论组织胚胎学中结构与功能的辩证观

组织学是现代医学的重要基础,从共性与个性、平面与立体、局部与整体、动态与静态争等多层面揭示组织结构与功能的关系,可为我们提供对人体生理与病理现象崭新的认识,对临床医学、对组织学的教学与研究,具有十分重要的意义。

留学生组织胚胎学全英文教学的实践与体会

针对目前医学院校留学生全英语教学现状及存在的主要问题,结合本校教学实践,探讨了我院组织胚胎学教研室为提高留学生全英语教学质量所采取的措施,为进一步提高和改进留学生教学提供参考。

比较法在组织学与胚胎学教学中的应用探讨

目的 :探讨比较法与传统法教学效果。方法 :在中医本科九七级二个班的教学中 ,选取部分章节使用两种方法进行比较教学研究。结果 :比较法教学效果优于传统法。结论 :比较法在组织学与胚胎学教学中教学效果较好 。

组织学数字切片库的构建与探讨

泸州医学院组织胚胎学教研室组织教师应用Motic数字切片扫描与应用系统,选择典型结构清楚、显示清晰的玻璃切片,全自动显微镜低倍镜下对玻璃切片进行扫描。采集完整切片图像后,再高倍镜下区域快速扫描。系统软件将扫描图像自动进行无缝拼接和处理,以获得更高分辨率的清晰的数字切片。使用Motic VM V1 Viewer软件对采集好的数字切片所显示的内容进行注释,并在不同放大倍数下标注特殊结构。按照数字切片的具体内容,分章节归类并存储在计算机中。至此,组织学数字切片库构建完成。它的构建过程就像教研室集体备课一样,对教师的专业知识和专业技能提出了考验。但它不能完全代替玻璃切片,它的质量取决于一支高水平的教师队伍,这对教师队伍的建设提出了更加严格的要求。

组织学实验课显微数码互动与普通教学的对比研究

目的探讨显微数码互动系统对组织学实验教学的影响。方法对我院2005级中医本科专业4个班的学生采用显微数码互动与普通实验教学方法的考试成绩进行对比分析。结果两组之间期未多媒体标本考试成绩有显著性差异（P〈0．05），而期未理论考试成绩差异无显著性（P〉0．05）。结论组织学显微数码互动教学效果优于普通实验教学。

大鼠脑组织神经元培养、纯化、传代、鉴定

目的 :探讨体外培养高纯度神经元的方法。方法 :取SD新生大鼠 ,胰蛋白酶消化、离心 ,原代培养出神经元和神经胶质的混合细胞 ;振摇法和胰蛋白酶消化法去掉小胶质和星形胶质 ,传代培养神经元 ,免疫细胞化学法鉴定培养神经元的纯度。结果 :第三次传代培养细胞 ,NF抗体标记阳性细胞遍布整张盖片 ,仅有零星散在CD68和GFAP阳性细胞。结论 :本实验传代、培养的细胞高纯度的神经元 。

新生大鼠窒息后肾组织c-fos和cyclinD_1的表达及意义

目的 :研究c -fos和cyclinD1在新生大鼠窒息后肾组织的表达及意义。方法 :4 5只新生大白鼠随机分成 4组 ,即对照组 (13只 ) ,窒息 30min后复氧 2h组 (10只 ) ,窒息 30min后复氧 2 4h组 (11只 ) ,窒息 30min后复氧 4 8h组 (10只 )。制成常压窒息模型。用免疫组化ABC法检测窒息后复氧不同时间点肾组织中c -fos,cyclinD1的表达。结果 :窒息后复氧 2h肾组织c -fos和cyclinD1的阳性细胞数开始增加 ,在 2 4～ 4 8h达高峰。同时c -fos和cyclinD1的表达主要集中在肾小球 ,远曲小管 ,集合管等处的细胞核中 ,而近曲小管的表达弱。结论 :c

急性肾功能衰竭对肝组织影响的形态学研究

目的 :观察急性肾功能衰竭时肝脏的形态学变化 ,探讨急性肾功能衰竭发生的机理及与肝功能之间的关系。方法 :建立急性肾功能衰竭的动物模型 ,采用光镜和透射电镜技术。结果 :肝脏在急性肾功能衰竭时 ,肝小叶发生一系列的病理变化 ,近中央静脉部位病理改变轻重 ,而小叶周边组织病理变化较轻。结论 :急性肾功能衰竭可引起肝组织严重病理改变 ,导致肝功能严重障碍 ,根据病理改变特点 ,急性肾功能衰竭的少尿期致肝中央静脉回流血淤滞 ,大量血液瘀滞在门脉系统 ,使有效循环血量减少 。

