西藏小型猪和五指山小型猪的生理特点及其动脉粥样硬化的发病特征比较研究

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是冠心病和脑卒中发生的主要病因。人类AS的发病模式多种多样,在高血脂环境下,有肥胖导致胰岛素抵抗、共同促进AS形成,也有胰岛素抵抗导致高血压、加速AS形成,往往同时存在代谢综合征的一种或多种临床表象,其发生与发展是遗传因素和环境因素共同作用的结果。猪在循环系统、血小板凝聚系统、脂蛋白代谢及消化系统均与人类极为相似,其AS病变与人类AS病变的分布特点相一致,并具有人类成熟斑块的特点,是研究AS的一个重要模式动物。我国小型猪种质资源丰富,不同品种品系的小型猪具有不同种质特性和生物学功能。五指山小型猪、西藏小型猪尤如人类的两个不同类型的AS易感群体。本文就作者研究团队对五指山小型猪、西藏小型猪的AS形成和病症特点方面的研究作一回顾性的总结,为在心血管疾病研究中对小型猪品系的选择和应用提供一些参考。

非人哺乳动物细胞系身份鉴定的研究进展

非人哺乳动物细胞系在医学生物学研究中正起着越来越重要的作用。与人源细胞一样,非人哺乳动物细胞在使用中也面临着错用、污染和变异的问题。但与人源细胞相比,非人哺乳动物细胞受到的关注比较少,细胞身份鉴定技术发展较慢。目前对非人哺乳动物细胞系身份鉴定的研究主要集中在小鼠、中国仓鼠和非洲绿猴3个物种,方法以短串联重复序列(short tandem repeats,STR)标记检测为主,单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分析为辅。本文就非人哺乳动物细胞系身份鉴定技术在不同物种中的发展现状进行综述。

不同因素对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥大模型建立影响的比较研究

目的观察和比较不同性别和注射剂量对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌肥大模型建立的影响。方法分别取雌性和雄性SD大鼠,随机分为三组,正常组、低剂量组(1.25 mg/kg)和高剂量组(5 mg/kg)。ISO皮下注射10 d后,比较超声心动图、血流动力学、组织病理学和实时荧光定量PCR等结果在不同因素影响下的差异。结果(1)高、低剂量ISO处理后,大鼠心脏重量各参数、室间隔厚度、心肌细胞面积、心肌纤维化程度以及肥大基因(ANP、BNP)mRNA表达水平均显著增大(P<0.01),而左室心功能均显著降低(P<0.01);(2)雄性大鼠左室重量/体重,室间隔厚度,左室收缩末压(LVESP),左心室最大舒张速率(-dp/dtmax)以及ANP基因表达水平变化呈明显的剂量依赖关系(P<0.01),雌性大鼠仅左室收缩末压(LVEDP),左心室最大舒张速率(dp/dtmax)变化与剂量相关,即雌性低剂量组心功能降低更为明显(P<0.01);(3)注射低剂量ISO时,雌性大鼠心功能降低比雄性大鼠更为明显(P<0.01);而注射高剂量ISO时,雄性大鼠左心室重量/体重以及ANP基因表达增加比雌性大鼠更为显著(P<0.01);(4)雄性大鼠低、高剂量组存活率分别为63.6%、81.8%,雌性低、高剂量存活率则分别为63.6%、55.0%,正常组动物均无死亡。结论ISO注射剂量不同对雄性大鼠心肌肥大程度影响较大,但对雌性大鼠影响较小。造模时雄性大鼠选择5 mg/kg剂量、雌性大鼠选择1.25 mg/kg剂量,建立ISO诱导的大鼠心肌肥大模型效果相对较好。

