毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激及丹红注射液的干预作用

目的:探讨毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激凋亡的机制及丹红注射液的干预作用。方法:体外培养SD乳鼠皮层神经元,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度。流式细胞术Annexin V、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、caspase-8、caspase-7、caspase-9表达,West-ern bloting免疫印迹分析caspase-12、GRP78、Bcl-2、细胞色素c蛋白表达,Fura-2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度([Ca2+]i)。结果:SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养。2μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%,丹红治疗组分别是6.30%、6.11%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。毒胡萝卜素诱导神经元GRP78表达上调,剪切活化caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12,使细胞色素c表达增加,Bcl-2表达减少。丹红注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素c释放,减少活化的caspase-3、caspase-8、caspase-9含量,稳定游离钙浓度。结论:毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激反应性凋亡,丹红注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡。