两株高特异性抗恩诺沙星单克隆抗体的研制

为自主研制抗恩诺沙星的高亲和力、高特异性单克隆抗体,提供动物源食品中恩诺沙星药物残留生物学快速检验方法试剂,利用碳二亚胺法(carbodiimide,EDC)制备恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)的人工抗原,免疫Balb/c小鼠,采用PEG融合法,通过有限稀释法筛选出抗恩诺沙星的单克隆抗体,获得了两株抗恩诺沙星的单克隆抗体(克隆号:6A4和8D6)。经过离子交换法纯化得到的抗体纯度在95%以上,其中,纯化后的6A4抗体在1mg/mL时,效价达到1.28×10-5,8E6抗体在1mg/mL时,效价达到1.024×10-6。两株单克隆抗体与环丙沙星的交叉反应率为1.5%,与其他氟喹诺酮类药物不反应。在酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)中,6A4和8E6抗体的检测限分别为3.125μg/kg和0.3μg/kg。采用的半抗原合成以及单克隆抗体筛选的方法可以获得高灵敏度、高特异性的抗恩诺沙星的单克隆抗体,经后续研究证实单克隆抗体(8E6)可以用于免疫胶体金和酶联免疫法检测食品中残留的恩诺沙星。

马鼻肺炎病毒双重PCR分型检测方法的建立

根据GenBank中登录的马鼻肺炎病毒1、4型(EHV1、EHV4)糖蛋白B(gB)基因特异保守序列(登录号分别为AY665713、AF030027.1),各设计1对引物,建立了同时分型检测EHV1、EHV4的双重PCR方法;确定其最佳工作条件,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。结果显示,在EHV1、EHV4中分别扩增出265bp和537bp的特异性目的条带,而马流感病毒cDNA、马动脉炎病毒cDNA、马乙型脑炎病毒cDNA及马传染性贫血弱毒疫苗株cDNA均未扩增出任何条带。EHV1的DNA最低检出限为2.1pg,EHV4的最低检出限为15pg。表明本试验建立的方法具备很高的应用价值。