急性缺血再灌流肾损伤的组织学变化

目的：观察家兔肾缺血1小时再灌流2小时和24小时的组织学变化。方法：31只日本大耳白兔随机分为4组，左肾缺血1小时再灌流2小时组和再灌流24小时组及各自的对照组，采用肾动脉夹闭法制成急性缺血再灌流损伤模型。结果：再灌流2小时组和再灌流24小时组的左肾系数、肾组织中的白细胞滞流数、肾小管计分或肾小管坏死数，同各自的对照组比较，差异均具显著性（P＜0．05）；再灌流2小时和24小时组的肾小球滤过膜、肾近端小管等均呈变性或坏死性改变；后者的改变以24小时组更为严重。结论：近端小管比肾小球滤过膜对缺血再灌流刺激更为敏感，白细胞可能参与了缺血再灌流肾损伤。

神经干细胞培养及其影响因素

背景:神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。目的:探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考。方法:①神经干细胞分离和培养:分离出生24h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×108L-1的浓度接种,经含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4h后改用无血清条件培养基(DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27)培养,2d或3d换液1次,6d时传代。②神经干细胞鉴定:倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达。结果与结论:出生24h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞;血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率;免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定。取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量。

体外分离培养人皮下脂肪干细胞的生物学特性及影响因素

目的：研究证实脂肪组织提取物中存在脂肪源性干细胞,并表现出向多谱系细胞分化的特点。对来源于人皮下脂肪组织的脂肪干细胞进行体外培养,观察其形态特点、生物学特性及间充质来源细胞表面相关标志的表达。方法：实验于2005-11/2007-02在泸州医学院医学分子生物学实验室完成。①对象：行切疤植皮术的正常体质量患者8例,年龄16～45岁,均无传染性疾病,来源于泸州医学院烧伤整形科,实验前征得患者同意。②实验方法：人脂肪干细胞的分离、培养与传代：无菌条件下取患者新鲜的皮下脂肪,I型胶原酶消化＋贴壁法获取原代脂肪干细胞,生长至70%融合时传代,观察细胞的形态学变化。当原代细胞的胞质中出现较多透亮液滴后,行油红O染色。将第3代脂肪干细胞冻存,1个月后复苏,观察细胞的生长情况。选择生长状态良好的第3代脂肪干细胞,苏木精-伊红染色观察细胞形态,SABC法检测间充质来源细胞特异性标志波形蛋白的表达,SP法检测间充质干细胞表面相关抗原CD44的表达。取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间。结果：①原代和传代过程中人脂肪干细胞的形态学变化：原代和传代培养的细胞均为长梭形贴壁生长。当原代细胞达到50%融合后,部分细胞由梭形逐渐变为多角形或椭圆形,胞质内出现油红O染色阳性的脂滴。传代细胞中此现象逐渐消失,且经冻存后复苏的活细胞率达80%以上,细胞生长、增殖能力未受影响。②间充质来源细胞表面标志的鉴定：第3代人脂肪干细胞的胞质丰富,HE染色弱嗜碱性,呈淡蓝色;波形蛋白阳性率为（97.1±2.3）%,CD44阳性率为（85.4±3.22）%。③人脂肪干细胞的生长曲线及倍增时间：传代培养的脂肪干细胞生长曲线呈“S”形,群体倍增时间为62.38h。结论：从人皮下脂肪组织分离培养出的脂肪干细胞,在体外扩增和冷冻保存后生物学特性稳定,且具有良好的增殖能力,表达间充质来源细胞表面标志波形蛋白和表面抗原CD44。

重症急性胰腺炎对大鼠小肠平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨重症急性胰腺炎(serve acute pancreatitis,SAP)大鼠小肠平滑肌细胞凋亡情况及相关机制.方法:健康纯系♂SD大鼠30只,随机分为假手术组(15只)与胰腺炎组(15只),胰腺炎组大鼠麻醉后开腹,胰管逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液1 mL/kg,缝合腹腔,假手术组大鼠胰管逆行注射生理盐水1 mL/kg,余同胰腺炎组.造模48 h后检测胰腺组织病理学改变及小肠推进率;TUNEL法、荧光定量RT-PCR、流式细胞术与免疫组织化学法分别检测小肠平滑肌细胞凋亡、线粒体腺苷酸转移载体(adenine nucleotide translocater,ANT)mRNA含量、线粒体膜电位(mitochondrion membrane potential)变化及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)表达情况.结果:(1)假手术组大鼠胰腺大体结构及光镜结构均无异常,与假手术组相比,SAP组大鼠胰腺炎症明显,胰腺病理评分显著增高(6.85±1.21 vs 1.13±0.91,P<0.001);SAP组大鼠小肠推进率下降明显(55.91%±2.93%vs 68.9%±5.69%,P<0.05);(2)与假手术组相比,SAP组大鼠小肠平滑肌细胞凋亡显著增加(0.056±0.184 vs 0.029±0.038,P<0.05);ANT mRNA的相对含量是1.98;Cyt-C蛋白表达显著增加(0.024±0.001 vs 0.057±0.168,P<0.001);线粒体膜电位显著降低(5.07±0.92 vs 2.40±0.50,P<0.05).结论:线粒体信号转导途径可能介导了SAP大鼠小肠平滑肌细胞凋亡,后者在SAP大鼠肠道动力下降中扮演一定角色.

