细胞,分别制成Xe-no-ADM和异体ADM(Allo-ADM),再按不同的预处理因素进行分组:(1)戊二醛交联的Xeno-ADM(A)组;(2)网状交联的Xeno-ADM(B)组;(3)未交联的:Xeno-ADM(C)组,预先被Xeno-ADM蛋白致敏的兔皮下植入;(4)交联的Xeno-ADM(D)组;(5)Allo-ADM(E)组。每组80块ADM分别埋植于兔耳和背部皮下。结果在背部的移植物较耳部炎性反应和降解吸收明显,至术后32wk时,E组以外的其它组移植物解剖学和组织学结构消失,D组和A组炎症反应滞后,可见较多的异物巨细胞,各组ADM炎症反应与降解/吸收的程度依次为:C>B>D>A>E(P<o.05～O.001),二者之间有显著的正相关(n=84,r=0.185,P<0.01)。结论Xeno-ADM生物相容性不及Allo-ADM,其异种蛋白抗原诱导的炎症-免疫反应可能是移植物降解最重要和直接的原因。

凋亡相关基因在烧伤增生性瘢痕中的表达水平和组织学分布特征

目的探讨凋亡相关基因Bcl－2和Bax在增生性瘢痕（HS）中的表达水平和分布特征及其与瘢痕增生和退化关系。方法检测HS中Bcl－2和Bax的表达。结果正常皮肤不表达Bcl－2，在HS中Bcl－2和Bax的阳性率为100％。浅层Bcl－2阳性细胞率高达64％～78％，显著高于其他时间点标本和同一标本的中层和深层（P< 0.01），仅成纤维细胞表达阳性；Bax在瘢痕增生的全过程和各层组织均有较高的阳性细胞率（52％～69％）和广泛的细胞分布，显著高于正常皮肤（P< 0.01）。结论深度烧伤创面愈合后，浅层成纤维细胞过度表达Bcl－2可能与创伤修复失控和HS形成有关，而广泛的Bax蛋白的过度表达可能具有抵抗Bcl－2活性作用，加速细胞的生理性凋亡和瘢痕成熟。

提高无细胞异体真皮基质复合移植的成活率

目的 提高无细胞异体真皮基质 (Allo ADM)复合移植的成活率。方法 将 36块经胰蛋白酶和戊二醛等处理的网状Allo ADM与超薄断层自体皮片 (Auto UTS)一次性重叠移植于 2 1例烧伤患者的三度切痂创面和整形患者的切疤创面上 ,以邻近Auto UTS和断层中厚自体皮片 (Auto TTS)移植物为对照 ,观察Allo ADM的厚度和术后首次换药时间对复合皮 (CS)成活率 (% )和皮片质量的影响。结果 CS组总体成活率较Auto UTS组和Auto TTS组低 (P <0 0 5) ,其中薄的 (0 2mm～ 0 3mm)Allo ADM组比较厚的 (0 3mm～ 0 5mm)Allo ADM组成活率高 (P <0 0 1 ) ,延期换药组(1 2～ 1 7)成活率明显高于按期换药组 (4～ 7天 ) (P <0 0 1 ) ,薄的Allo ADM组和延期换药组均与对照组无显著性差异。随访 1～ 4年 ,CS组未见排异反应和瘢痕增生 ,外观色质和弹性近似正常皮肤而优于Auto TTS组。组织学上 ,2周时双层CS与创基之间可见Allo ADM网孔内血管蒂状结构 ,与对照组相比 ,52周时CS组真皮层胶原排列有序 ,有较少的淋巴细胞散在分布。

干细胞的可塑性与皮肤再生医学

干细胞具有稳定的存活、增殖和保持多向分化潜能的特性,在皮肤再生医学和未来组织工程皮肤领域具有广泛的研发潜力。在成年动物皮肤、神经系统、骨髓造血系统和肝脏等多种组织中存在着增殖和分化能力强的干细胞。本文主要就干细胞的分类、干细胞的可塑性、成熟细胞向干细胞逆分化、干细胞基因治疗与皮肤再生医学,以及干细胞临床应用的安全性等内容系统地进行了概述。

