miR-29表达载体的构建及在HBV相关肝癌中靶基因的初步鉴定

目的通过构建miR-29的表达载体以及HBV相关肝癌中靶基因的初步鉴定,为探讨miR-29和其靶基因在HBV相关肝癌发生、发展中的作用奠定基础。方法利用生物信息学方法预测miR-29的靶基因,RT-PCR方法检测靶基因在肝癌细胞系及相应临床标本中的表达变化;构建miR-29及其靶基因的表达载体,利用双荧光报告检测方法检测miR-29与靶基因的靶向关系。结果成功构建miR-29及其靶基因核表达载体,分别命名为pS-miR-29a,pS-miR-29b,pS-miR-29c及pGL3-TUBB2A;靶基因TUBB2A在HBV相关肝癌中表达明显上调。结论 TUBB2A为miR-29的直接靶基因,本研究为下一步研究miR-29及其靶基因TUBB2A在HBV相关肝癌发生、发展中的作用奠定基础。

小鼠OX2βR突变体表达载体的构建

目的通过分子生物学方法构建小鼠Orexin 2β受体(mOX2βR)C末端突变表达载体。方法设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术,通过胶回收、酶切、连接、转化和测序等生物技术,构建mOX2βR突变体的表达载体。结果成功构建mOX2βR突变表达载体,将其分别命名为mu1、mu2和mu3。结论成功构建了mOX2βR C端不同的突变体,为进一步研究mOX2βR C末端氨基酸在信号通路中的作用奠定了基础。

转录因子性别决定区Y框18对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨转录因子性别决定区Y框18（SOX18）对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关机制.方法 采用pCI-SOX18表达质粒转染HeLa细胞（实验组）,设空白对照组和阴性对照组;Western blot法检测各组中SOX18和基质金属蛋白酶7（MMP-7）的表达情况.四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SOX18对HeLa细胞增殖的影响;Transwell法观察SOX18对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 在增殖实验中,各时间点实验组细胞数目与阴性对照组、空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;实验组SOX18相对表达量为1.16±0.13,空白对照组为0.23±0.05,阴性对照组为0.28±0.07,差异具有统计学意义（F=218.14,P〈0.05）;实验组MMP-7蛋白相对表达量为0.95±0.09,空白对照组为0.71±0.07,阴性对照组为0.68±0.06,三组差异有统计学意义（F=116.84,P〈0.05）.迁移实验中,实验组迁出细胞数量为（175.71±17.17）个,阴性对照组为（95.19±8.18）个,空白对照组为（93.34±9.72）个,实验组与对照组差异均有统计学意义（t=75.47,t=77.35,均P〈0.05）.侵袭实验中,实验组细胞迁出的数量为（247.12±36.82）个,阴性对照组为（98.63±14.62）个,空白对照组为（96.57±13.95）个,实验组与对照组差异均有统计学意义（t=98.02,t=99.34,均P〈0.05）.结论 过表达SOX18对HeLa细胞增殖无影响,可促进细胞迁移和侵袭,该作用可能是通过SOX18正性调节MMP-7实现的.