SARS-CoV抗体实验诊断中的假阳性原因分析

目的:探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体在SARS病原学诊断中的假阳性问题。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR技术检测了161例非SARS患者SARS-CoV抗体的阳性率。结果:59例正常对照中,IgG抗体的阳性率为3.4%(2/59);40例肿瘤患者中,IgG抗体阳性率为17.5%(7/40);31例自身免疫病患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为6.5%(2/31)和22.6%(7/31),IgG抗体和IgM抗体同时阳性为6.5%(2/31);31例系统性红斑狼疮(SLE)患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29.0%(9/31)和58.1%(18/31),IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22.6%(7/31)。IgM和IgG抗体诊断SARS的假阳性率分别为6.8%和21.1%,两种抗体同时诊断SARS的假阳性率为5.6%。经RT-PCR证实上述阳性均为假阳性。结论:两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。

HLA-G在卵巢癌细胞株SKOV-3中表达的实验性研究

目的:检测卵巢癌细胞株SKOV-3中人白细胞抗原G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)的表达。方法:用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫细胞化学法及流式细胞术检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G的表达,以绒毛膜癌细胞株JEG-3中HLA-G的表达为阳性对照。结果:(1)免疫细胞化学显色显示SKOV-3细胞膜及细胞浆内均有HLA-G的表达;(2)RT-PCR结果表明,SKOV-3细胞中有HLA-G mRNA表达;(3)流式细胞术结果提示,SKOV-3细胞中HLA-G阳性率是33.77%。结论:卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G mRNA及HLA-G蛋白表达为阳性。

新生儿缺氧缺血性脑病的实验研究现状

新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是由围产期缺氧所致的颅脑损伤,是导致新生儿死亡的主要原因之一,目前还没有很好的治疗措施.因此,了解该病的发病机制,有助于促进基础医学向临床转化.本文总结了HIE发病病因、病理生理机制,结合最新的研究现状,深入探讨HIE潜在的治疗靶点及目前研究的局限性,为制定新的研究方案指明方向,为基础医学向临床转化搭建桥梁.

丙戊酸钠抑制胃癌细胞系-BGC823增殖的实验研究

目的探讨丙戊酸钠抑制胃癌细胞系BGC-823增殖作用。方法将0.75mmol/L^4.0mmol/L丙戊酸钠作用于BGC-823细胞48小时,观察细胞数量、形态的变化并用MTT法分析细胞生长抑制、AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率的改变和PI法观察细胞周期的变化。结果1.丙戊酸钠干预后细胞数量明显减少、形态不规则、细胞核固缩、胞浆减少;2.与对照组比较,丙戊酸钠可造成BGC-823细胞生长抑制率(F=417.11,p=0.000)、细胞凋亡率(F=385.24,p=0.000);以及增殖周期G1期比例(F=385,p=0.000)明显升高。结论丙戊酸钠可明显抑制HepG2的生长,诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用,在胃癌治疗方面具有重要理论价值和实践意义。

SARS冠状病毒的诊断性实验研究

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新的人类感染性疾病,其致病菌为SARS冠状病毒(SARS-CoV)。本文就SARS-CoV发现过程、病毒特点及检测方法的研究进展和应用情况加以概述。

