游离型腰椎间盘突出症手术失败的原因分析及其再手术治疗

目的:分析游离型腰椎间盘突出症手术失败的原因,探讨再次治疗的手术方法及其疗效。方法:2001年1月～2009年5月,共收治游离型腰椎间盘突出症首次手术失败患者32例,均进行再次手术治疗。再手术方式分别采用开窗、半椎板、全椎板减压,影响脊柱稳定性的患者加用内固定融合术。对所有再次手术患者进行3个月～8年(平均3.1年)的随访。回顾性分析32例患者首次手术失败的原因,探讨其再次手术方式的正确选择,并对其再次手术术后疗效进行分析评价。结果:32例患者首次手术时,手术方式选择不当者16例,术中减压不彻底者10例,术后出现腰椎不稳或滑脱者3例;手术时遗漏突出节段者2例;手术不成功导致术后原有症状加重并出现马尾神经损伤症状者1例。再次手术后,疗效评价参考Arnoldi标准,本组患者疗效优良率达到93.7%。结论:选择合适的术式、术中彻底减压、必要时加用内固定融合术是减少游离型腰椎间盘突出症患者首次手术失败,并且提高疗效的有效手段。

被动训练对兔冈上肌腱急性断裂术后腱-骨修复中BMP-2表达的影响

目的探讨应力刺激在肩袖损伤术后腱-骨修复中的作用。方法选取18只成年雄性新西兰白兔,术前随机选取2只白兔处死,以熟悉解剖结构及对照用。将其余16只白兔随机分为两组,即应力刺激组(A组)与非应力刺激组(B组),每组各8只。A组术后第2周开始被动训练(CPM);B组正常笼养。分别于术后2、4、6、8周训练结束后处死,取材,每次每组各处死2只,检测BMP-2表达。结果术后2周,两组BMP-2染色均呈阳性,组间比较无明显差别。术后4周,两组BMP-2染色阳性,A组稍显均匀。术后6周,两组BMP-2染色阳性分布均较前广泛,A组较B组明显,且相对均匀有序。术后8周,A组比B组BMP-2染色更为有序,靠近骨面BMP-2表达程度与靠近腱性部分比较,差别较前减小。结论 CPM训练能提高兔冈上肌腱急性断裂术后腱-骨界面BMP-2表达,从而增进胶原的合成,促进肩袖损伤术后腱-骨修复。

包裹多柔比星微球骨水泥体内外抗肿瘤活性研究

目的观察包裹载多柔比星微球骨水泥的抗肿瘤活性。方法将细胞密度为1×106个/ml的SaoS-2细胞悬液,接种培养5d。用CCK-8试剂在免疫酶标仪上测定其吸光度值。用生理盐水调整细胞数为2×107/ml,取0.2ml肿瘤细胞于每只裸鼠左臀部消毒后皮下接种。从生理盐水调整的细胞数为2×107/ml的细胞悬液中取0.1ml,再分别加入3种已配制好的骨水泥浸提液0.1ml,分别按高、中、低剂量注射于每只裸鼠右耳后、左耳后及右臀部。每天观察裸鼠的活动、注射部位的皮肤和肿瘤生长情况。于实验第12天称瘤体质量并计算抑瘤率,常规HE染色观察。结果不同剂量组的包裹多柔比星微球骨水泥浸提液有一定抑制肿瘤生长的作用。各组浸提液对细胞增殖的抑制作用存在显著差异,以高剂量组最强,低剂量组最弱。各浸提液组均有明显的抑瘤作用。高剂量组抑瘤率达61.0%(P<0.05),剂量越小,抑瘤率也越小。HE染色后,大剂量浸提液组中可出现广泛的肿瘤坏死,肿瘤数量明显较少,而小剂量的浸提液抑瘤作用不明显,和模型组的肿瘤组织差异不明显。结论包裹多柔比星骨水泥的浸提液在体外和体内都具有良好的抗肿瘤活性。

应力负荷下兔肩袖急性断裂重建后腱-骨修复动物模型建立及其修复过程中影像学评价

背景:目前尚无公认的动物模型可以作为应力负荷下肩袖损伤的相关研究标准的实验动物模型。目的:建立应力负荷下兔肩袖腱-骨急性断裂重建术后修复动物模型,并对其修复过程中进行影像学评价。方法:将新西兰白兔进行双侧肩关节行冈上肌腱离断术,并行冈上肌腱止点重建,术后随机分为应力负荷组与非应力负荷组。非应力负荷组正常笼养;应力负荷组于冈上肌腱重建术后第2周开始进行肩关节被动屈伸训练。分别于术后第2,4,8周训练结束后行肩关节MRI和超声检查。结果与结论:MRI检查结果显示:术后4和8周,T2WI相应力负荷组连接肌腱与骨组织低信号显示面积较非应力负荷组大。超声检查结果显示:术后4和8周,兔冈上肌腱止点重建处连续性回声,应力负荷组较非应力负荷组稍明显。结果提示,应力负荷下兔肩袖急性断裂术后腱-骨修复动物模型建立相对成功,一定的应力刺激能够促进肩袖腱-骨修复。

