正常人及系统性红斑狼疮患者T细胞亚群流式细胞术初步分析

目的:研究正常人及系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血(PBMCs)T淋巴细胞亚群的平衡状态。方法:采用微量全血法在样本中标记多种荧光抗体,利用三色流式细胞技术对正常人及SLE患者外周血各T细胞亚群百分率进行检测和分析。结果:与正常人相比,在未经刺激的自然状态下,SLE患者PBMCs中表达白细胞介素(IL)-10的Th2细胞及Tc2细胞的百分率均显著增高;如经植物血凝素(PHA)和佛波醇乙酯(PMA)联合刺激,正常人表达干扰素-γ(IFN-γ)的Tc1细胞百分率显著升高,而SLE患者则仍表现为Th2和Tc2细胞百分率的明显增高。结论:SLE患者体内存在高IL-10应答、低IFN-γ应答状态,从而形成T细胞亚群平衡向Th2/Tc2偏移的态势。

流式细胞术对不同肿瘤细胞表面所表达血小板免疫相关抗原的检测

目的：研究不同肿瘤细胞表面血小板免疫相关抗原的表达。方法：利用流式细胞术观察了ＰＧＣＬ３、ＰＡａ、ＰＧ－３、ＰＣ－３Ｍ、ＭＧＣ８０３、ＥＳＣＬ、ＢｅＬ、ＴＣＴ、ＫＢ、Ａ２７８０、ＣＣＡ８０１共１１种人肿瘤细胞，其中包括二对高低不同转移能力的人肺癌（ＰＧＣＬ３和ＰＡａ）和人前列腺癌（ＰＧ－３和ＰＧ－３Ｍ）细胞阳性表达不同血小板免疫相关抗原的细胞数及其肿瘤细胞表面抗原表达的平均荧光强度。结果：１１种人肿瘤细胞膜表面均有ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ４２ａ和ＴＳＰ，等血小板免疫相关抗原不同程度的表达，在ＭＧＣ８０３细胞膜表面发现有ＣＬ８６较强的表达，ＣＤ４１、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ６１和ＣＤ６２均未发现表达。１１种人肿瘤细胞系中ＣＤ９＋、ＣＤ４２ａ＋、ＣＤ６３＋、ＴＳＰ＋细胞所占的比例各不相同，不同肿瘤细胞系每个抗原阳性细胞抗原表达的荧光强度也不同。与高转移ＰＧＣＩ３和ＰＧ－３Ｍ细胞相比，ＣＤ９在低转移细胞系ＰＡａ和ＰＧ－３上有较高的表达，ＣＤ４２ａ、ＴＳＰ有相对低的表达。ＣＤ４２ａ＋和ＴＳＰ＋细胞数和表达强度在高转移ＰＧＣＬ３和ＰＧ－３Ｍ细胞系均要高于低转移的ＰＡａ和ＰＧ－３；

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的检测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果 1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±6.41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97±4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47±0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P<0.01)而Ts显著升高(P<0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28±12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54±0.19,与良性病变组比较,恶性组Th下降(P<0.05),Th/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03±0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86±3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。结论胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。

流式细胞双标记技术定量检测淋巴细胞亚群凋亡

目的 建立定量检测淋巴细胞亚群凋亡的方法。方法 设立经甲基泼尼松龙 (MP)处理人外周血淋巴细胞的MP处理组和未经MP处理的对照组。以电镜、DNA电泳对人外周血淋巴细胞行凋亡定性检测 ,以流式细胞TUNEL技术 (TUNEL法 )定量检测淋巴细胞凋亡发生率 ,采用PE -CD3联合FITC -TUNEL双标记法定量检测淋巴细胞亚群发生率。结果 TUNEL法MP处理组淋巴细胞凋亡检出率 (6 8.2± 6 .4) % ,显著高于对照组 (10 .2±2 .2 ) % (P <0 .0 1)。双标记法凋亡检出率 (70 .2± 3.6 ) % ,与TUNEL法无显著差异。双标记法检测MP处理组CD3+ 细胞凋亡率 (87.6± 4.7) % ,CD3-细胞凋亡率 (2 3.0± 3.2 ) % ,CD3+ 细胞凋亡率显著高于CD3-细胞凋亡率(P <0 .0 1)。结论 流式细胞双标记凋亡定量检测技术可同时检测凋亡细胞及其表面标志 ,适用于淋巴细胞各亚群凋亡的定量检测。

