秋冬型恙虫病病人、恙螨、鼠东方体基因型研究

目的 了解秋冬型恙虫病流行季节黑线姬鼠、小盾纤恙螨、病人体内恙虫病东方体 (Orientiatsutsuga mushi,Ot)基因型的一致性。方法 采用NestedPCR结合限制性内切酶片段长度多态分析 (RFLP)技术对山东地区恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨标本中Ot-Sta5 6基因型进行分析。结果 应用PCR/RFLP分析了 12株分离自山东秋冬型恙虫病流行季节病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨体内的Ot,2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血中的Ot-sta5 6目的基因 ,2 4份标本酶切图谱经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 ,与日本地方株 -Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaI的酶切位点 ;2 4份标本提取的Ot-DNA扩增产物分别经型引物扩增 ,均出现相应分子量的扩增片段 ,皆属日本地方株Kawasaki型。结论 秋冬型恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨体内所分离的恙虫病东方体Sta5 6基因型是一致的 ,并在病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨间构成相互传播关系 ,这对当地恙虫病疫源地的维持有重要作用。

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的 :探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法 :1 995年 5月～ 2 0 0 2年 4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长 ,分离恙虫病东方体 (Ot)。结果 :室内外共捕捉到的 5 2 7只活鼠 (黑线姬鼠 335只 ,大仓鼠 1 1 9只 ,黑线仓鼠 6只 ,小麝鼠句 2只 ,褐家鼠 6 3只 ,小家鼠 2只 ) ,从活鼠体外共检获 1 5 4 6 7只恙螨 ,其中太平洋无前恙螨最多 5 72 0只 ,其它螨数量依次为小盾纤恙螨 4 1 75只 ,临淮岗纤恙螨 30 90只 ,须纤恙螨 1 6 87只 ,泰山纤恙螨 4 6 6只 ,脆弱无前恙螨 32 9只。恙螨季节变化 :小盾纤恙螨主要出现在 9～ 1 2月 ,高峰在 1 1月 ,是秋季鼠体外绝对优势种 ;须纤恙螨出现在 1 0～翌年 4月 ,高峰在 1 2月 ,为冬季优势螨种 ,临淮岗纤恙螨 5月出现 ,1 1月消失 ,高峰在 8月 ,为夏季优势种 ;泰山纤恙螨主要出现在6～ 1 0月 ,数量较少 ,且起伏较大 ;太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠 ,主要出现在 4～ 1 2月 ,高峰期在 7月。Ot分离 :小盾纤恙螨共接种 1 1批 ,分离到 5株 Ot;须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种 4批 ,分离到 4株、 2株和 2株 Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种 ,季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致 ;能自然感染。

山东省部队驻地流行性出血热流行病学调查与预防对策的研究

目的 了解山东省部队驻地(驻地)流行性出血热(EHF)自然疫源地流行病学特征及其危险因素。方法 采用病原学、血清学与病例对照和病家对照研究方法,检测标本和收集资料,进行整理分析。结果 驻地存在家鼠型(91.48%)、野鼠型(7.21%)、未定型(1.31%)病人。两型病人在性别、职业和年龄分布无明显差异。全年各月均有发病,家鼠型发病高峰为3～6月份,野鼠型为11月至翌年2月;鼠肺EHF病毒(EHFV)抗原型别和血清型别均与宿主种类相一致;证实边缘住户、住室鼠患、养狗、口腔粘膜损伤、吃鼠污染食物、房周有鼠栖地在病例中的频率显著高于对照(P<0.05)。而住室鼠患、使用捕鼠器、吃未防鼠食物与边缘住户在病家中的频率显著高于对照(P<0.05);长期坚持灭鼠防鼠的综合性措施,以“一个原则五个相结合”方法,能将鼠密度常年控制在1.0%以下。结论 驻地是以家鼠型为主的家、野鼠型混合型疫区,近年疫区扩大和病例剧增是由家鼠型病毒感染所致;春夏季EHF流行,主要系家庭内感染,以鼠污染食物传播和鼠源性接触传播为主;

山东地区秋冬型恙虫病宿主动物流行病学调查

1.材料与方法: ①调查点选择恙虫病流行区的费县、济南东郊、莒南、邹平等地区,其中以费县和济南东郊为重点;对调查点临床确诊的恙虫病现患者进行个案调查,填写流行病学调查表,并通过调查点各乡镇医院的防保站及乡村医生统计调查点当年发病人数及总人数,计算当地的人群发病率.②宿主动物调查:从费县调查点农田逐月定点捕鼠,在发病季节捕获部分室内鼠(其他调查点仅发病季节在室内外定点捕鼠),鉴定鼠种,计算鼠种群密度及季节消长;收集鼠血清,-20℃保存备用;从活鼠体外收集恙螨,鉴定种类,统计恙螨种类组成、不同螨种季节消长.③恙虫病东方体(Ot)的分离与血清学鉴定参照军事医学科学院陈香蕊等的方法.

山东地区恙虫病东方体Sta56基因片段扩增与分型研究

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体(Ot)基因型别。方法 采用巢式聚合酶链反应技术对23株恙虫病东方体山东株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及10份恙虫病患者全血中提取的Ot目的基因进行分析研究,并与Gilliam、Karp、Kato国际参考株进行比较。将群引物扩增产物用双向测序法进行序列测定。结果 35份标本中33份属于Kawasaki型,2份(FXS4 and LHGM2株)属于Karp型。从这33份中选出B-16、FXS2株进行碱基序列测定,结果B-16、FXS2株Sta56基因片段序列与Kawasaki型同源性最高,分别为94.22％、95.21％,而与其他6株Ot同源性均<75.87％.应属于Kawasaki型;FXS4和HGM2株Sta56基因片段序列与Karp型同源性最高,分别为83.03％、96.45％,应属于Karp型。结论 山东地区恙虫病东方体流行株以Kawasaki型为主,但同时存在Karp型。

PCR/SSCP在恙虫病东方体基因分型中的应用

目的 采用优化聚合酶链反应 /单链构象多态性分析 (PCR/SSCP)方法分析恙虫病东方体 (Orientiatsut sugamushi,Ot)基因型的各项条件。 方法 对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病人全血中提取的Ot-Sta5 6基因进行分析。采用PCR/SSCP检测 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本提取的Ot -DNA群引物扩增产物呈现出 2种不同的单链构象图谱 ,其中 33份与国际参考株Gilliam ,Karp ,Kato均不相同 ,应属这 3型以外的一种基因型 ,经NestedPCR分型证实为Kawasaki型 ;2份与Karp株相同。表明山东地区恙虫病东方体至少存在 2种型别。检测结果与Nested -PCR基因分型结果相符。条件优化以 8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,常温下 ,2 0 0V电泳 3h获得的电泳结果较为理想 ,并易于操作。结论 PCR/SSCP条件优化后可用于快速分析恙虫病东方体基因型 ,且操作简便 ,结果准确。

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。