载微球骨水泥的体内生物相容性

背景:课题组在前期实验中已经证实了载聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球骨水泥具有较高的强度,良好的注射性能和体外可降解性能,但其生物相容性如何还不清楚。目的:选择急性毒性试验,溶血试验,微核试验等检测载微球骨水泥的生物相容性。方法:首先合成柱状骨水泥和包裹微球骨水泥,取1g材料加入到100mL的磷酸缓冲液中无菌条件下浸泡3d后提取的上清液即为骨水泥浸提液和微球骨水泥浸提液。以急性毒性实验、溶血试验、微核试验和热原试验来考察材料的体内毒性。结果与结论:急性毒性实验结果显示,骨水泥浸提液组和微球骨水泥浸提液组(除高浓度微球骨水泥组外)与阴性对照组均无明显差异,说明该材料浸提液没有对小鼠产生明显的毒性反应。溶血实验显示,各组材料对健康人血的溶血率均未超过5%。微核实验结果显示除0.4mL骨水泥组和0.4mL微球骨水泥组的微核率与阴性对照组差异有显著性意义,其余各组差异无显著性意义,说明该微球骨水泥的浸提液无明显细胞遗传毒性作用,但是高浓度和高剂量组的微球骨水泥仍有较低的毒性作用,主要表现为溶血率和微核率的提高,因此在应用时要适当控制微球骨水泥的剂量和浓度。热原试验显示,注射后家兔平均体温升高为0.06℃,小于1.4℃,说明材料无致热作用。

包裹多柔比星微球骨水泥的体外降解机械性能特性的研究

目的:观察包裹多柔比星(DOX)微球骨水泥的体外降解机械性能特性。方法:精密称取30等份质量为100mg的DOX微球和空白微球,分别加入SBF液浸泡,计算1、3、5、7、10、14、21、28d微球的重量丢失。每组各取35个已制备好的干燥骨水泥标本,称重后加入100mL的SBF中浸泡。每次从各组取出6块标本分别称重,计算骨水泥样本重量丢失;另外6块用于测量其屈服应力。结果:空白微球早期的重量丢失较少,而4周后,重量丢失较多。DOX微球的重量丢失则在前2周比较迅速,而后期比较缓和。3种骨水泥均可以随时间延长重量丢失逐渐增大,载入微球以后的CPC/M/D在整个过程中重量丢失最快。CPC/D和CPC/M/D均在一定程度上降低了骨水泥的强度;前2周各组的强度差异很小,而后逐渐表现出显著差异。结论:DOX球骨水泥具有良好的体外降解机械性能。

恒河猴骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化成骨细胞的实验研究

[目的]体外分离培养非人类灵长类动物恒河猴骨髓MSCs,研究其生长、扩增及诱导分化为成骨细胞的特性。[方法]梯度离心法分离、纯化恒河猴骨髓源MSCs,观察不同接种密度和换液时间对细胞生长的影响;在体外应用成骨添加剂（含地塞米松10-7mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L）或rhBMP-2（100 ng/L）定向诱导分化,对分化后的细胞进行免疫组化染色和ALP、BGP定量测定以鉴定成骨细胞,并比较两种定向诱导分化方法的效果。[结果]梯度离心法分离、纯化得到的恒河猴骨髓源MSCs具有分裂和克隆增殖的能力,种植细胞密度为10×104~30×104/cm2,48 h后半量换液,以后每3 d全量换液的方法较合理,MSCs能少量表达ALP活性,分泌的钙量较少;诱导分化后的细胞具有和体内成骨细胞相同的形态学特征,ALP染色阳性,能表达Ⅰ型胶原,不表达Ⅱ型胶原,细胞融合后3 d,ALP和BGP分泌明显增加,融合后14 d细胞ALP、BGP的分泌水平略有升高,但无明显增加;采用成骨添加剂和rhBMP-2诱导分化MSCs后相同时期成骨细胞ALP活性、BGP含量无明显差异。[结论]密度梯度离心法分离得到的非人类灵长类动物骨髓源MSCs,体外培养具有分裂、克隆增殖的能力,在加有成骨细胞诱导剂或rhBMP-2的培养基里能诱导分化为成骨细胞,化学药物在定向诱导分化过程中具有和生长因子相一致的作用。

恒河猴间充质干细胞诱导分化成骨细胞复合6种支架材料的相容性研究

[目的]评价外消旋聚乳酸(poly-DL-lactide,PDLLA)、生物活性玻璃(bioactive glass,BG)、β-三磷酸钙(beta-tricalcium phosphate,β-TCP)与聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸三嵌段共聚物[poly(lactic acid)-poly-ethylene glycol-poly(lactic acid)triblock copolymers,PLA-PEG-PLA]组合成的6种新型支架的细胞粘附性和细胞相容性,筛选出较好的细胞支架。[方法]选用恒河猴间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)定向分化为成骨细胞,采用体外细胞培养的方法,将细胞接种于PDLLA、PDLLA/BG、PDLLA/β-TCP、PDLLA/PLA-PEG-PLA、PDLLA/PLA-PEG-PLA/BG及PDLLA/PLA-PEG-PLA/β-TCP 6种可吸收性生物支架材料表面上,倒置显微镜、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察恒河猴成骨细胞的粘附、增殖。[结果]倒置显微镜、SEM、ALP染色显示成骨细胞在PDLLA、PDLLA/PLA-PEG-PLA、PDLLA/β-TCP及PDLLA/BG 4种材料上能良好粘附、增殖,并向内部生长,而在PDLLA/PLA-PEG-PLA/BG、PDLLA/PLA-PEG-PLA/β-TCP两组材料上粘附差、细胞逐渐死亡;MTT法结果显示PDLLA/PLA-PEG-PLA、PDLLA/β-TCP及PDLLA/BG细胞活性优于单纯PDLLA支架,其中PDLLA/PLA-PEG-PLA最佳。[结论]PDLLA、PDLLA/PLA-PEG-PLA、PDLLA/BG及PDLLA/β-TCP4组材料能与成骨细胞良好粘附,具有良好的细胞相容性。