基于细胞表型异常的流式细胞术检测急性前体B细胞白血病微小残留病

为了建立一种基于细胞表型异常的流式细胞术以检测急性前体B细胞白血病微小残留病,对35份pre-cursor-B-ALL病人骨髓和19例正常对照骨髓应用BIOMED-1推荐的5种3色抗体组合(TdT/CD10/CD19,CD10/CD20/CD19,CD34/CD38/CD19,CD34/CD22/CD19和CD19/CD34/CD45)进行了流式免疫分型,以确定前体B细胞正常和异常抗原表型流式图形特征。在35例患者中初诊病人13例,完成诱导缓解后的病人15例,完成巩固治疗的患者7例。应用不同比例的正常骨髓单个核细胞和带有CD34/CD38/CD19阳性白血病细胞进行了系列稀释试验。结果显示:在正常对照组中流式细胞术分析显示了3群CD19阳性细胞,代表了B细胞的3个连续成熟阶段。在precursor-B-ALL患者中这3群细胞消失,代之以大量的白血病细胞,而这些白血病细胞的表型特征与正常B细胞不同。当病人获得完全缓解时,这3群细胞会重新出现,而且具有与正常CD19阳性细胞几乎相同的表型特征。用5组3色抗体组合检测病人时,初诊患者12/13(92.3%)可检出抗原表型异常,也即在0.01%的敏感性水平每个患者至少有1种抗体组合的异常。在本研究初诊病人中这些抗体组合的异常频率:CD10/CD20/CD19为8/13(61.5%);CD34/CD38/CD19为5/13(38.5%);CD10/TdT/CD19为4/13(30.8%);CD34/CD22/CD19为3/13(23.1%);CD34/CD45/CD19为2/13(15.4%)。刚获得完全缓解的患者抗原表型异常的检出率为5/15(33.3%),其中初诊和缓解时同时检出异常者3/8(37.5%)。稀释试验表明,从1∶1至1∶400000的范围,流式细胞术检出与已知加入的CD34/CD38/CD19阳性白血病细胞数有良好的线性相关(r=0.80,P<0.05)。结论:BIOMED-1协作组建议的基于细胞表型异常的流式细胞术用于precursor-B-ALL微小残留病的检测在本研究中能较好地实现。在104个正常骨髓细胞中可以有效检出1个precursor-B-ALL白血病细胞。

带状疱疹患者细胞免疫功能的测定

带状疱疹是由水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ）感染引起的疱疹性疾病。其发病与机体的免疫状态特别是细胞免疫功能降低有关［１］。为了更准确地了解带状疱疹患者细胞免疫功能的变化，我们对３０例带状疱疹患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（ＮＫ）、白细胞介素２受...

淋巴细胞HLA-B27抗原的表达及意义

目的:评价检测淋巴细胞检测淋巴细胞HLA-B27抗原在强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis,AS)患者、腰痛患者及健康人中的表达及临床意义。方珐:取肘静脉血Iml(EDTANa2抗凝),采用荧光抗体HLA-B27-FITC/HLAB7-PE直接标记法,流式细胞仪检测淋巴细胞中HLA-B27的比例。结果:24例AS患者、35例腰痛患者和55例健康者中HLA-B27阳性率分别为91.67%、5.71%、5.45%。结论:HLA-B27与强直性脊柱炎高度相关,其检测是AS诊断与鉴别诊断的重要标志。但检测阳性并不能作为AS的确诊和筛选指标;流式细胞仪检测HLA-B27简便省时,稳定性和重复性好,适用于临床检验。

昆明山海棠诱导Jurkat等3个细胞株微核形成的研究

目的 为研究昆明山海棠 (THH)的毒理作用。方法 使用流式细胞仪检测发现THH均可诱导Jurkat、CHE和NIH3T3细胞株微核形成和细胞凋亡。结果 3个细胞株表现出完全相似的变化规律 ,但Jurkat淋巴瘤细胞更为敏感 ,仅 2 5 μl/皿即在各时相点出现微核形成高峰 ,5 0 μl/皿即出现细胞凋亡高峰。

人胚腱细胞转化生长因子-β受体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ密度分析

目的 观察转化生长因子-β受体I 、II和III （TβRI 、II 、III）在体外培养的肌腱细胞中的表达情况，探讨TGF-β1对细胞周期及增殖指数PI值的影响。方法 采用免疫组化法鉴定受体的表达，流式细胞仪法分析了同一细胞周期不同亚时相的TβRI 、II 、III受体数目差别并观察了不同浓度的TGF-β1对细胞周期及增殖指数PI值(S+G2M)的影响。结果 TβRI 、II 、III在体外培养的肌腱细胞中均有表达，TβR I 、II 、III平均荧光强度在G1期分别是7.93±0.20、8.76±0.16、8.46±0.14，而在G2M期分别是17.7±0.36、18.9±0.35、18.3±0.67。细胞周期分析表明：TGF-β1作用下，G0/G1%呈降低趋势，而S%呈升高趋势，反映细胞增殖活力的PI值也呈升高趋势，尤以5 ng/ml 以上浓度时为显著(P<0.05)。结论 在肌腱细胞周期的不同亚时相，肌腱细胞TβRI 、II 、III各自密度均具显著差别（P<0.01），TGF-β1能促进腱细胞增殖。TGF-β受体系统不同亚时相的差别可能是其调控细胞增殖活动的生物学基础。

肿瘤患者外周血细胞P53(v)突变蛋白表达及其与年龄的关系

为研究恶性肿瘤患者外周血细胞P5 3(v)表达及其与年龄的关系 ,应用FCM检测 88例癌症患者外周血细胞中P5 3(v)的表达。结果显示 ,肿瘤患者外周血细胞P5 3(v)表达为 (7.76± 7.13) % ,显著高于对照组的表达 (0 .6 6± 0 .5 ) % (P <0 .0 1)。 35 .2 %的恶性肿瘤患者外周血细胞P5 3(v)表达≥ 10 % ;随年龄增高 ,患者血细胞P5 3(v)表达有增高趋势。结论 :在肿瘤患者外周血细胞中也能检测出P5 3(v)表达 。

营养支持对体外循环术后患者细胞免疫功能的影响

目的 探讨营养支持对体外循环术后患者细胞免疫功能的影响。方法 将 30例体外循环术后患者随机分为 2组 :对照组和营养支持组 ,每组 15例。对照组自由进食 ,营养支持组在自由进食基础上 ,每日额外补充口服营养液 75 0ml,时间为 1周。分别于术前、术后第 1、 4、 8天等时间点抽外周血测定T淋巴细胞亚群(CD+3 、CD+4 、CD+8)及自然杀伤细胞 (NK)活性。结果 术后第 1天 ,两组病人T淋巴细胞功能受抑制 ,换双瓣者更明显 ,NK细胞活性变化不大 ;术后第 4天 ,营养支持组换双瓣者CD+4 和CD+8的反向变化得以纠正 ,与对照组比较差异显著 (P <0 0 5 ) ,NK细胞活性换双瓣者较术前明显降低 (P <0 0 5 ) ;术后第 8天 ,T淋巴细胞亚群功能基本恢复 ,NK细胞活性对照组换双瓣者仍未恢复术前水平 (P <0 0 5 )。结论 营养支持能改善体外循环术后患者的细胞免疫功能 。

甲基叔丁基醚对小鼠外周血T淋巴细胞亚群影响

目的探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的作用。方法30只健康昆明种成年小鼠,体重(28·5±2·9)g,随机分为3组,灌胃染毒,染毒剂量分别为400,100和0mg/(kg·bw)。每天1次,共计30d。应用流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4和CD8计数的变化,并计算胸腺及脾脏指数。结果甲基叔丁基醚染毒组体重轻度降低。可使外周免疫器官胸腺重及胸腺指数降低及外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4减少,经统计学检验差异有统计学意义(P<0·05)。结论甲基叔丁醚可引起外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4减少,免疫功能抑制。