TNF-α及IL-6基因多态性与胃腺癌易感性的关系

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)基因单核苷酸多态性(SNP)与胃腺癌及幽门螺杆菌(HP)感染胃腺癌发生发展的相关性。方法:采用基因芯片技术检测65例胃腺癌患者和71例健康对照人群中TNF--α238G/A-、308G/A和IL-6-597G/A、-174G/C、-572G/C位点多态性。同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其血清中HP-IgG/IgM/IgA型抗体浓度。结果:感染HP胃腺癌患者的阳性率明显高于感染HP的对照组(P=0.007,相对危险度[OR]=2.53,95%可信区间[95%CI]=1.28-5.24)。胃腺癌组TNF--α238GA基因型和A等位基因频率明显高于对照组(P=0.024,OR=2.44,95%CI=1.11-5.37;P=0.039,OR=2.13,95%CI=1.03-4.41),在HP阳性胃腺癌组明显高于HP阴性胃腺癌(P<0.05,OR=4.53,95%CI=1.16-17.68;P<0.05,OR=3.52,95%CI=0.98-12.64)。胃腺癌组IL-6-572CC基因型频率明显低于对照组(P=0.014,OR=0.17,95%CI=0.04-0.81)。未见TNF-α和IL-6其他位点的SNP与胃腺癌组或HP阳性胃腺癌组有任何相关性。结论:TNF-238GA基因型及其等位基因A与胃腺癌或感染HP的胃腺癌易感性相关,而IL-6-572CC基因型则能降低胃腺癌易感性。

应用于缺血缺氧性脑病治疗的神经干细胞移植：现实与未来

背景:很多研究都揭示神经干细胞移植是治疗缺血缺氧性脑病的新方法。目的:就神经干细胞移植治疗缺血缺氧性脑病的现状、移植策略以及发挥作用的可能机制等方面做一系统的归纳分析。方法:检索2000年8月至2013年8月PubMed数据库及中国知网数据库有关神经干细胞移植及缺血缺氧性脑病等方面的文献,英文检索词为"Hypoxic-ischemic encephalopathy,neural stem cells",中文检索词为"缺血缺氧性脑病,神经干细胞"。排除与研究目的无关和内容重复者,保留39篇文献做进一步分析。结果与结论:神经干细胞移植能在一定程度上缓解缺血缺氧导致的神经功能的障碍,起到一定的治疗作用,给缺血缺氧性脑病患者带来新希望。但是该研究还处于实验室研究阶段,影响移植的一些关键因素,如:移植途径、时间、单纯或联合移植以及移植的细胞发挥作用的机制等还不明确,还有待科学实验来予以验证。

细胞因子基因多态性与胃腺癌发生及其临床病理特点的关系

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)基因单核苷酸多态性(SNP)与胃腺癌合并或未合并幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法采用基因芯片技术检测130例胃腺癌患者(胃癌组)和142例健康对照人群(对照组)中TNF-α-238G/A,-308G/A和IL-6-597G/A,-174G/C,-572G/C位点多态性。同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组血清中Hp-IgG/IgM/IgA型抗体浓度。结果胃癌组Hp的感染阳性率明显高于对照组(P<0.01,相对危险度[OR]=2.59)。TNF-α-238GA基因型和A等位基因频率,胃癌组明显高于对照组(P<0.01,OR=2.44;P<0.01,OR=2.13);Hp阳性胃癌组明显高于Hp阴性胃癌(P<0.05,OR=4.53;P<0.01,OR=3.52);低分化胃癌组显著高于高分化胃癌组(P<0.05,OR=4.16)。胃癌组IL-6-572CC基因型频率明显低于对照组(P<0.01,OR=0.17)。未见TNF-α和IL-6其他位点的SNP与胃癌组或Hp阳性胃癌组有任何相关性。结论TNF-238GA基因型及其等位基因A与胃腺癌或感染Hp的胃腺癌易感性相关,而IL-6-572CC基因型则能降低胃腺癌易感性。

SLE患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

为了探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体测定在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的假阳性问题,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR技术检测了66例正常对照和31例SLE患者血清中SARS-CoV抗体的阳性率。结果,66例正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3.0%(2/66);31例SLE患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29%(9/31)和58.1%(18/31),IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22.6%(7/31)。经RTPCR检测,上述阳性病例均为阴性。结论:用非纯化抗原制备的ELISA试剂盒测定SLE患者的SARS-CoV抗体,可能出现假阳性,两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。在SLE患者中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。

