miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析

目的:通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果:HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。结论:miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。

Akt和胞外信号调节激酶通路间的信号交流对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控

目的研究内质网应激介导的磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／Akt和丝裂原活化蛋白激酶（MEK）／胞外信号调节激酶（ERK）途径间的信号交流及其对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控作用。方法采用P13K抑制剂LY294002、Akt激活型突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126分别阻断或激活内质网应激介导的Akt和ERK活化，并利用Westernblot和流式细胞技术分析内质网应激条件下P13K／Akt和MEK／ERK途径间的信号交流及其对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B和HepG2细胞周期的调控作用。数据处理采用Sperman等级相关分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果阻断P13K／Akt明显促进内质网应激介导的MEK／ERK活化，而过度激活P13K／Akt则抑制内质网应激介导的MEK／ERK活化。阻断MEK／ERK对内质网应激介导的P13K／Akt活化无影响。持续活化的Akt突变载体myr—Akt和MEK抑制剂U0126均明显抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0／G1期阻滞。结论P13K／Akt和MEK／ERK信号途径在内质网应激肝癌细胞中存在信号交流，该信号交流对细胞周期起重要调控作用。

慢性乙肝肝郁脾虚证血浆蛋白质组学分析

目的通过对比分析慢性乙肝肝郁脾虚证与正常健康对照组的血浆蛋白质组表达谱,探讨参与慢性乙肝肝郁脾虚证病理生理过程的分子机制。方法采用双向电泳技术结合生物信息学分析方法对慢性乙肝肝郁脾虚证及正常健康对照组的血浆全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果获得了8个有明显规律性变化的差异表达蛋白点,其中有2个蛋白点表达量有所升高,6个差异蛋白点表现为明显下调趋势。结论研究发现的这些差异表达蛋白质可能直接或间接参与了慢性乙肝肝郁脾虚证病理生理过程的分子机制。