提高医学分子生物学实验课教学质量的体会

随着生命科学迅速发展，医学分子生物学作为一门基础学科．越来越受到教师和学生的普遍重视，在国内许多院校的研究生和本科生课程中均列为必修课或选修课。分子生物学实验课程不仅要求学生提高实验动手能力．而且要在实验中感受、理解知识的产生和发展过程，把所学理论运用到实践中解决实际问题．培养学生独立思考和工作创新精神。为了提高实验教学质量，帮助学生加深理解基本知识，增长基本技能，以适应高等教育改革发展的需要．我们从实验准备、实验教学方法等方面，结合教学实际做了一些探讨、实践，积累了一点经验和体会。

多媒体在医学分子生物学教学中的应用

分子生物学主要研究细胞和大分子体系的结构、功能、相互作用及其同疾病发生、发展的关系。它渗透到生命科学的各个领域,同时与临床医学的疾病诊断、治疗联系日趋紧密。然而其理论深奥,内容繁杂,涉及学科广泛,信息量大,其枯燥死板、易学难记是历届学生普遍反应的一个焦点问题．教师教学也有难度。

医学分子生物学教学模式改革初探

医学分子生物学（medical molecular biology）是一门理论知识和实验技术并重的医学基础课,该学科已经迅速渗透到生命科学的各个领域,越来越成为生命科学的共同语言。

PBL教学法在医学分子生物学教学中的应用

PBL教学法是一种近年来引入我国的一种全新教学模式,它可以提高学生的自学能力和解决问题的能力。本文作者总结了在《医学分子生物学》理论课教学中采用PBL教学模式的实践经验,证明了PBL教学方法对于提高学生综合思考能力很有帮助,激发了学生学习的积极性、主动性和创造性,同时也显示学生对于PBL教学模式有很高的热情,通过讨论合作,提高了学生的团队合作精神。

大鼠骨髓间充质干细胞的培养及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究

目的:探讨在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的方法。方法:分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞并用β-巯基乙醇诱导分化为神经元样细胞,使用免疫组化方法鉴定其神经元特异性巢蛋白(nestin)的表达,同时应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)对神经元样细胞的凋亡情况进行定性检测。结果:β-巯基乙醇诱导后MSCs分化为具有典型的神经元形态的细胞,免疫组化实验显示Nestin呈强阳性反应,表明MSCs在体外诱导分化为神经元样细胞。但该细胞在诱导5小时后开始死亡,形态学观察和TUNEL法均确定该死亡为细胞调亡,提示MSCs诱导为神经元样细胞后出现凋亡现象。结论:大鼠MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞,其随后发生的细胞死亡属细胞凋亡。

CCK-8对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤保护相关蛋白质的实验分析

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤的保护作用。方法检测CCK-8对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠模型的刺激前后血糖和血清胰岛素的水平,采用双向电泳并结合生物信息学方法,观察刺激前后胰腺组织蛋白质表达的差异。结果初步确定了CCK-8刺激引起胰岛细胞JIP1、RBBP7、PP2AB、PDX1、BCLX5种蛋白质的表达明显增强,这些蛋白在促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、刺激胰岛素基因表达等方面发挥重要作用。结论CCK-8可能通过刺激特异蛋白质的表达,对糖尿病大鼠受损胰岛细胞起到一定的保护和恢复作用。

胆囊收缩素对神经元蛋白磷酸化的实验研究

目的探讨CCK8对神经元蛋白质磷酸化修饰的影响,为研究CCK8在神经系统中的信号转导提供线索。方法培养乳小鼠神经元,32P-NaH2PO4(2.03×105Bq/mL)掺入2h后,实验组加入终浓度为10-7mol/L的CCK8,对照组加入无磷培养基,37℃孵育0、5、20、60和120min后,液氮终止反应,提取蛋白,测定蛋白含量,分离蛋白后,放射自显影获得磷酸化蛋白质的图谱,采用PDQuest2D分析软件进行图像分析。结果放射自显影图谱显示,与对照组比较,CCK8刺激后,神经元磷酸化蛋白质斑点有明显改变;采用PDQuest2D软件进行差异蛋白质分析显示,与CCK8信号转导相关的磷酸化蛋白质包括了多种蛋白激酶、细胞膜受体、胞内信号分子、转录因子等。结论根据磷酸化蛋白质组分析的结果推测CCK8在皮质神经元的信号转导途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径等。

