柴黄清胰活血颗粒通过抑制NLRP3炎症小体活化减轻重症急性胰腺炎模型大鼠炎症损伤的机制研究

目的通过观察柴黄清胰活血颗粒对NLRP3炎症小体活化的调控作用,探讨其对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠胰腺组织的作用及机制。方法将64只SD大鼠随机分为假手术组、重症急性胰腺炎模型组、柴黄清胰活血颗粒组及MCC950(NLRP3抑制剂)组,各组再分为12 h和24 h两个亚组,每组8只。重症急性胰腺炎模型组、柴黄清胰活血颗粒组及MCC950组给予3.5%的牛磺胆酸钠(2 mL·kg^(-1))逆行胰胆管注射构建重症急性胰腺炎模型。MCC950组于模型制备完成后立即腹腔注射MCC950(1 mg·mL-1)。麻醉苏醒后,柴黄清胰活血颗粒组灌胃柴黄清胰活血颗粒溶液(0.35 g·mL-1),6 h一次。造模后12 h和24 h收集腹水、腹主动脉血及胰腺组织。采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶及脂肪酶活性;HE染色观察胰腺损伤情况;ELISA法检测血清IL-18、IL-1β的变化,IHC、qRT-PCR及Western Blot法检测NLRP3炎症小体活化相关基因及蛋白的表达。结果与重症急性胰腺炎组比较,柴黄清胰活血颗粒组及MCC950组的胰腺组织病理损伤明显减轻,病理评分明显降低(P<0.05),血清脂肪酶、淀粉酶、白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平明显降低(P<0.05);与重症急性胰腺炎组比较,经柴黄清胰活血颗粒治疗或腹腔注射NLRP3抑制剂后,胰腺组织NLRP3、ASC、Caspase-1免疫组化阳性表达量及NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平和NLRP3、ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论柴黄清胰活血颗粒可通过抑制NLRP3炎症小体活化,降低胰腺组织NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白的表达,降低下游炎症因子IL-18、IL-1β的释放,从而减轻重症急性胰腺炎模型大鼠胰腺炎症损伤。

柴黄清胰活血颗粒对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的保护作用及机制

目的观察柴黄清胰活血颗粒对雨蛙素(caerulein)诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的保护作用,并探讨柴黄清胰活血颗粒对JAK2/STAT3信号通路的调控机制。方法取对数生长期的AR42J细胞,通过CCK-8法检测不同浓度柴黄清胰活血颗粒对AR42J细胞活性的影响并筛选最佳药物干预浓度;用雨蛙素刺激细胞6 h构建胰腺炎体外模型;随机分为空白对照组、模型组、柴黄清胰活血颗粒低、中、高剂量组(0.5、1、2 mg/mL);ELISA法测定细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的表达;实时荧光定量PCR测定各组细胞JAK2、STAT3基因表达水平;Western blot法检测各组细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平。结果CCK-8法检测发现,当药物浓度为0.5、1及2 mg/mL时,平均细胞存活率均大于100%;ELISA检测发现,与空白组相比,模型组炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α升高,提示AR42J细胞急性胰腺炎模型的成功建立;与模型组相比,柴黄清胰活血颗粒组(0.5、1、2 mg/mL)IL-6、IL-1β、TNF-α明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量PCR检测发现,与模型组相比,柴黄清胰活血颗粒组(0.5、1、2 mg/mL)STAT3 mRNA、柴黄清胰活血颗粒组(2 mg/mL)JAK2 mRNA表达水平显著下降(P<0.05);westen blot测定发现,与模型组相比,柴黄清胰活血颗粒组(0.5、1、2 mg/mL)p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白相对表达量显著下降(P<0.05)。结论柴黄清胰活血颗粒可能通过调控JAK2/STAT3信号通路中关键分子表达,从而减轻AR42J细胞炎症反应。