缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用机制

目的:探讨在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)情况下,人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)对窒息新生儿中性粒细胞黏附作用的影响及其胞内信号传导机制。方法:以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,实验共分为6个组:缺氧4、12、24h组和缺氧24h后复氧4、12、24h组,每个实验组均设立空白对照组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。采用液体石蜡覆盖法造成缺氧环境,分别对上述各组用生化法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量、测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性,判断肾小管上皮细胞介导窒息新生儿中性粒细胞的黏附能力;免疫组化法检测HK-2细胞ICAM-1的表达。结果:与对照组相比,HK-2细胞经过缺氧/复氧处理后,LDH含量升高,MPO活性增加,细胞膜表面的ICAM-1表达明显增高,在缺氧24h达高峰,具有统计学意义(P<0.05),而PDTC干预组上述指标,无统计学意义(P>0.05)。结论:缺氧/复氧可刺激人近曲肾小管上皮细胞诱导窒息新生儿中性粒细胞黏附作用,其胞内信号机制可能涉及到NF-κB活化,进而诱导小管上皮细胞表面ICAM-1表达和合成增多。

骨髓基质细胞移植治疗缺血性脑病的现状及进展

目的:综述骨髓基质细胞在缺血性脑病方面的运用及其机制。资料来源:应用计算机检索PUBMED1997-01/2006-12期间的相关文章,以“bone marrow stromal cells,neuron,ischemic cerebropathia,transplantation,in brain”进行组合检索,并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索中国期刊全文数据库2003-01/2006-12期间的相关文章,检索词为“骨髓基质细胞,缺血性脑病,神经,移植,脑内”,并限定语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与骨髓基质细胞及其治疗缺血性脑病研究相关。排除标准:明显不随机的实验。质量评价:考察资料的真实性,调查设计是否严谨,实验过程是否严格,统计学处理是否合理。资料提炼:共收集到246篇相关文献,排除197篇内容陈旧或重复的文献,49篇符合纳入标准,选用其中的30篇作为本文参考文献,分别涉及骨髓基质细胞的概况、制备与鉴定、植入、治疗机制以及目前存在的问题等方面内容。资料综合:骨髓基质细胞具有高度的增殖能力和多向分化潜能,可诱导分化形成3个胚层来源的细胞,是组织工程的理想种子细胞。骨髓基质细胞还能分泌多种细胞因子,可采用贴壁培养、密度梯度离心、流式细胞仪分选和免疫磁珠分选等多种方法分离纯化,通过识别细胞表面抗原进行细胞鉴定。通过外科移植、经脑脊液途径和经动、静脉输入等多种输入途径来治疗缺血性脑病,经基因修饰后的骨髓基质细胞输入体内治疗效果更佳。其作用机制可能是通过增殖、分化替代受损神经细胞并整合到原有的神经网络当中,并分泌细胞因子促进内源性神经干细胞的增殖与分化,以促进神经功能恢复。目前亟需解决的是对治疗时间点的选择、适应证、输入细胞的数量和途径以及生物安全性等问题。结论:作为种子细胞,骨髓基质细胞在移植治疗缺血性脑病方面已取得许多成绩,但具体治疗机制尚不十分清楚,在其应用于临床前尚有许多问题需要解决。

糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞BK_(Ca)通道的变化

目的:探讨糖尿病胃轻瘫(DGP)的发病机制与胃平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)变化之间的关系。方法:将大鼠分为对照组和糖尿病胃轻瘫模型组。应用木瓜蛋白酶液急性酶分离大鼠胃平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术记录大鼠胃平滑肌细胞BKCa电流,免疫组织化学技术测定BKCa蛋白KCNMA和KCNMB1的表达。结果:大鼠胃平滑肌细胞BKCa电流的开放具有电压依赖性和胞内钙离子浓度依赖性,可被钾离子通道阻滞剂Ib TX阻断;模型组大鼠胃平滑肌细胞BKCa开放概率及开放幅度增加(P<0.05),平均开放时间及平均关闭时间减少(P<0.01);模型组大鼠胃平滑肌细胞KCNMB1蛋白表达增加(P<0.01),KCNMA蛋白表达无明显变化。结论:DGP发病与胃平滑肌细胞BKCaβ1亚基蛋白表达上调及通道功能活动增强有关,β1亚基蛋白可能通过调节BKCa功能活动参与DGP的发生。

人Sox10基因启动子区高甲基化的预测和验证

目的运用生物信息学方法预测人Sox10基因启动子区甲基化情况并进行实验验证。方法从GenBank获取人Sox10基因序列,利用Methyprimer 11.0软件、Li lab、CpG Island Searcher预测其启动子区CpG岛。进一步运用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中的甲基化情况。结果经过生物信息学分析发现,人Sox10基因启动子区存在2个CpG岛,分别为165(1 241～1 405)bp和105(1 478～1 582)bp。针对这两个CpG岛设计引物行MSP和BSP实验,研究发现,在人多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中Sox10基因启动子区CpG岛均出现部分甲基化,其中在多形性胶质母细胞瘤中的甲基化率为90.5%,在瘤周组织中的甲基化率为28.5%。结论本研究证实了人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤中出现高甲基化,提示其表达下调可能受甲基化调节。