人表皮干细胞的分离和鉴定

目的 探索一种分离人表皮干细胞的新途径 ,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法 以基底细胞作常规细胞培养 ;采用分类技术并结合表皮干细胞的特性 ;免疫细胞化学S P法鉴定。结果 用中性蛋白酶和胰酶消化可分离基底细胞 ,(1～2 )× 10 4/ml的基底细胞接种于以 3T3为滋养层的培养瓶内 ,以含EGF等因子的DMEM为培养液 ,2d后细胞开始增殖 ,一周许去除滋养层 ,10～ 12d可传代。异硫氰酸酯荧光素 (FITC)标记的基底细胞经流式细胞仪分选及IV型胶原 2 0min内的粘附后获得一些圆形、大小较一致的细胞。以鼠抗人K19的单抗为一抗 ,免疫细胞化学S P法呈棕黄色阳性反应 ,证实分离出的细胞为表皮干细胞。结论 通过荧光激活细胞分类和IV型胶原的粘附可分离出表皮干细胞 。

FcγRIIIa基因多态性对利妥昔单克隆抗体介导的NK细胞杀伤Raji细胞作用的影响

由于FcγRIIIa的基因多态性可导致NK细胞上Fcγ受体(Fcgamma receptor,FcγR)与抗肿瘤单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)Fc段结合的亲和力不同,NK细胞以抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-depend-ent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)对肿瘤细胞的杀伤能力也不同。本研究通过CFSE-PI双荧光染色法检测不同FcγRIIIa基因型的NK细胞对Raji细胞的ADCC效应强度,确定不同FcγRIIIa基因型的NK细胞所介导的AD-CC效应差异。用nest-PCR测定FcγRIIIa表型,用CFSE-PI双荧光染色法染色靶细胞(Raji细胞),用流式细胞术检测NK细胞上CD3-CD56+及FcγRIIIa的表达以及Raji细胞上CD20的表达,计算细胞毒性。结果表明:FcγRIIIa-158V/V基因型的NK细胞ADCC细胞毒性指数为(69.05±2.38)%,FcγRIIIa-158V/F基因型的NK细胞ADCC细胞毒性指数为(39.63±3.86)%,与V/V基因型相比,V/F基因型的NK细胞对Raji细胞的ADCC效应明显较弱,差异具有统计学意义(t=12.950,p=0.000)。结论:FcγRIIIa基因多态性可影响利妥昔单克隆抗体介导的NK细胞对Raji细胞的体外ADCC效应,以FcγRIIIa-158V/V基因型的NK细胞ADCC效应较FcγRIIIa-158V/F基因型的NK细胞ADCC效应强。

MRD监测下88例儿童急性B淋巴细胞白血病长期疗效的分析

目的对88例儿童急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）治疗的长期随访结果进行分析，探讨微小残留病（MRD）监测下儿童B—ALL的无事件生存率（EFS）。方法回顾性分析2005年1月．2008年5月接受儿童ALL诊疗建议（第三次修订草案）治疗的88例B．ALL患儿，应用流式细胞术（FCM）检测MRD，采用Kaplan—Meier方法评估患儿EFS，各临床危险度分组间患儿EFS差异用Logrank检验。结果88例患儿骨髓完全缓解（CR）率为97．7％，2年、3年、4年、5年EFS率分别为87．5％、86．4％、81．8％、77．2％，标危、中危、高危5年EFS率分别为86．2％、84．6％、63．1％。5例死亡，9例复发（10．5％），复发中位时间为23（3—59）个月。结论采用儿童ALL诊疗建议（第三次修订草案）治疗CR率较高，在MRD监测下指导治疗，总体上B—ALL患儿的5年EFS提高。