以骨髓基质细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞

目的:建立精原干细胞与骨髓基质细胞共培养细胞模型,探讨骨髓基质细胞层支持精原干细胞扩增的可能机制。方法:实验于2004-03/2005-04在泸州医学院医学分子生物学实验室完成。以6～8d龄小鼠为材料,脱颈处死后经体积分数为0.75的乙醇浸泡消毒,打开腹腔分离双侧睾丸,采用0.25%胰酶消化离心后培养睾丸细胞,采用差速贴壁法分离支持细胞与生精细胞。同时取小鼠胫骨骨髓,分离后用IMDM培养基培养,待细胞生长至单层时,以10mg/L丝裂霉素C处理的原代培养骨髓基质细胞作为饲养层,并将分离后的生精细胞接种至饲养层上,以含体积分数为0.1的小牛血清的IMDM为培养基,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养15d的细胞进行苏木精-伊红染色、碱性磷酸酶染色及C-Kit受体检测。结果:①支持细胞在培养后4～6h就开始贴附变形,此时生精细胞仍呈圆形,且悬浮于培养基中,将悬浮的圆形生精细胞吸出后接种于骨髓基质饲养层上共培养。培养8h后,见体积较小的原形细胞开始贴附增殖,继续培养三四天后见体积相对较大的圆形细胞开始死亡,推测增殖较小的细胞为精原干细胞。增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。②苏木精-伊红染色显示培养的生殖细胞大小均匀,核大而圆着色深、胞质浅染、核质比高;碱性磷酸酶染色见胞质和细胞膜为阳性,C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性,背景基质细胞为阴性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。结论:精原干细胞在未加入细胞因子、原代培养的骨髓基质细胞饲养层中能较长时间生长并分裂增殖,推测骨髓基质细胞通过分泌生物活性物质和细胞黏附分子支持精原干细胞的扩增。

肾舒胶囊对系膜细胞增殖及转化生长因子-β_1和Ⅳ型胶原表达的影响

目的 研究肾舒胶囊对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激的大鼠系膜细胞 (MC)增殖及转化生长因子 - β1 (TGF β1 )、Ⅳ型胶原 (Col Ⅳ )mRNA表达的影响。方法 采用血清药理学方法 ,制备肾舒胶囊含药血清 ,用苯那普利作为阳性对照药 ;将肾舒胶囊含药血清加入AngⅡ刺激的大鼠MC中 ,MTT法测定MC增殖情况 ,半定量RT PCR检测TGF β1 、Col Ⅳ的mRNA表达。结果 肾舒胶囊含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的大鼠MC增殖及TGF β1 、Col ⅣmRNA表达 ,其作用效果与苯那普利相当。结论 肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及分泌TGF β1 等生长因子 ,减少细胞外基质积聚 ,防治肾小球硬化。

培养人皮下脂肪干细胞纵向分化的实验研究

目的:建立人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分离、培养的方法,观察其生物学特性,探讨其纵向分化的能力、方法:自皮下脂肪组织获得梭形细胞,观察细胞生物学特征,免疫组化鉴定波形蛋白和CD44。以含有胰岛素、地塞米松、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤的无血清混合培养基诱导其向脂肪细胞纵向分化,以细胞形态学变化,油红O染色和测定甘油磷酸脱氢酶活性判定分化是否成功。结果:人皮下脂肪中能够分离培养出生长旺盛的脂肪干细胞,诱导培养7d后细胞由梭形逐渐变圆,胞质内出现脂滴后逐渐增多融合为脂泡,并与甘油磷酸脱氢酶活性变化相吻合。油红O染色显示约(78.6±2.2)%细胞转变为脂肪细胞。结论:人皮下脂肪中分离的脂肪干细胞在体外诱导条件下能纵向分化为脂肪细胞,可能成为修复软组织缺损及整形美容的又一干细胞来源。

