miR-181a靶向SIRT1对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制

目的探究miR-181a通过靶向沉默信号调控因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤A549细胞模型,并通过miR-181a inhibitor和inhibitor阴性对照(NC)转染细胞;盲肠结扎穿孔术法(CLP)建立小鼠脓毒症急性肺损伤模型,并通过miR-181a antagomir和antagomir NC静脉注射,检测生存率、肺湿重/干重比。荧光素酶报告实验检测miR-181a和SIRT1靶向关系。RT-PCR检测miR-181a、SIRT1在体内体外的基因表达,Western blotting检测SIRT1在体内体外的蛋白水平,以及凋亡标志物蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bax及活化半胱天冬酶3(cl-CASP3)在体内蛋白水平,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8检测体外细胞活力,试剂盒检测CASP3体外活性,HE染色检测肺组织病理变化,TUNNEL染色检测体内细胞凋亡,ELISA检测体内血清炎症细胞因子水平。结果在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞中miR-181a表达升高,SIRT1表达降低(P<0.01),同时细胞凋亡率升高,CASP3活性升高,细胞活力下降;miR-181a inhibitor可扭转上述各指标的改变(P<0.01);在动物实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠生存率下降,肺湿重/干重比上升,出现明显的病理性改变及细胞凋亡,同时炎症细胞因子水平升高,组织内miR-181a、Bax、cl-CASP3蛋白水平升高,SIRT1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01),经过miR-181a antagomir处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05,P<0.01)。结论miR-181a可靶向作用于SIRT1,抑制miR-181a表达可提高SIRT1表达,从而对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤起保护作用。