WHBE兔与日本大耳白兔腹泻型肠易激综合征模型的肠道菌群研究

目的比较分析WHBE兔和日本大耳白(Japanese white rabbit,JW)兔腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)模型肠道菌群的差异性。方法 WHBE兔和JW兔各16只,按品系随机分为两组,即正常对照(NC)组和IBS模型组,每组8只。采用湿热应激复合番泻叶方法建立腹泻型IBS兔模型,观察实验兔的腹围指数、粪便含水量、结肠转运功能,处死后分别取结肠组织和结肠内容物进行病理组织学观察和肠道菌群多样性分析。结果与NC组比,IBS模型兔均出现腹围指数和粪便含水量增加,结肠转运时间缩短,但结肠组织未见病理性改变;同时IBS模型兔Shannon指数和Chao1指数均显著下降(P<0.05)。根据OTU分类分析的结果,厚壁菌门和拟杆菌门为兔肠道菌群的绝对优势菌群。与NC组比较,WHBE兔IBS模型组厚壁菌门、疣微菌门、绿弯菌门、Akk菌属、链球菌属均明显下降(P<0.05,P<0.01),拟杆菌门和rc4-4菌属丰度显著上升(P<0.05,P<0.01);而JW兔IBS模型组优杆菌属和罕见小球菌属均显著上升(P<0.05),乳酸杆菌属、粪杆菌属、韦荣球菌属和链球菌属均显著下降(P<0.05)。与JW兔NC组比,WHBE兔NC组厚壁菌门、Odoribacter菌属、韦荣球菌属、链球菌属、颤螺旋菌属、Pseudoflavonifractor菌属较低(P<0.05,P<0.01),拟杆菌门、疣微菌门、优杆菌属、粪杆菌属、Akk菌属较高(P<0.05,P<0.01)。与JW兔IBS模型组比,WHBE兔IBS模型rc4-4菌属、粪杆菌属、梭菌属的丰度较高(P<0.05,P<0.01),而厚壁菌门、多尔氏菌属、粪球菌属和罕见小球菌属的丰度则较低(P<0.05,P<0.01)。结论 IBS模型兔存在肠道菌群失调,导致菌群多样性降低;WHBE兔和JW兔IBS模型肠道菌群变化均具有其自身的特点,且具有明显的差异性。

土茯苓总黄酮抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化研究

[目的]研究土茯苓总黄酮(smilax glabra flavonoids,SGF)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾功能的影响及相关机制。[方法]将60只雄性SD大鼠分出对照组10只,剩余大鼠建立肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)模型,将造模后大鼠依据体质量分为模型组、SGF低剂量组15mg/(kg·d)、SGF中剂量组30mg/(kg·d)、SGF高剂量组60mg/(kg·d)及厄贝沙坦组10mg/(kg·d),每组10只。各组大鼠均连续灌胃给予对应药物2周。全自动生化仪检测大鼠血清白蛋白(albumin,ALB)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creatinine,Scr)的含量,以及24h尿蛋白(urine total protein,U-TP)、尿尿素氮(urine urea nitrogen,UUN)、尿肌酐(creatinine,CREA)的含量,并计算肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr);HE染色观察肾组织病理变化;Masson染色观察SGF对肾组织纤维化的影响;免疫组化染色观察肾脏转化生长因子-β1(transformation growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平的变化。[结果](1)模型组大鼠血清BUN、Scr含量显著高于对照组(P<0.01),ALB含量显著低于对照组(P<0.01),U-TP、UUN、CREA含量也显著高于对照组(P<0.01),Ccr低于对照组(P<0.05);SGF各剂量组、厄贝沙坦组血清BUN、Scr含量均显著低于模型组(P<0.05或0.01),U-TP、UUN、CREA含量显著低于模型组(均P<0.05)。(2)病理学结果显示模型组大鼠肾实质萎缩,肾小管基底膜不规则改变或完整性丧失,肾间质大量炎症细胞浸润和成纤维细胞聚集,肾间质重度纤维化,免疫组化结果显示TGF-β1蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);SGF各剂量组、厄贝沙坦组肾脏在肾实质萎缩、肾小管结构毁损、炎细胞浸润、纤维组织增生等方面较模型组均有不同程度地改善,TGF-β1蛋白表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。[结论]SGF能够改善UUO大鼠的肾功能,并能够减轻RIF,可能与下调TGF-β1蛋白的表达有关。

基于浏览器/服务器模式架构的高校动物实验管理系统开发与应用

高校实验动物中心每日会产生大量的业务数据,数据处理的效率直接体现了机构的管理水平和服务能力。本文简要介绍了浙江中医药大学动物实验研究中心动物实验管理系统的整体需求、总体架构、主要模块的操作流程和功能。系统开发结合了高校实验动物管理实际业务流程,实现了实验动物福利伦理审批、实验动物订购、动物实验申请、饲养管理以及费用结算等工作的计算机信息化管理。

慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α及β-淀粉样蛋白1-42的表达研究

目的研究慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α等免疫炎性因子和β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)表达水平的变化及两者的相关性。方法将16只SD大鼠采用随机数字表法分为模型组和假手术组,各8只。模型组大鼠永久结扎双侧颈总动脉,建立慢性脑缺血大鼠模型。假手术组大鼠切开颈部皮肤后分离双侧颈总动脉,但不结扎。使用激光多普勒血流仪检测两组大鼠手术前、手术后(30min内)海马CA1区局部脑血流(r CBF)。术后4周处死大鼠,取出大鼠脑组织并分离海马,采用ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α和Aβ1-42表达水平。比较两组大鼠手术前后r CBF与脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Aβ1-42表达水平;分析大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平与Aβ1-42表达水平的相关性。结果手术前两组大鼠r CBF比较差异无统计学意义(P>0.05),手术后模型组大鼠r CBF明显低于假手术组(P<0.05)。模型组大鼠手术后r CBF明显低于手术前(P<0.05),而假手术组大鼠手术前后r CBF比较无统计学差异(P>0.05)。模型组大鼠脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6等免疫炎性因子表达水平均高于假手术组(均P<0.05),Aβ1-42表达水平亦高于假手术组(均P<0.05)。大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α及Aβ1-42表达水平均呈正相关(r=0.7755、0.5920、0.5536,均P<0.05)。结论慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α等免疫炎性因子与Aβ1-42表达水平明显升高,免疫炎性反应或与慢性脑缺血所导致的脑组织Aβ1-42异常沉积有关。

Pkd1^(f/f):Cre小鼠在自然状态下的发病情况研究

目的对Pkd1^(f/f):Cre转基因小鼠的发病特点和病理特征进行研究,为临床研究提供依据。方法选用自然状态下发病的Pkd1^(f/f):Cre转基因小鼠,通过对肝、肾组织进行解剖,观察超声多普勒下的肝形态,测定脏器系数,HE染色观察肝肾组织的病理情况,免疫组化分析肝肾PCNA、E-cadherin蛋白的表达变化。结果与Pkd1^(f/f)组相比,Pkd1^(f/f):Cre组的肝重量及系数极显著升高(P<0.01),体重在Pkd1^(f/f):Cre与Pkd1^(f/f)组间比较无差异;肾重量及系数在Pkd1^(f/f):Cre与Pkd1^(f/f)组间比较无显著性差异;其中与肝功能相关的因子ALT和AST的水平,Pkd1^(f/f):Cre组显著高于Pkd1^(f/f)组(P<0.01);而肾功能相关的因子BUN与CREA、UA水平在Pkd1^(f/f):Cre组与Pkd1^(f/f)组间无差异(P>0.05)。结论Pkd1^(f/f):Cre小鼠会发生肝囊肿,损害肝功能,但肾未出现囊肿的情况。

超声、高分辨率磁共振成像技术在诊断评估兔颈动脉粥样硬化中的应用研究

目的利用超声、高分辨率磁共振成像(HRMRI)技术,分析评价兔颈动脉粥样硬化(AS)模型的病变程度,为颈动脉AS动物模型的诊断评估提供技术方法。方法取雄性日本大耳白兔18只,随机分为正常对照(NC)组和模型(Model)组,每组9只,模型组饲喂高胆固醇饲料2周后行右侧颈动脉球囊损伤术,术后继续高脂饲喂6周,建立兔颈动脉AS模型,NC组饲喂常规饲料至8周。造模4周、8周时检测血浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)并超声检查颈动脉,造模8周时行颈动脉高分辨率磁共振成像(HRMRI)检查,行安死术后取右侧颈总动脉行HE染色和油红"O"染色,评估颈动脉AS病变。结果与NC组比,模型组兔造模4周时血浆TC显著升高(P<0.05),8周时体重、血浆TC、TG均显著增加(P<0.05,P<0.01);超声结果显示,模型组兔的右侧颈总动脉内中膜厚度(IMT)、狭窄率、收缩期最高血流速度、血管阻力指数均随病变程度加深而显著增加(P<0.05,P<0.01),并可见狭窄和斑块形成;HRMRI结果亦显示,MIP成像可见右侧颈总动脉明显狭窄,3D-TOF成像可见模型组兔有明显的AS斑块且狭窄率显著增加(P<0.01);组织病理学证实模型组兔颈总动脉有明显的AS斑块形成,IMT、狭窄率、脂质含量均比NC组显著增加(P<0.01);相关性分析结果表明超声、HRMRI与HE染色的定量分析结果显著相关(P<0.01)。结论超声和HRMRI技术均能无创检测诊断兔颈动脉粥样硬化模型的病变,但HRMRI更能清晰、直观地判断血管狭窄及AS斑块严重程度。

