miR-3175/SIX5轴调节神经胶质瘤细胞的增殖和迁移

[目的]探讨miR-3175在胶质瘤细胞中的表达,以及对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。[方法]采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测胶质瘤细胞与人正常胶质细胞中miR-3175的表达水平。向胶质瘤细胞株中转染miR-3175 mimics和inhibitors后,采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测各组胶质瘤细胞增殖能力的变化,以Transwell实验对细胞迁移能力进行评估,流式细胞术检测细胞凋亡。使用miRTarBase和TargetScan预测软件对miR-3175的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统、免疫印迹法和Real-time qPCR分析miR-3175和sineoculis同源异型盒同源物5(sineoculis homeobox homologue 5,SIX5)的相互作用。通过生物信息学与免疫印迹法分析SIX5在胶质瘤中的表达;将pCDNA3.4-SIX5、pCDNA3.4-SIX5+miR-3175 mimics和miR-3175mimics分别转染到胶质瘤细胞,以MTT法、Transwell实验和流式细胞术检测miR-3175及其靶基因SIX5对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。[结果] Real-time qPCR结果表明,胶质瘤细胞中miR-3175基因表达水平明显低于人正常胶质细胞组,呈低表达(P<0.01);细胞体外转染实验表明,上调miR-3175能够显著抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),能够通过将胶质瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导其凋亡(P<0.05,P<0.01);生物信息学软件预测结果显示SIX5可能是miR-3175的潜在靶基因,免疫印迹法、荧光素酶报告基因和Real-time qPCR结果进一步证明SIX5与miR-3175的表达呈负相关(P<0.01)。细胞体外转染实验结果发现,转染pCDNA3.4-SIX5后,胶质瘤细胞的增殖和迁移能力增加(P<0.05,P<0.01),凋亡率下降(P<0.05,P<0.01),而且可以削弱miR-3175对胶质瘤恶性生物学行为的抑制作用。[结论] miR-3175在胶质瘤细胞中显著低表达,并抑制胶质瘤的恶性生物学行为,可能的机制是抑制促癌基因SIX5的表达,从而降低胶质瘤的增殖和迁移能力,提示其具有成为胶质瘤诊疗新靶点的潜力。