老年大鼠胼胝体额区有髓神经纤维与髓鞘改变的研究

目的:探讨老年大鼠胼胝体额区有髓神经纤维、髓鞘的结构变化和髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的表达变化,以及二者间的关系。方法:运用透射电子显微镜和新的体视学方法分别对年轻组和老年组雌性Long-Evans大鼠胼胝体额区有髓神经纤维和髓鞘进行定量研究,运用Western blot对年轻组和老年组大鼠胼胝体额区MBP表达进行定量研究。结果:与年轻组相比,老年组胼胝体额区体积存在显著性降低,有髓神经纤维总体积显著性下降,21.5 kD MBP表达量显著性降低。21.5 kD MBP的表达降低与有髓神经纤维总体积、髓鞘总体积的降低之间呈正相关。结论:胼胝体存在显著性老年萎缩,胼胝体额区有髓神经纤维和MBP的老年改变可能与老年大脑额叶功能下降有关。

骨髓基质细胞及其上清液对缺氧缺血脑损伤大鼠海马齿状回突触素表达的影响及机制

目的:观察骨髓基质细胞(BMSCs)及其上清液对缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠海马齿状回突触素(SY)表达的影响及其机制。方法:将80只7日龄SD大鼠随机分成假手术组、模型组、细胞组和上清液组,各组20只。采用结扎左颈总动脉、术后持续缺氧2 h建立HIBD模型。模型组大鼠于造模术后1周经左侧脑室注入0.01 mol/L的PBS溶液,细胞组和上清液组大鼠于术后1周分别以相同方法注入等体积的BMSCs和BMSCs培养基上清液;假手术组仅分离左颈总动脉,但不结扎,术后不进行缺氧干预,其余处理同模型组。于侧脑室注射术后8周,检测大鼠海马齿状回SY的表达水平。结果:模型组大鼠海马齿状回SY阳性物质累积吸光度(IOD)值较假手术组降低(P<0.05),细胞组和上清液组其IOD值均较模型组增加(P<0.05),而细胞组和上清液组其IOD值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BMSCs及其上清液经侧脑室注入均能提高HIBD大鼠海马齿状回SY表达,促进突触生成;其主要机制可能与BMSCs分泌的细胞因子有关。

人骨髓间充质干细胞在精原细胞培养条件下生物学特征的观察

目的体外分离培养流产4h、八月龄男胎的骨髓间充质干细胞(BMSCs),并观察BMSC在精原细胞培养条件下的生物学特征,探讨人骨髓间充质干细胞诱导分化为精原细胞的可行性,为BMSCs作为"种子细胞"开辟新的途径。方法分离培养、鉴定人BMSCs,研究其在精原细胞培养条件下诱导培养BMSCs并观察其生物学特征。结果 BMSCs具有间充质细胞的特征;实验组细胞形态发生变化,免疫组化显示Oct-4和C-kit染色阳性;对照组细胞则无。结论人胎儿BMSCs有较强的增殖能力;人胎儿BMSCs在精原细胞培养条件下诱导培养,能表现出精原细胞的一些生物学特征。

局灶性脑缺血对内源性神经干及前体细胞增殖、分化和迁移的影响(英文)

背景:正常成年动物中枢神经系统内存在能增殖、多向分化潜能的神经干细胞或神经前体细胞。在生理情况下,这些内源性神经干细胞或前体细胞处于静息状态。当脑缺血时,这些细胞将处于何种状态?目的:研究大鼠局灶性脑缺血时,内源性神经干细胞的分布、增殖、分化。设计:以大鼠为研究对象,随机对照的探索性研究。单位:一所医学院的神经生物学研究室、组织胚胎学教研室。材料:实验于2001-07/2002-07在泸州医学院神经生物学研究室完成。选择健康成年SD大鼠41只,雌雄不限,体质量250～300g。干预:阻塞大鼠大脑中动脉2h再灌流0.5,3,6,12h,1,2,3,5,10d制成局灶性脑缺血模型,阻塞线不能阻塞大脑中动脉为假手术组,正常大鼠为对照组。在各时间点处死动物,制成脑组织切片,用免疫组织化学单标和双标观察内源性神经干细胞或前体细胞的增殖、分布、分化。主要观察指标:内源性神经干/前体细胞的分布、分化。结果:在正常组和假手术组多数脑室室管膜细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性,脑实质内有零星散在增殖性细胞核抗原阳性细胞。再灌流3h,增殖性细胞核抗原阳性细胞出现在嘴侧脑室下层。再灌流12h以后,双侧侧脑室的一些脉络膜丛细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性。再灌流3～10d,视前区梗死区周边、纹状体、额顶皮质的增殖性?