秀珍菇粉对H22荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用研究

目的本试验旨在研究秀珍菇抗肿瘤作用及其抑瘤机制。方法选用ICR雄性小鼠60只,取10只作为空白组,剩余50只小鼠通过腋部皮下接种H22小鼠腹水构建荷瘤小鼠模型,造模后随机分为模型组、阳性药(CTX)组、秀珍菇低、中、高剂量组,每组10只。模型组小鼠灌服生理盐水,阳性药组小鼠按20 mg/kg体重隔天腹腔注射注射环磷酰胺(CTX)生理盐水溶液,秀珍菇低、中、高剂量组小鼠分别按750、1500、3000 mg/kg体重每天剂量灌服秀珍菇生理盐水混悬液。给药10 d后,测定各组小鼠平均瘤重,肿瘤抑制率;测定免疫器官脏器指数、血清免疫球蛋白和细胞因子含量;测定肝、肾抗氧化指标;观察肿瘤和脾组织HE染色病理切片。结果(1)CTX及秀珍菇低、中、高剂量组小鼠的平均瘤重均极显著低于模型组(P<0.01),四组小鼠肿瘤抑制率分别为55.18%,29.06%、47.47%和48.80%。(2)与空白组比较,模型组小鼠脾指数、血清IgA和TNF-α含量及肝MDA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),血清IL-6含量有上升趋势(P>0.05),而血清IL-2含量、肝CAT和GSH-Px活性及肾SOD、GSH-Px和CAT活性显著降低(P<0.05,P<0.01);同时,CTX组小鼠胸腺指数显著低于空白组(P<0.05)。(3)秀珍菇对荷瘤小鼠免疫和抗氧化功能异常改变具有逆转作用:与模型组比较,秀珍菇各剂量组小鼠血清IgA和TNF-α含量及高剂量组小鼠IL-6水平显著降低(P<0.05,P<0.01),低剂量组小鼠血清IL-2水平显著升高(P<0.01);秀珍菇处理还显著提高了各剂量组荷瘤小鼠肝CAT活性及肾SOD和CAT活性(P<0.05,P<0.01),显著升高中、高剂量组肝GSH-Px活性和低、中剂量组肾GSH-Px活性(P<0.05,P<0.01),并显著降低中剂量组的肝MDA含量(P<0.05)。(4)与CTX组比较,秀珍菇高剂量组小鼠脾指数显著提高(P<0.05),而血清IL-6水平显著降低(P<0.05)。(5)肿瘤组织病理切片显示CTX组和秀珍菇各剂量组的肿瘤坏死面积明显增加。结论秀珍菇可抑制H22实体移植瘤生长,其机制与其具有较强的免疫调节和抗氧化作用有关。

内脏脂肪组织沉默信息调节因子1在高脂诱导西藏小型猪胰岛素抵抗中的表达研究

目的:探讨内脏脂肪组织沉默信息调节因子1(Sirt1)在高脂诱导西藏小型猪肥胖和胰岛素抵抗中的表达。方法:12只雄性西藏小型猪,随机分为正常对照组(NC)和高脂组(HFC),每组6只。造模16周后,测量空腹体重、体质量指数(BMI),并取前腔静脉血,测量总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),计算动脉硬化指数(AI);同时,进行静脉糖耐量实验。在动物进行安乐死后,检测内脏脂肪率,并取内脏脂肪组织进行病理组织学观察和脂肪细胞直径大小分析,并采用RT-PCR法观察脂肪组织中Sirt1、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、脂肪分解相关基因激素敏感性脂肪酶(HSL)及脂肪合成相关基因脂肪酸合成酶(FASN)的mRNA水平变化。结果:与NC组比较,HFC组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、AI和内脏脂肪率均显著升高(P<0.05,P<0.01);同时,糖耐量曲线明显延迟并且血糖和胰岛素曲线下面积均显著升高(P<0.05);HE病理观察和定量分析显示,脂肪细胞肥大且平均细胞直径明显增加(P<0.01);另外,脂肪组织中Sirt1、PGC-1α、GLUT4、HSL mRNA水平均有不同程度的降低,其中Sirt1和HSL mRNA表达显著降低(P<0.05),FOXO1、IGF-1、PPAR-γ和FASN mRNA表达则显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:高脂饮食诱导西藏小型猪能形成肥胖模型,并具有脂质紊乱和胰岛素抵抗等表型特征;而Sirt1在内脏脂肪沉积和胰岛素敏感性降低中起着关键作用。