重组人生长激素对烧伤大鼠肠道细菌／内毒素移位的影响

目的观察早期应用重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对严重烧伤大鼠肠道细菌/内毒素移位的影响。方法30只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、烧伤组和rhGH 3组。后2组造成25%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤,立即腹腔注射地塞米松80 mg/kg,伤后2 h分别给予等渗盐水和rhGH 1.33 IU/kg。伤后8、24 h,观察肠道细菌移位频率、门静脉与腔静脉血清内毒素含量、腔静脉血清肿瘤坏死因子(TNF)α含量和肝功能变化。结果rhGH组肠道细菌移位频率和组织细菌含量均明显低于烧伤组(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);rhGH组门、腔静脉内毒素含量明显低于烧伤组(P<0.01);腔静脉TNFα含量和肝功能指标明显低于烧伤组(P<0.01,P<0.05)。结论早期应用大剂量rhGH能有效减轻严重烧伤后肠道细菌/内毒素移位,减少炎性介质释放,保护脏器功能。

AFP基因SiRNA表达质粒的构建及鉴定

目的:构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因siRNA表达质粒,为进一步研究AFP基因功能奠定基础?方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化的pSilencer3.0-H1连接?转化大肠杆菌,扩增?纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列?结果:纯化的质粒的分子量为2.8 Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符?结论:成功构建了针对AFP基因的siRNAs表达质粒?

HLA-I类抗原与HFRS的相关性研究

目的 探讨 HL A- 类基因多态性与肾综合征出血热 (Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)的相关性。方法 应用微量淋巴毒试验对中国北方地区 5 6例 HFRS患者 (HFRS组 )及健康人群 (对照组 ) HL A- 类基因频率分布进行了检测。结果 HFRS组 HL A- B39和 HL A- B4 0抗原出现频率均为 7.14 % ,对照组皆为 0 ,两组比较差异具有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 HL A- B39和 HL A- B4 0基因可能与中国北方地区人群HFRS的易感性有关。

胃癌组织中Sonic Hedgehog和VEGF表达及临床意义的研究

目的:探讨胃腺癌中Sonic Hedge-hog(Shh)和VEGF的表达及临床意义。方法:应用免疫组化法检测45例胃癌组织及15例癌旁胃黏膜组织中Shh和VEGF的表达。结果:Shh在胃癌组织中阳性表达率为66.7%,在中、低分化胃癌中的表达高于高分化胃癌中的表达,与组织分化程度相关,P<0.01,在癌旁胃黏膜组织中Shh表达为阴性或弱阳性(15.3%);VEGF在胃癌组织中的阳性表达率(71.1%)显著高于癌旁胃黏膜组织中的阳性表达率(26.7%),P<0.01,与肿瘤分化程度、淋巴结转移呈正相关,P<0.05。Shh和VEGF在胃癌组织中的表达存在相关性(0.01<P<0.05)。结论:Shh在胃癌组织中的表达有一定的特异性,可能是胃癌治疗的一个理想靶目标;Shh与VEGF表达存在相关性,联合检测两者有助于提高胃癌侵袭转移能力的评估,对胃癌的早期诊断、预后判断具有重要的临床意义。

成人Still病的辅助检查

Still病本是指系统型起病的幼年型慢性关节炎,但相似疾病也可发生于成年人,称为成人Still病。历史上关于Still病的描述始于1986年,以后报道增多并有不同命名。真正使用成人Still病一名始自1971年Bywater的报道,以后沿用。国内曾长时间使用"变异性亚败血症"一名,现早已废弃。为便于国际交流,国家自然科学名词审定委员会公布的医学名词认定Still病一词,成人患者为成人Still病。现将该病的研究进展综述如下,以飨同道。

