《分析化学》四大反应及滴定整合式教学的探索与实践

传统单一讲授式的《分析化学》教学方法不能发挥学生主动学习的积极性，本文探讨《分析化学》整合式教学的方法，启发和锻炼学生的创新思维，调动学生学习的主观能动性，培养学生整理归纳总结知识点的能力，使学生由被动学习向创造性主动学习转变，提高学习效果。

绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的重组表达及初步活性鉴定

目的原核表达及纯化绿脓杆菌鞭毛蛋白ngE并进行初步活性鉴定。方法分析绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的基因序列，设计带适当酶切位点的引物，用PCR方法扩增出FlgE的编码DNA序列，与大肠杆菌表达载体pET24a同时经NdeI／Hind Ⅲ双酶切、纯化及连接后构建pET24a—FlgE原核表达质粒，挑选重组阳性质粒经DNA测序确认序列正确，转化至大肠杆菌B121中进行诱导表达条件优化，使重组质粒表达目的蛋白，采用组氨酸标签亲和层析法对目的蛋白进行纯化，通过SDS-PAGE对纯化后蛋白相对分子质量进行鉴定，用试剂盒进行去内毒素化处理。在体外培养人角膜上皮细胞系细胞，加入纯化的F1gE重组蛋白，培养4h后应用实时定量PCR检测各种相关的炎性因子以反映FlgE蛋白活性。结果可用于大肠杆菌表达系统的重组pET24a—F1gE构建成功，其编码的蛋白在BL21中获得高效表达，当诱导剂异丙基一B—D一硫代吡喃半乳糖苷浓度为1mmol／L，在16、225r／min振荡培养20h，诱导目的蛋白表达量最高，经纯化、去内毒素处理和SDS—PAGE鉴定，获得纯化的重组FlgE蛋白。角膜上皮细胞用20μg／ml FlgE处理后，细胞内炎性相关分子IL-6和IL-8的表达量明显上升，而灭活的F1gE蛋白则丧失该刺激活性。结论获得纯化的重组绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE，且可刺激角膜上皮细胞上调炎性因子IL-6、IL-8的表达。

抗癌中草药中镉、汞和铅的流动注射电感耦合等离子体质谱分析

目的利用流动注射进样电感耦合等离子体质谱法分析抗癌中草药中镉、汞和铅3种重金属元素。方法采用硝酸-盐酸-过氧化氢-氢氟酸消解体系压力密闭消解,用流动注射进样电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法分析。结果在优化的实验条件下,仪器和方法的检出限分别为0.006~0.01ng/ml和0.0016~0.0053 g·g^(-1)范围;相对标准偏差在1.8%~2.9%范围,15 h内^(111)Cd、^(202)Hg和^(208)Pb的灵敏度降低的幅度在3.5~5.6%范围。结论流动注射条件下,基体对仪器灵敏度稳定性的影响较连续进样明显降低。