西藏小型猪颈动脉粥样硬化模型的建立及评价研究

目的采用高脂饮食联合左侧颈动脉球囊损伤术建立西藏小型猪颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)模型,观察西藏小型猪CAS模型的血液生化、影像学及病理学特点。方法10只雄性西藏小型猪随机分为两组,正常组饲喂正常饲料,模型组持续饲喂高脂饲料且2周后进行左侧颈动脉球囊损伤术,造模周期为12周。分别在高脂饲喂前(-2周)、球囊损伤(0周)及术后2周、6周、10周检测其体重和血液生化等指标,并在术后10周进行超声、血流多普勒、血管造影等影像学观测。动物安乐死后取左侧颈动脉进行HE、Masson和油红“O”染色,观察其形态、炎症、纤维化和脂质沉积等情况,分析西藏小型猪的病变特点。结果西藏小型猪CAS模型的多项血液生化指标与临床相似;影像学结果显示CAS模型左颈动脉血管显著狭窄且阻力增大,导致血流速度减小;病理观察有明显炎症细胞浸润、胶原纤维增生、血管壁增厚和脂质沉积等,与临床表现近似。结论西藏小型猪CAS模型与临床特点相似,模型易感且稳定,是适用于研究CAS的良好的理想模型。

肠道菌群与肠屏障互作影响动脉粥样硬化形成的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症代谢性疾病,与高血压、高血脂、高血糖、高尿酸等危险因素联系密切。肠道屏障功能对维持人体肠道功能稳态发挥着重要调节作用,肠道菌群是肠道屏障的重要组成部分,肠道菌群紊乱会导致肠道屏障受损、肠道通透性增加,同时菌群相关产物如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFAs)、胆汁酸(bile acids,BAs)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)等发生改变,可引发机体炎症反应、氧化应激等不良反应,影响AS的发生发展。本文就肠道菌群与肠屏障互作对于AS的形成及其危险因素的影响作一综述,为研究和防治AS提供参考。

1470 nm半导体激光对离体动物组织的汽化消融、切割和凝固作用

目的观察1470 nm波长的半导体激光对离体动物组织的汽化切割、凝固和热损伤情况,以探讨其应用于前列腺增生治疗的可行性。方法实验组和同类对照组分别使用HANS-D1型和ML-DD01FI型1470 nm半导体激光治疗仪。取新鲜离体猪膀胱组织,光纤距离组织0.5 cm和1 cm的条件下工作5 s,观察60、90、120、150、160 W功率的半导体激光对组织的损伤影响;取离体犬前列腺和猪肾组织分别进行汽化消融和汽化切割,观察60、90、120、150、160 W功率的半导体激光对组织的汽化和热损伤作用;另在凝结模式下照射离体猪肾组织5、10、15 s后,观察30、40、50 W功率的半导体激光对组织的凝固作用。结果光纤照射距离组织1 cm时,1470 nm半导体激光对邻近正常膀胱组织不会产生意外损伤;但在距离0.5 cm时,120、150、160 W的1470 nm半导体激光对膀胱组织有轻微的损伤。另外,随着输出功率的增大,60~160 W半导体激光对犬前列腺组织的汽化消融效率逐渐提高,且汽化量和消耗总能量之间呈良好的线性相关(P<0.001)。病理组织学HE染色结果显示实验组的凝固层厚度为292.20~309.98μm,汽化层深度为1.49~4.52 mm;同类对照组的凝固层厚度为289.91~303.53μm,汽化层深度为1.88~4.43 mm,两组间比较均未见明显差异(P>0.05)。同时,汽化切割截面积为1 cm2的离体猪肾组织时,60~160 W的1470 nm半导体激光对肾组织的汽化切割效率随输出功率的增大而提高(P<0.05),其中实验组的凝固层厚度为496.04~514.47μm,同类对照组的凝固层厚度为489.39~518.53μm。此外,凝结模式下30、40、50 W的半导体激光对离体猪肾组织照射5、10、15 s时,随着激光输出功率的增加,凝固瘢直径、凹槽深度和凝固效率均逐渐增大(P<0.05);其中实验组和同类对照组的凝固层厚度分别为399.10~449.98μm和392.97~447.65μm,汽化层深度分别为3.05~7.09 mm和2.70~7.14 mm,两组间比较均未见明显差异(P>0.05)。结论1470 nm半导体激光对离体动物组织具有良好的汽化消融、切割和凝固作用,其效果与输出能量之间具有良好的线性相关。