槲皮素对LPS诱导的中性粒细胞产生白介素6的影响

目的研究离体培养的人中性粒细胞在被LPS激活的情况下,槲皮素对中性粒细胞产生IL-6的影响。方法运用ELISA法检测槲皮素对LPS诱导的中性粒细胞分泌IL-6的影响;运用流式细胞术检测槲皮素对LPS活化的中性粒细胞内IL-6的蛋白水平的影响;运用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测槲皮素对LPS活化的中性粒细胞表达IL-6 mRNA的影响。结果在无刺激的情况下中性粒细胞不产生IL-6,LPS(1μg/mL)以时间依赖性的方式诱导中性粒细胞表达IL-6 mRNA,合成并分泌IL-6,并在16 h达到高峰。然而,预先用槲皮素(40μmol/L)处理中性粒细胞30 min后,LPS诱导的中性粒细胞表达IL-6 mRNA,合成并分泌IL-6则受到了抑制。结论IL-6是炎症早期重要的促炎症因子。因此,槲皮素抑制LPS诱导中性粒细胞产生IL-6,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。

槲皮素对LPS诱导中性粒细胞活性化效应的抑制作用

目的研究槲皮素(Quercetin,Que)对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的中性粒细胞(Polymorphonucle-ar,PMN)活化效应的影响。方法运用免疫荧光法和流式细胞术,对接受1hLPS刺激的PMN表面黏附分子(CD62L,CD11b/CD18)的表达进行测定,同时应用MTT法对不同状态下的PMN活性进行测定。结果Que对LPS诱导的中性粒细胞活化效应有明显抑制作用,表现为抑制细胞表面黏附分子CD62L的表达和促进CD11b/CD18的表达,同时Que对LPS增加细胞活性的效应有抑制作用。结论槲皮素通过对抗LPS对PMN黏附分子CD62L,CD11b/CD18的表达的影响,抑制LPS诱导的中性粒细胞活化效应,从而阻止PMN对血管内皮细胞的黏附,减少炎症细胞向炎症局灶的浸润,这可能是槲皮素发挥抗炎作用的一个重要机制。

拟鹅观草属与鹅观草属和披碱草属属间及种间杂种的细胞学研究

为探讨在二倍体拟鹅观草属物种中St基因组的分化及其系统关系,本试验通过对3个二倍体拟鹅观草的种间杂种及黎巴嫩拟鹅观草和托瑞拟鹅观草与4个四倍体鹅观草属物种(StY)和3个披碱草属(StH,StYW)物种的属间杂种F1花粉母细胞减数分裂中期I染色体配对行为及繁育特性进行分析。结果表明,1)中东的拟鹅观草二倍体物种(黎巴嫩拟鹅观草和托瑞拟鹅观草)中St染色体组与来自北美的物种(穗状拟鹅观草)可能存在差异;2)St染色体组在鹅观草属物种中(StY)和在披碱草属物种中(StH,StYW)均存在一定程度的变异,具有一定程度的分化;3)St染色体组与Y染色体组具有一定程度的同源性,亲缘关系较近,而与H染色体组的关系较远。

ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡

目的:观察前列腺素E2受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248对中性粒细胞的影响。方法:运用电子显微镜、MTS法、RT-PCR和流式细胞术等技术,对中性粒细胞的形态变化、生物学活性及凋亡进行观察和评估,并对EP3受体进行分析。结果:中性粒细胞存在EP3受体基因的表达,以5mmol/L的ONO-AE-248作用12h后,其多叶核融合为单叶核,核膜起泡、破裂,核质溢出,细胞死亡;但其快速死亡不具有细胞凋亡和坏死的形态特征且需要能量(ATP)供应。结论:ONO-AE-248所致这种新型细胞主动死亡的形式,可能为“非凋亡性程序化细胞死亡”的一种,这对于重新认识和定位中性粒细胞在非特异性免疫中的作用和地位提出了新的思路。

醋柳黄酮单体对高密度脂蛋白氧化修饰的影响

目的 观察醋柳黄酮主要单体槲皮素 (Que)和异鼠李素 (Iso)在体外对Fe2 + 介导的人血浆高密度脂蛋白 (HDL)氧化修饰的影响。方法 采用一次性密度梯度法分离正常人血浆HDL ,用Fe2 + 进行体外氧化修饰。抗氧化组在温育前加入不同浓度Que或Iso(5 0～ 2 0 0μmol/L) ,分别检测脂蛋白中丙二醛 (MDA)、维生素E含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果Que和Iso可明显减少氧化型HDL(OX -HDL)中MDA生成 (P <0 .0 0 1) ,并呈现一定的浓度效应 ;同时可明显延缓维生素E含量降低周期 ,显著提高SOD活性 (P <0 .0 0 1)。结论 醋柳黄酮主要单体Que和Iso均对Fe2 + 介导的HDL氧化修饰具有明显的抑制作用 ,其作用途经可能与抗氧化自由基有关 ,该类物质可能是一种良好的抗氧化剂。

