人APOEε2及ε4等位基因修饰的神经干细胞的建立

目的构建APOEε2和APOEε4的真核表达载体,转染APOE敲除鼠神经干细胞,分别建立转染APOEε2和ε4的神经干细胞系。方法以前期克隆得到的APOEε3cDNA为基础,通过定点突变技术得到APOEε2和APOEε4cDNA,亚克隆入表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP-N1-APOEε2及pEGFP-N1-APOEε4的真核表达载体,经双酶切和测序确定序列及阅读框正确。以脂质体转染法转染APOE敲除鼠神经干细胞,通过G418筛选,建立转染APOEε2和ε4的神经干细胞系。采用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测APOE的表达。结果APOE敲除鼠NSCs转染6h后发出绿色荧光,48h达到高峰,荧光显微镜下观察转染率约(40.0±2.3)%,转染pEGFP-N1-APOE的NSCs在筛选至第10天可见细胞克隆形成。经鉴定保持了自我更新、多向分化保持性,其中分化为神经元的比例为(32.15±2.61)%,各组之间无明显差异。结论成功构建了稳定表达源性APOEε2及ε4的神经干细胞克隆,相应等位基因修饰的神经干细胞能高效表达目的基因蛋白并保留其干细胞特性。

载脂蛋白E基因型及启动子区多态性与颅脑损伤病情发展的相关性研究

目的探讨在中国人群中载脂蛋白E(APOE)基因多态性及启动子区多态性与颅脑损伤病情发展的相关性。方法收集110例颅脑损伤患者的临床资料,每对象抽取静脉血2mL,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测APOE基因及启动子区多态性,分型结果与临床资料等分别采用SPSS11.5软件进行2检验和Logistic回归分析。结果在17例APOEε4等位基因携带者中有7例病情加重,明显高于非ε4等位基因携带者(P<0.05);单因素和多因素Logistic回归分析均提示ε4是病情加重的危险因素。进一步对APOE基因启动子区多态性分型,发现启动子区多态性在颅脑损伤病情加重方面无统计学意义(P>0.05),但调整其余相关因素后,Logistic回归分析提示ε4仍为病情加重危险因素,同时,-491AA也为病情加重危险因素(OR=11.681,P=0.009,95%CI1.824～74.790),此外,饮酒及伤情也为病情加重危险因素。结论在本研究的中国人群中,APOEε4等位基因是颅脑损伤患者病情加重的危险因素。启动子区-491A/T多态性也为颅脑损伤病情加重危险因素,但是并非独立危险因素。

高血压脑出血治疗的研究进展

高血压脑出血(HICH)是由于高血压所致脑内细小动脉或毛细血管破裂而发生的脑实质内的一种自发性出血疾病。目前仍然面临较多治疗难题,本文就高血压脑出血的病理生理、药物治疗、手术治疗以及肠内营养支持治疗方面的研究进展作综述如下。

Toll样受体4与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是脑血管疾病、冠脉疾病、周围动脉疾病等诸多血管性疾病的病理基础,心脑血管疾病的发生率随着AS发病率的增高,而不断增加,人类身体健康受到严重威胁。研究表明,AS是一种脂质介导的慢性炎症性疾病,以血管壁内脂质沉积、炎症细胞聚集为特征,免疫反应贯穿于AS的始终。Toll样受体（toll like receptors,TLR）尤其是Toll样受体4（TLR4）作为一类介导非特异性免疫反应的跨膜信号转导受体蛋白,

颅脑创伤救治现状及规范化治疗

总结创伤性脑损伤救治的现状及规范化治疗,重点就院前急救体系、神经影像诊断、神经保护药物、甘露醇及手术治疗等进行阐述。

儿童重型创伤性脑损伤救治中应注意的问题

创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是神经外科常见急重症之一,其死亡率、致残率高居各类创伤之首[1]。近年来,基于对TBI发病机制的认识加深、治疗理念及手段的不断改进等,颅脑创伤的救治成功率已有了较大程度提高。

载脂蛋白E基因多态性与颅脑损伤的相关性

目的探讨在中国人群中载脂蛋白E(APOE)基因多态性与颅脑损伤病情的相关性。方法收集70例颅脑损伤患者的临床资料,每对象抽取静脉血2ml,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测APOE基因型,分型结果与临床资料等分别采用SPSS11.5软件进行χ2检验和Logistic回归分析。结果在13例APOEε4等位基因携带者中有5例(38%)病情加重(较入院时脑内血肿体积增大,迟发性血肿等),明显高于非ε4等位基因携带者(12%,P<0.05);单因素和多因素logistic回归分析均提示,ε4是病情加重的危险因素。结论APOEε4等位基因是颅脑损伤患者病情加重的危险因素。

高压氧治疗对大鼠重度脑创伤后炎性反应的影响

目的观察高压氧治疗对重度脑创伤大鼠其脑组织内炎性细胞因子水平的影响及大鼠脑组织病理学改变,并探讨高压氧治疗的作用机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、高压氧组及脑创伤组。采用高压气体冲击脑组织制作大鼠局部脑创伤模型。分别于术后3h、1d、3d、5d及7d时观察大鼠脑组织病理学改变;同时应用放射免疫检测技术测定脑创伤组及高压氧组在上述各时间点时脑内TNF-α、IL-6、IL-8及IL-10的水平。结果当大鼠发生脑创伤后,上述各炎性细胞因子水平较假手术组均有不同程度提高,经高压氧治疗后,发现炎性细胞向脑组织内浸润现象减缓,并有大量小胶质细胞、星形胶质细胞聚集、增生,而且高压氧组大鼠脑组织内上述炎性细胞因子在各时间点均较脑创伤组降低(均P<0.01);与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高压氧可抑制炎性细胞向脑创伤组织处浸润,降低各炎性细胞因子水平,促进小胶质细胞、星形胶质细胞聚集、增生,具有保护受损脑组织的功效。

大鼠脑创伤后脑组织中促炎症因子和抗炎症因子的动态变化

目的 :探讨大鼠脑创伤后促炎症细胞因子TNF α、IL 6、IL 8和抗炎症细胞因子IL 10的动态变化及其作用。方法 :①采用气体冲击致大鼠局部脑创伤模型 ;②HE染色观察组织病理学变化 ;③采用放射免疫检测 (radioimmunoassay ,RIA)技术测定假手术组和创伤组大鼠脑组织内TNF α、IL 6、IL 8和IL 10在各时段的含量。结果 :①脑创伤组与假手术组比较 ,TNF α、IL 8和IL 10从 3h ,IL 6从2 4h开始 ,含量显著性升高 ,并均持续较长时间 (本实验为 168h) ;②促炎症细胞因子TNF α、IL 6与抗炎症细胞因子IL 10呈相关性。结论 :促炎症和抗炎症细胞因子均参与了继发性脑损伤 ,其具体作用有待继续深入研究。