医用激光设备动物试验的决策与审评要求探讨

医用激光设备是向人体靶组织输出能量的电气设备,动物试验是激光设备开展非临床/临床评价的重要手段之一,也可作为该类设备在临床试验前提供安全性和有效性的证据。本文通过参考现有医疗器械动物试验相关的法规、标准、指南,分析医用激光设备的作用机理;结合常见激光治疗设备的审评经验,概述了激光治疗设备决策开展动物试验研究的考量因素及规范要求;并举例分析了开展动物试验的目的、方案设计要求和评价指标;为医用激光治疗设备的动物试验研究提供参考,也可供该类医疗器械相关的技术审评人员及注册人员参考。

一种新型高脂血症易感大鼠的血脂水平与心血管并发症

目的观察一种新型高脂血症易感WSHc大鼠经高脂饲料诱导后血脂的动态变化和心血管并发症病理特点,为WSHc大鼠的应用提供参考。方法取7～8周龄雌性WSHc大鼠20只和Wistar大鼠10只,进行高脂饲喂,另取同周龄同性别的WSHc大鼠和Wistar大鼠各10只饲喂普通饲料,分别作为正常对照。观察高脂饲喂2、4、8、12、16周时的血脂动态变化,饲喂16周后采用心动超声检测大鼠心功能及左心结构,病理组织学观察心脏及主动脉病变。结果与正常对照组比,高脂饲喂2周后WSHc大鼠与Wistar大鼠血清总胆固醇(TC)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)均显著升高;高脂饲喂的WSHc大鼠TC、LDL-c水平为:(6.34±2.12)mmol/L、(2.56±0.94)mmol/L,而高脂饲喂的Wistar大鼠TC、LDL-c水平仅为(2.93±0.23)mmol/L,(0.63±0.12)mmol/L;在高脂饲喂期间,WSHc大鼠TC始终维持在高水平状态。饲喂16周后,WSHc大鼠心脏射血分数升高,左心室室壁增厚,并出现心肌纤维化,心肌细胞凋亡程度增高;主动脉内膜增厚,弹力纤维排列紊乱,形成早期动脉粥样硬化病变。而Wistar大鼠经高脂饲料诱导后,心功能及心血管病变不明显。结论 WSHc大鼠对外源性胆固醇敏感,高脂饲喂后易发高脂血症及心血管疾病,且TC、LDL-c水平与临床高脂血症更接近,相较于普通大鼠,更适用于高脂血症及相关心血管并发症的实验研究。

miR-21对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响

目的:观察miR-21在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮间质转分化(EMT)中的作用,并探讨miR-21参与调控HK-2细胞EMT的可能靶点。方法:体外培养的HK-2细胞分为6组:正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)模型组、miR-21 mimic阴性组、miR-21 mimic组、miR-21 inhibitor阴性组和miR-21 inhibitor组。细胞经4 ng/ml TGF-β1处理建立EMT模型,检测miR-21和EMT相关指标的表达变化,利用基因转染技术,将miR-21 mimic质粒或miR-21 inhibitor质粒转染经TGF-β1处理的HK-2细胞,使细胞过表达或抑制表达miR-21,在此基础上观察细胞EMT相关指标的变化以及磷酸酯酶(PTEN)基因的影响。结果:(1)与正常组相比,模型组的miR-21含量显著升高(P<0.05),上皮表型标志物E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),间质表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白水平也显著升高(P<0.05,P<0.01);(2)转染miR-21 mimic后,与miR-21 mimic阴性对照组相比,miR-21含量显著升高(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01);转染miR-21 inhibitor后,与miR-21 inhibitor阴性对照组相比,miR-21含量显著降低(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白含量显著升高(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA、蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:miR-21在TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT发生中具有重要作用,并且可能通过靶基因PTEN参与EMT相关分子的表达调控。

