IL-10在急性白血病预后判断中的临床意义研究

目的:主要在检测急性髓系白血病患者(AML)的外周血可溶性IL-10血清水平的基础上,分析其在AML患者临床预后判断中的生物学标志物作用。方法:按照国际上统一的FAB诊断标准选择急性髓系白血病患者64例。采用酶联免疫ELISA法检测白血病患者的血清IL-10水平。通过对结果进行ROC曲线分析获得临界值,并以临界值为基准分为大于临界值组和小于临界值组,微小残留病(MRD)采用流式细胞术检测。统计分析血清IL-10水平在预后判断中的作用。结果:AML患者组血清IL-10水平高于正常对照组,分别为86.74±79.16pg/ml和41.87±20.32pg/ml,差异具有统计学意义(t=2.732,P=0.00076)。大于临界值(cut-off)组的平均水平高于小于临界值组,分别为107.20±87.48pg/ml和31.58±9.92pg/ml(t=4.626,P<0.0001)。完全缓解(CR)组低于未获得缓解组(NR),分别为60.31±50.09pg/ml和149.40±99.58pg/ml(t=4.769,P<0.0001)。复发组高于非复发组,分别为112.70±98.83pg/ml和41.55±29.30pg/ml(t=4.293,P<0.0001)。治疗3周后的WBC数量或淋巴细胞数量与血清IL-10水平均没有明显的相关性(r=0.0023,P=0.7118;r=0.005754,P=0.5546),治疗6周后的WBC数量或淋巴细胞数量和血清IL-10水平也没有明显的相关性(r=0.0029,P=0.6924;R=0.0171,P=0.3317)。大于和小于临界值两组的CR率分别为89.65%和54.29%,复发率分别为10.34%和25.71%,差异均无统计学意义(χ^(2)=1.642,P=0.200;χ^(2)=1.710,P=0.191)。小于临界值组的MRD发生率低于大于临界值组,分别为17.24%和57.14%(χ^(2)=4.879,P=0.027)。小于临界值组的NR率也低于大于临界值组,分别为10.34%和42.86%(χ^(2)=4.845,P=0.028)。大于和小于临界值两组的平均无病生存期分别为24.65±23.36个月和47.95±20.45个月,差异具有统计学意义(t=3.191,P=0.0030),血清IL-10水平与无病生存期存在负相关性(r=-0.3021,P=0.0153)。大于或小于临界值两组的3年总生存率分别为16.67%和41.67%,5年生存率分别为16.67%和38.89%,差异均具有显著性(χ^(2)=7.034,P=0.0080;χ^(2)=5.355,P=0.0270)。结论:AML患者血清IL-10的升高,尤其是将血清IL-10水平分为大于或小于临界值两组后,可以作为疗效评估、微小残留病监测和预后判断的血清学指标。

miR-let-7c-3p靶向Egr-1调控白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化的机制研究

目的探讨miR-let-7 c-3 p/早期生长反应因子-1(Egr-1)信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的作用与分子机制.方法人慢性髓系白血病K562细胞分别用100μg/L佛波酯(PMA,实验组)和0μg/L PMA(对照组)溶液向单核/巨噬细胞定向诱导分化48 h后,通过细胞形态学观察和流式细胞仪测定分化抗原,确定分化模型的成功建立;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测白血病细胞分化前后Egr-1和miR-let-7c-3p的表达变化,蛋白质印迹法检测Egr-1蛋白表达变化;siRNA干扰实验检测Egr-1对细胞分化的影响,设PMA+si-Egr-1组和PMA+si-Ctrl组;双荧光素酶结合实验检测miR-let-7 c-3 p与Egr-1的3′UTR靶向结合和活性调控关系,用Egr-1-wt野生质粒、Egr-1-mut突变质粒和miR-let-7 c-3 p mimics或NC mimics共转染细胞,设置miR-let-7 c-3 p mimics+Egr-1-wt、miR-let-7 c-3 p mimics NC+Egr-1-wt、miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-mut和miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-mut组;通过细胞转染miR-let-7c-3p mimics和inhibitor调控miRNA表达,设置阴性对照序列(miR-let-7c-3p mimics NC和miR-let-7c-3p inhibitor NC),qRT-PCR验证调控效果;蛋白质印迹法检测miR-let-7c-3p对Egr-1的表达影响;流式细胞术检测miR-let-7c-3p对PMA诱导的K562细胞分化抗原的影响.结果经过PMA体外诱导后,与对照组比较,实验组K562细胞增殖水平升高(0.85±0.03 vs 0.46±0.03;t=16.050,P<0.001),CD11b阳性表达量升高〔(49.47±3.48)%vs(3.54±0.54)%;t=24.070,P=0.002〕,CD14阳性表达量也升高〔(59.84±5.26)%vs(6.79±0.66)%;t=16.670,P=0.004〕.与对照组比较,实验组Egr-1基因和蛋白表达水平升高,miR-let-7c-3p基因表达量降低,差异有统计学意义,均P<0.001.siRNA干扰实验结果显示,PMA+si-Egr-1组CD14分化抗原表达水平低于PMA+si-Ctrl组〔(7.03±1.45)%vs(24.40±4.70)%;t=6.113,P=0.004〕.双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-wt组的荧光素酶活性低于miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-wt组(0.77±0.006 vs 1.00±0.008;t=27.582,P<0.001).蛋白质印迹法检测结果显示,K562细胞转染miR-let-7c-3p inhibitor后,Egr-1蛋白表达水平高于miR-let-7c-3p inhibitor NC组(0.83±0.12 vs 0.39±0.00;t=-6.416,P=0.003);转染miR-let-7c-3p mimics后,Egr-1蛋白表达水平低于miR-let-7c-3p mim-ics NC组(0.18±0.01 vs 0.48±0.06;t=8.421,P=0.001).在miR-let-7c-3p对100μg/L PMA诱导K562细胞分化48 h的实验中,与0μg/L PMA组比较,100μg/L PMA可以诱导K562细胞分化抗原CD11b升高,分别为(3.44±0.43)%和(45.14±1.40)%,100μg/L PMA诱导K562细胞的同时转染miR-let-7c-3p inhibitor NC和miR-let-7c-3p in-hibitor后,2组分化抗原CD11b分别为(43.91±1.00)%和(59.22±1.28)%,4组间CD11b表达水平差异有统计学意义,F=1460.318,P<0.001.与0μg/L PMA组比较,100μg/L PMA同样诱导K562细胞的CD14表达升高,分别为(4.91±0.42)%和(70.54±1.45)%,100μg/L PMA共转染miR-let-7c-3p inhibitor NC或miR-let-7c-3p inhibitor后,CD14表达水平分别为(71.91±0.75)%和(85.98±0.52)%,4组间CD14表达水平差异有统计学意义,F=5163.346,P<0.001.结论miR-let-7c-3p可与Egr-1的3′UTR结合,并且可以靶向调控其表达水平变化.miR-let-7c-3p/Egr-1信号轴是白血病细胞定向分化为单核/巨噬细胞的重要途径之一.