miR-298通过靶向结合CHN1抑制胃腺癌细胞增殖

目的 探讨miR-298靶向结合α-嵌合蛋白(CHN1)对胃腺癌细胞增殖的影响及潜在作用机制。方法 采用生物信息学分析CHN1在胃腺癌中的表达及其与临床表型的关系、miR-298与CHN1的靶向关系,并通过双荧光素酶报告实验验证miR-298对靶基因CHN1的直接靶向调控作用。通过细胞转染构建稳定敲低CHN1的SGC-7901和BGC-823细胞系,利用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术、LDH释放检测、体内移植瘤实验、免疫组化、qRT-PCR、Western-blot实验检测CHN1低表达对胃腺癌SGC-7901、BGC-823细胞增殖、凋亡及细胞周期等的影响。结果 CHN1在胃腺癌中高表达,且与AJCC临床分期、AJCC T分期、分化程度、AJCC N分期、AJCC M分期、预后有关(P<0.05),CHN1高表达者的总生存率、无病生存率均低于CHN1低表达者(P<0.05)。敲低CHN1表达后细胞OD值、克隆形成率、处于G0/G1期的细胞比例及Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2蛋白表达水平均下降(P<0.05),处于S期的细胞比例、LDH释放、细胞凋亡率、BAX蛋白表达水平均升高(P<0.05)。敲低CHN1的小鼠瘤体体积、质量及CHN1蛋白表达水平下降(P<0.05)。miR-298能靶向CHN1影响胃腺癌细胞增殖、克隆形成率、处于G0/G1期的细胞比例、Ki67蛋白表达水平(P<0.05)。结论 miR-298在胃腺癌中低表达,其可能通过靶向结合CHN1影响胃腺癌细胞周期,抑制癌细胞的增殖,并促进其凋亡,可为胃腺癌的诊断及治疗提供参考。

木糖醇诱导K562细胞自噬并向巨核细胞分化

目的研究木糖醇对K562细胞的影响并探索其抗白血病的可能其机制。方法 CCK-8检测木糖醇对白血病细胞系活力的影响。选择0、0.2 mmol/L和0.4 mmol/L木糖醇处理K562细胞24 h作后续研究,拉帕替尼(10 mmol/L)为阳性对照。蛋白印迹定量蛋白表达,流式细胞术检测凋亡和分化,细胞用结晶紫染色后显微镜观察。结果木糖醇浓度依赖地降低THP-1、U937、K562/A02和K562的细胞活力,其中K562细胞24 h半数抑制浓度约为0.32 mmol/L。与对照组比,0.4 mmol/L木糖醇组P62、LC3BⅡ/Ⅰ、Bax/Bcl-2和裂解型Caspase3与Caspase3的比值均上调,凋亡细胞数增加,mTOR和NF-κB活性下调,细胞核占比提高,CD41和CD61阳性细胞数增加(均P<0.05)。与0.4 mmol/L木糖醇组比,0.4 mmol/L木糖醇+10μmol/L MHY1485或0.4 mmol/L木糖醇+100 ng/mL RANKL组的LC3BⅡ/Ⅰ、裂解型Caspase3与Caspase3的比、CD61和CD41均被降低(均P<0.05)。结论木糖醇可能通过抑制mTOR和NF-κB,激活自噬和凋亡,促进K562细胞向巨核细胞分化。