生理遥测和全体积描记法联用观测清醒大鼠昼夜节律变化及其在多索茶碱安全药理学中的应用

目的应用植入式生理信号遥测系统和全身体积描记法肺功能检测技术系统,观察清醒大鼠的昼夜节律变化,并用多索茶碱进行性能验证,为今后该技术系统用于药物安全药理学评价提供依据。方法 SD大鼠8只,雌雄各半,采用外科术将植入子植入大鼠腹腔建立遥测系统,并结合肺功能检测技术,在术后14 d观察清醒大鼠24 h的生理参数及昼夜节律的变化,包括心率(HR)、血压、心电图Q波到血压的舒张点的时间差(QA间期)、呼吸、活动、体温和肺功能等指标,分为正常对照组、多索茶碱40和80 mg/kg组(雾化吸入),观察给药后上述参数的变化情况。结果术后14 d清醒大鼠的生理指标具有明显的昼夜节律变化。与正常对照组比较,多索茶碱40mg/kg组大鼠HR、潮气量(TV)、每分钟通气量(MV)、50%呼气流量(EF50)、吸气流量峰值(PIF)和呼吸流量峰值(PEF)均明显增加(P<0.01),呼吸频率、QA间期和增强呼气间歇(PENH)均明显降低(P<0.05,P<0.01),但对血压、活动和体温变化不明显;多索茶碱80 mg/kg组大鼠HR、血压、TV、MV、EF50、PIF和PEF均明显增加(P<0.01),呼吸频率、QA间期和PENH均明显降低(P<0.01),但对活动和体温变化不明显。结论本技术系统对大鼠的生理昼夜节律无明显影响,并可灵敏监测到心血管呼吸系统的相关变化,可用于清醒大鼠心血管呼吸系统安全药理学研究。

小型猪慢性心肌缺血模型的建立与无创遥测技术的应用

为建立小型猪慢性心肌缺血模型和应用无创遥测技术的评价方法,本研究采用维生素D3和异丙肾上腺素复合高脂饮食的方法建立了小型猪慢性心肌缺血模型;并利用无创遥测技术对小型猪慢性心肌缺血模型的症状进行检测与评价,同时对五指山小型猪、巴马小型猪和西藏小型猪的运输应激和高脂诱导发生动脉粥样硬化(AS)的危险因素进行评估。建立了巴马小型猪慢性心肌缺血模型与评价技术规范,明确了无创遥测技术可用于心肌缺血模型的症状检测和评价,界定了小型猪运输应激后需4周以上的适应恢复期。并发现了高脂环境下五指山小型猪、巴马小型猪和西藏小型猪发生高血脂、高血压、高胰岛素血症等AS危险因素的不同特征,这为小型猪在心血管疾病研究中的选择和应用提供参考。

雄激素缺乏对高脂高胆固醇饲喂小型猪肝mRNA可变剪接的影响

目的通过分析高脂高胆固醇饲喂的不去势(SHAM)、去势(CAS)和去势+睾酮处理(CAS+T)小型猪肝表达谱,探讨雄激素缺乏对高脂高胆固醇饲喂小型猪肝mRNA可变剪接(alternative splicing,AS)的影响。方法利用转录组测序(RNA-Seq)技术对SHAM、CAS和CAS+T小型猪肝表达谱进行测序,使用Top Hat软件筛选三组小型猪肝中差异AS基因,并对三组样本中共有的差异AS基因进行基因注释和代谢通路富集分析。结果(1)去势和睾酮处理能够引起高脂高胆固醇饲喂小型猪肝mRNA可变剪接发生变化;(2)SHAM vs.CAS和CAS+T vs.CAS之间有113个共有差异AS基因,其中包括AGPAT6、NR1H4、PPARD和GK等糖脂代谢有关基因;(3)GO和KEGG分析结果表明,上述113个差异AS基因主要参与脂肪酸代谢、甘油酯代谢、葡萄糖反应以及脂肪细胞因子信号等生物学过程和通路。结论雄激素缺乏可导致高脂高胆固醇饲喂小型猪肝mRNA可变剪接发生改变,并且可能通过调控肝糖脂代谢进而影响高脂诱导的脂肪肝发病。