无细胞异体真皮基质在关节功能部位整复中的应用

目的 观察无细胞异体真皮基质 (ADM)在功能部位的移植效果。方法 选择 11例大面积烧伤后产生增生性瘢痕伴有关节功能障碍的患者 ,将 13块经胰蛋白酶等处理制成的网状ADM与超薄断层自体皮片 (USSG)重叠 ,一次性移植于 9例患者四肢关节部位的切瘢创面上 ,并以邻近的断层中厚自体皮片 (TSSG)移植物为对照组 ,2W后首次换药 ,定期作CS随访和组织活检观察。结果 与对照组一样 ,CS移植物全部成活 ,随访 1～ 5年未见排异反应和瘢痕增生 ,外观质地和功能接近正常皮肤 ,真皮层无皮肤附件 ,胶原排列有序 ,仅有少量淋巴细胞散在浸润。结论 充当真皮替代物的ADM可以用于功能部位瘢痕挛缩的整复治疗。

免疫组化方法检测猪和人皮肤通用抗原标志

目的 探讨猪与人皮肤组织蛋白抗原性的差异。方法 人和小猪全厚正常皮肤作冰冻切片 ,用抗人皮肤组织相关抗原 (HLA ABC ,HLA DR ,Vimentin ,Desmin ,Actin ,FⅧRA ,Cytokeratin)、细胞因子及其受体和胞外基质 (Hyalu ronicacid ,Fibronectin ,Laminin ,TypeⅣcollagen ,Estradiol 17β和Testosterone)及Ⅰ Ⅲ Ⅶ型胶原等抗原成分的单克隆或多克隆抗体进行免疫组化染色 ,比较猪与人皮肤组织抗原性异同。结果 在猪皮肤组织可检测到I Ⅲ Ⅳ Ⅶ型胶原和Hyaluronicacid、Fibronectin、Laminin、FⅧRA、Cytokeratin、IL 6、IL 8、Estradiol 17β、Testosterone及ICAM 1;多克隆抗体阳检率明显高于单克隆抗体 ;其中细胞外基质成分和分子量较小的细胞因子 ,以及结构或功能原始的蛋白分子在猪与人皮肤有较好的同源性 ,而某些蛋白分子 (如细胞因子或激素的受体和淋巴细胞CD分子等 )则多为阴性 ,显示抗体 抗原结合反应的特异性及其种族差异。结论 猪与人皮肤组织抗原之间存在很大的差异 ,猪血管内皮细胞表达人ICAM 1,提示二者粘附分子可能存在物种间的交叉 ,可能与异种皮肤移植难以存活有关。

无细胞异种真皮基质临床应用的免疫反应特征

目的 探讨临床应用异种猪 /异体人无细胞真皮基质 (s /h ADM )的免疫反应特征。方法 在临床大面积烧伤患者深度切痂创面上 ,将s ADM或h ADM与超薄断层自体皮重叠移植 ,采用免疫组化和原位杂交方法检测移植物中CD3、CD4、CD8、γ 干扰素 (IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )阳性细胞的百分比 (% ) ,以及IFN γ和IL 4mRNA的表达水平。结果 浸润于ADM组织中免疫细胞以CD4和IL 4阳性细胞为主 ,与免疫组化结果一致 ,IL 4mRNA在所有标本中均有较高的表达水平 ,s ADM组表达显著强于h ADM组 (P <0 0 5 ) ,在发生排异反应前的s ADM组织中IL 4mRNA和IFN γmRNA一样阳性细胞均明显增加 ,而排异后两者均显著下降 ;IFN γmRNA仅在h ADM组移植早期有弱阳性表达 ,与s ADM组统计学有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,接近于断层中厚自体皮片移植物。结论 s ADM移植后的免疫应答是由异种组织特异性蛋白引发的Th2淋巴细胞介导的体液免疫过程。