神经元蛋白质磷酸化修饰分析方法的初步研究

目的 建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法 培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对照组加入等量的培养基 ,作用不同时间后液氮终止反应。裂解细胞 ,用 Bio- Rad DC Protein Assaykit测定细胞蛋白质含量 ,双向电泳分离细胞蛋白。放射自显影。结果 1双向电泳自显影图谱显示近数十个蛋白质斑点 ,绝大部分集中于 p H偏酸性和中性区域 ,p H4 .6～ 6 .5 ,其相对分子质量主要介于 2 0× 10 3～ 130× 10 3之间。2 EGF、胰岛素刺激不同时间后虽出现有磷酸化蛋白质斑点的增加或消失 ,但更多表现为某些磷酸化蛋白质斑点灰度的增强或减弱。 3对比分析发现 ,放射自显影图谱中只有少数斑点出现在双向电泳 Coom assie Brilliant BlueR- 2 5 0染色图谱中 ,提示神经细胞中的大多数磷酸化蛋白质为低丰度蛋白。结论 采用本研究建立的双向电泳和放射自显影技术可对神经细胞中的蛋白质可逆磷酸化修饰状态进行较为全面、动态的分析 ,方法灵敏、特异性强 。

ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化

目的研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性。方法运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化。结果以5mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN12h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变。以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻。ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异。结论ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期最为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心。

拟鹅观草属3种植物的核型研究(英文)

对禾本科小麦族拟鹅观草属物种Pseudoroegneria geniculata、P.geniculata ssp. scythica和P.geniculata ssp. pruinifera的核型进行了研究。结果显示:P.geniculata和P.geniculata ssp. scythica为四倍体物种,P.geniculata ssp. pruinifera为六倍体物种;P.geniculata、P.geniculata ssp. scythica和P.geniculata ssp. pruinif-era的核型公式分别为2n=4x=28=18 m(2sat)+10sm(2sat)、2n=4x=28=28 m(2sat)和2n=6x=42=36 m(6sat)+6sm(2sat);P.geniculata和P.geniculata ssp. pruinifera为2A核型,而P.geniculata ssp. scythica为1A核型。研究表明:3种植物的核型存在差异;P.geniculata ssp. pruinifera的核型为首次报道,其核型明显不同于P.geniculata和P.geniculata ssp.scythica。

抗类风湿病药金诺芬对中性粒细胞自发性凋亡的影响

目的 研究抗类风湿病药金诺芬(AF)对中性粒细胞自发性凋亡的影响。方法 运用流式细胞技术和MTS细胞活性测定技术对不同浓度的金诺芬影响下的中性粒细胞活性及其凋亡进行观察,并用低分子质量DNA“梯形条带”(DNA ladder)检测技术对其凋亡进行鉴定。结果 低浓度金诺芬(1μmol/L)可通过延迟中性粒细胞的自发性凋亡而增加其生命期限;但当金诺芬浓度大于5μmol/L时,中性粒细胞的坏死则明显增加,因而缩短了其生命期限。结论 金诺芬临床治疗量时的血清浓度一般在0.7μmol/L左右,在此浓度下,中性粒细胞通过延迟自发性凋亡来延长其功能性生命期限,所以金诺芬对类风湿关节炎患者的抗炎、抗风湿作用不可能通过直接清除炎症局部的中性粒细胞来完成;金诺芬的抗炎、抗风湿作用可能存在更为复杂的作用机制。

ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡线粒体形态结构的变化

目的:探讨线粒体形态结构的变化在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用及意义。方法:Ficoll法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,与ONO-AE-248共同培养,透射电子显微镜观察线粒体形态结构的改变;流式细胞术检测线粒体膜势能的变化。结果:ONO-AE-248刺激6小时,中性粒细胞线粒体显著肿胀,嵴断裂,数目增多;ONO-AE-248早期迅速导致中性粒细胞线粒体膜势能的溃散。结论:线粒体变化是ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡区别于凋亡的早期形态学特征事件之一。线粒体可能在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡中扮演更为关键性的角色。

骨髓基质饲养层对精原干细胞体外培养的影响

目的以原代培养小鼠骨髓基质细胞为饲养层,探讨精原干细胞能否在该饲养层上生长及生长的影响因素。方法采用原代培养的小鼠骨髓基质细胞,待细胞长成单层后用丝裂霉素C处理并接种生精细胞共培养。结果原代的小鼠培养骨髓基质细胞能很好的维持精原干细胞的非分化性扩增。结论小鼠原代培养的骨髓基质细胞能作为饲养层支持精原干细胞体外非分化性扩增,该细胞有望成为干细胞培养的新的饲养层。