原发性肝癌和乙型肝炎肝硬化患者外周血淋巴细胞凋亡率、T细胞亚群和NK细胞的水平变化和临床意义

目的通过检测乙型肝炎肝硬化和合并乙型肝炎病毒感染的原发性肝细胞癌患者的外周血的粒细胞、单核细胞、NK细胞、T细胞及其亚群和淋巴细胞及其凋亡率,探讨两者在细胞免疫方面的差异。方法用Ficoll Hypaque离心法分离外周血单个核细胞(PBMNC),流式细胞仪检测外周血T细胞及其亚群、NK细胞和淋巴细胞、单核细胞和粒细胞,AnnexinV/FITCKit检测凋亡细胞。结果乙型肝炎肝硬化患者的外周血单核细胞、粒细胞、淋巴细胞、CD3-CDl6+CD56+NK细胞、CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD4+CD8+T细胞比值,均与正常对照组无显著性差异(P>0.05);但淋巴细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.01)。原发性肝癌外周血CD3-CD16+CD56+NK细胞、单核细胞和CD4+/CD8+T细胞比值与肝硬化组和正常对照组比较,均无显著性差异(P>0.05),而粒细胞明显升高(P<0.05);CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞均较另两组明显减少(P<0.05),淋巴细胞及其凋亡率均明显低于另两组(P<0.01)。结论乙型肝炎肝硬化患者的外周血细胞免疫只发生不显著的变化,但淋巴细胞的凋亡率明显降低。原发性肝癌外周血的细胞免疫和淋巴细胞凋亡率均明显低下。

水蛭提取液对p38丝裂原活化蛋白激酶介导的人视网膜色素上皮细胞信号转导途径的影响

目的研究水蛭提取液对p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)介导的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞跨膜信号转导途径的影响。方法选3-5代生长良好的hRPE细胞,细胞同步化后分为:正常对照组、凝血酶组、水蛭组、合药组(凝血酶+水蛭组),根据前期实验数据,用64g.L-1的水蛭提取液与500NIHU.L-1的凝血酶分别(或共同)孵育hRPE细胞30min后,采用流式细胞术及免疫细胞化学方法检测孵育hRPE细胞内p38MAPK的表达。结果根据各组P-p38MAPK免疫细胞化学平均光密度值发现,凝血酶组(1.1950±0.0226)与正常对照组(1.0550±0.0187)相比,OD值上升,差异有显著统计学意义(P<0.01);水蛭提取液组(0.7567±0.0710)与正常对照组相比,OD值下降,差异有显著统计学意义(P<0.01);合药组(0.5550±0.0650)与凝血酶组相比,OD值下降,差异有显著统计学意义(P<0.01)。根据各组P-p38MAPK流式细胞术检测的荧光量比较(OD值)发现,凝血酶组(6.4417±0.0720)与正常对照组(5.4567±0.1825)相比,荧光量升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);水蛭组(4.4483±0.2015)与正常对照组相比,荧光量下降,差异有显著统计学意义(P<0.01);合药组(4.1433±0.0680)与凝血酶组相比,荧光量下降,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论水蛭提取液能抑制hRPE细胞的增生,其机制与p38 MAPK介导的信号转导通路有关。

氰戊菊酯与辛硫磷混合物对小鼠外周血细胞周期的影响

目的研究氰戊菊酯与辛硫磷混合杀虫剂对小鼠外周血淋巴细胞周期的影响。方法设计该杀虫剂3个剂量组及阴性对照组,分别对小鼠进行灌胃染毒20d后,采用流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血淋巴细胞周期的变化。结果①细胞周期中DNA复制前期(G0期)百分含量随染毒剂量的增加而减少(P<0.001),高、中剂量组显著低于低剂量组及阴性对照组(P<0.01);②DNA合成期(S期)百分含量随染毒剂量的增加而增高(P<0.001),高、中剂量组显著高于阴性对照组(P<0.05);③DNA复制后期(G2期)高剂量组显著高于其他组(P<0.05)。结论小鼠染毒该混合物后,G0期DNA百分含量随染毒剂量的增加而减少,而S期随染毒剂量的增加而增加,提示小鼠外周血淋巴细胞处于较高的增殖状态。