大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Hedgehog信号分子的表达

背景:Hedgehog 信号通路是一个在胚胎阶段调控多种组织器官发育的重要信号通路,在成骨发育方面具有重要的作用。但Hedgehog 信号分子在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞过程中的作用尚未清楚。目的:体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化,检测 Hedgehog 信号分子在成骨诱导分化过程中的变化。方法:从大鼠骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞,进行地塞米松成骨诱导,通过免疫组化方法鉴定成骨的情况,Western Blot方法检测 Hedgehog 信号分子 SHH 和 IHH 在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达。结果与结论:成功分离得到骨髓间充质干细胞,地塞米松诱导培养 7,14,21 d 后,Ⅰ型胶原的表达量逐渐增加;在诱导成骨分化过程中,SHH 蛋白表达升高,诱导组的表达明显高于未诱导组的表达(P < 0.05),而 IHH 蛋白的表达降低,诱导组的表达明显低于未诱导组的表达(P < 0.05)。结果提示,Hedgehog 信号分子参与地塞米松诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的过程,且 SHH 和 IHH 在间充质干细胞诱导成骨过程中的作用有差异。

前炎性细胞因子基因多态性与乙型肝炎病毒感染的关系

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)基因单核苷酸多态性(SNP)与乙型肝炎病毒(HBV)感染的关系。方法采用基因芯片技术检测150例HBV感染患者(病例组)和不相关联的100例急性乙型肝炎病毒感染自行恢复后对照人群(对照组)中TNF-α-238G/A,-308G/A和IL-6-597G/A,-174G/C,-572G/C位点SNP。结果TNF-α-308GG基因型和G等位基因频率,病例组明显高于对照组(P<0.01,相对危险度[OR]=6.71及P<0.01,OR=2.22);TNF-308AA基因型与抗病毒治疗具有协同作用(P<0.05,OR=2.91)。未见IL-6和TNF-α其他位点的SNP与病例组有任何相关性。结论TNF-308GG基因型及其等位基因G与乙型肝炎病毒感染易感性相关,而TNF-308AA基因型则与抗病毒治疗具有协同抗病毒作用。

尼古丁乙酰胆碱受体在烟草相关癌症中的研究进展

目前,每年吸烟可引起大约5～6百万人死亡,其中吸烟引起的癌症死亡占所有癌症死亡总数的30%以上。烟草中的成瘾成分尼古丁和其衍生的致癌物质亚硝胺可以通过激活尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs)而导致癌症的发生。尼古丁在支气管上皮细胞可通过氧化应激反应而引起DNA损伤,此外,尼古丁可诱发肿瘤的发生,但其在致癌方面的作用尚不明确。本文就近几年nAChRs与烟草相关癌症发生、发展的研究进展进行综述。

siRNA干扰CHRNA5基因的表达抑制尼古丁对人肺癌细胞的促增殖作用

目的:研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5(cholinergic receptor nicotinic alpha5,CHRNA5)基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。方法:设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测转染后A549细胞中CHRNA5 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测CHRNA5-siRNA对尼古丁促A549细胞增殖作用的影响。结果:成功构建了CHRNA5-siRNA并成功转染A549细胞。CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5mRNA表达量明显低于si-NC转染对照组(0.196±0.044vs0.944±0.027,P<0.01),CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5蛋白表达量明显低于si-NC转染组(0.267±0.031vs0.745±0.035,P<0.01)。在无尼古丁作用时,CHRNA5-siRNA的转染不能抑制A549细胞的增殖。在尼古丁作用下,A549细胞增殖显著增加(P<0.01),CHRNA5-siRNA转染可明显抑制尼古丁的促增殖作用(P<0.01)。结论:siRNA下调肺癌A549细胞中CHRNA5的表达可以抑制尼古丁促细胞增殖作用,CHRNA5可能是肺癌治疗的潜在靶点之一。

