人白细胞介素16的基因克隆及其表达载体的构建

目的 通过从人外周血单个核细胞 (PBMC)中克隆编码人IL - 16的cDNA基因 ,构建人IL -16的原核高效表达系统。方法 从组胺刺激的正常人外周血单个核细胞中分离总RNA ,利用半巢式RT -PCR、T -A克隆等技术得到特异的cDNA片段 ;将含有IL - 16cDNA的质粒IL - 16 -PUC18和原核表达载体PMAL -C2 经酶切、目的DNA片段的分离、重组连接、筛选、序列分析等系列操作 ,获得重组质粒PMAL-C2 -IL - 16 ,将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达工程菌 ,Westernblotting检测表达产物。结果 经序列测定证实 ,所得片段为IL - 16cDNA ;Westernblotting检测重组体中确有抗IL - 16抗体的融合蛋白表达。结论 成功克隆了中国人IL - 16cDNA ,并表达了IL - 16融合蛋白。