免疫组化方法检测猪与人皮肤通用抗原标志

目的 :探讨猪与人皮肤组织蛋白抗原性的差异。方法 :人和小猪全厚正常皮肤做冰冻切片 ,用抗人皮肤组织相关抗原 (HLA -ABC ,HLA -DR ,Vimentin ,Desmin ,Actin ,FⅧRA ,Cytokeratin)、细胞因子及其受体和胞外基质 (Hyaluronicacid ,Fibronectin ,Laminin ,TypeⅣcollagen ,Estradiol- 1 7β和Tstosterone)及I、Ⅲ、Ⅶ型胶原等抗原成分的单克隆或多克隆抗体进行免疫组化染色 ,比较猪与人皮肤组织抗原性异同。 结果 :在猪皮肤组织可检测到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ型胶原和Hyaluronicacid ,Fibronectin ,Laminin ,FⅧRA ,Cytokeratin ,IL - 6 ,IL - 8,Estradiol- 1 7β,Tstosterone和ICAM - 1 ;多克隆抗体阳检率明显高于单克隆抗体 ;其中细胞外基质成分和分子量较小的细胞因子 ,以及结构或功能原始的蛋白分子在猪与人皮肤有较好的同源性 ,而进化较大的蛋白分子 (如细胞因子或激素的受体和淋巴细胞CD分子等 )则多为阴性 ,显示抗体 -抗原结合反应的特异性及其种族差异。结论 :猪与人皮肤组织抗原之间存在很大的差异 ,猪血管内皮细胞表达人ICAM - 1 ,提示二者粘附分子可能存在物种间的交叉 ,可能与异种皮肤移植难以存活有关。本研究为异种脱细胞真皮基质的临床应用提供了有用的资料。

皮肤假上皮瘤样增生病变的研究进展

皮肤创(烧)伤、炎症刺激、慢性皮肤病和皮肤肿瘤等多种疾病可继发罕见的假上皮瘤样增生(pseudoepitheliomatous hyperplasia, PEH)或假上皮瘤样肉芽肿(pseudoepitheliomatous granuloma)病变[1,2].迄今对PEH病变的发病机制知之甚少.为此,笔者就PEH的基础病因、临床和病理学特征、组织学起源和发病机制的近年研究进展进行了综述.

血管生成因子及其受体过表达与瘢痕疙瘩侵袭性生长

目的 探讨瘢痕疙瘩组织中血管生成因子及其受体表达异常与侵袭性生长的关系。方法 将 17例患者的瘢痕疙瘩 (Ke)标本分成老化部组 (Ke A ,n =9)、增生部组 (Ke P ,n =13)、浸润部组 (Ke I,n =9)、Ke周围正常皮肤组 (Ke N ,n =10 )和非Ke患者正常皮肤组 (NS ,n =10 ) ,采用组织学、免疫组化染色和计算机图像分析方法 ,检测碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及其受体 Flg ,血管内皮生长因子 (VEGF)及VEGF KDR复合物 (11B5 ) ,血小板源性生长因子 (PDGF A)和受体 PDGFR α以及α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)表达水平。结果 组织中的成纤维细胞 (Fb)、单核 巨噬细胞 ,血管内皮细胞和周细胞、表皮细胞和附属器上皮细胞对bFGF、Flg、VEGF、11B5、PDGF A和PDGFR α均有表达。 5组标本强弱依次为 :Ke I >Ke N≌Ke P >Ke A≌NS(P <0 0 5～ 0 0 1) ,Flg >bFGF≌PDGFR α >PDGF A >≌ 11B5 >VEGF(P <0 0 1) ,仅在Ke I组α SMA阳性的肌成纤维细胞强表达11B5和VEGF。组织学微血管呈现内膜过度增生和血管闭塞 ,伴有浅层血管过度扩张和出血征象。结论 : 瘢痕疙瘩侵袭生长可能与血管生成因子及其受体过表达有关 ,肌成纤维细胞异常表达 11B5可能是其具有肿瘤生长特性的重要因素 。