应激性胃溃疡与孕酮的保护作用及其机制

目的:观察不同剂量和不同作用时间孕酮对应激性胃溃疡的预防和治疗作用。方法:实验于2005-02/06在山东师范大学生理实验室完成。选择健康昆明种雄性小鼠100只,鼠龄4～6周,体质量22～24g。建立束缚冷水应激性胃溃疡模型,按照实验要求进行小鼠分组。①孕酮对应激性胃溃疡的保护作用:小鼠分为4组,即对照组和0.4mg/kg,0.8mg/kg,1.6mg/kg孕酮注射组,每组10只。对照组在应激前0.5h肌肉注射生理盐水0.5mL,孕酮注射各剂量组分别在应激前0.5h肌肉注射0.4mg/kg、0.8mg/kg、1.6mg/kg孕酮,应激3h后计算胃溃疡指数及测定胃液pH值。②孕酮对应激性胃溃疡的治疗作用:小鼠分为5组,即应激后即刻组,生理盐水5h组,生理盐水7h组,孕酮5h组,孕酮7h组,每组10只。应激后即刻组于应激后即刻注射生理盐水0.5mL;生理盐水5h,7h组应激后注射生理盐水0.5mL分别恢复5,7h后计算胃溃疡指数。孕酮5h,7h组在应激后注射孕酮0.8mg/kg分别恢复5,7h后计算胃溃疡指数。并制备小鼠离体小肠,置于灌流槽,记录不同浓度的孕酮(5,50,100μmol/L)对小肠平滑肌收缩的影响。结果:实验过程中无动物意外死亡、丢失及补充,100只小鼠均进入结果分析。①与对照组相比,各孕酮注射组(0.4,0.6,0.8mg/kg)的溃疡指数都明显降低,且表现随孕酮浓度的增加抑制效果越明显[(40.91±23.30),(12.42±11.80),(12.64±8.86),(6.67±4.81)]。但各孕酮注射组的胃液pH值与对照组相比无明显变化。表明孕酮对应激性胃溃疡有明显预防保护作用,但对胃酸的分泌无影响。②小鼠束缚加冷水应激后3h即刻测得溃疡指数为(39.6±20.8),与即刻组相比,应激后注射生理盐水恢复5h、7h溃疡指数降低且7h后降低较明显[(27.6±17.5),(22.1±15.5)]。表明离开应激环境,小鼠胃粘膜有自我修复能力。应激后注射孕酮恢复5h溃疡指数为(19.1±10.5),注射孕酮恢复7h溃疡指数为(11.9±9.7),与应激性即刻相比胃溃疡指数明显减少。注射孕酮后7h的溃疡指数与注射生理盐水7h相比,溃疡指数明显减少。③正常对照组离体小肠收缩频率为(50.0±9.5)次/min,幅度为(3.24±1.3)mm,而向浴槽中滴加5,50,100μmol/L孕酮后,与对照组相比,孕酮各组的离体小肠的收缩频率和幅度明显降低,且呈现浓度依赖性[(37.7±11.7)次/min,(2.78±1.1)mm];[(34.08±2.6)次/min,(2.65±0.4)mm];[(25.13±2.4)次/min,(2.67±0.9)mm],孕酮能抑制离体小肠的收缩。结论:孕酮对应激性胃溃疡有保护作用,其机制可能与孕酮抑制胃肠平滑肌的收缩有关,而与胃酸的分泌无关。

银杏内酯B抑制中性粒细胞活化的研究

目的研究银杏内酯B(GB,抗血小板聚集)抑制血小板活化因子(PAF)介导的中性粒细胞活化。方法将银杏内酯B加入抗凝全血中,阻断PAF对中性粒细胞活化;用PAF及二磷酸腺苷(ADP)活化下述各组的中性粒细胞,包括对照组、PAF组、PAF+GB组、ADP组和ADP+GB组,用流式细胞术检测中性粒细胞整和素(CD11b)平均荧光强度。结果 PAF及ADP均可明显增加中性粒细胞CD11b的平均荧光强度,银杏内酯B可明显抑制PAF及ADP诱导的CD11b的平均荧光浓度。结论银杏内酯B可明显抑制PAF介导的中性粒细胞活化。