温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

目的利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响。方法正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1·2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定。结果肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状。应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍。结论温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用。

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠脾T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的探讨龟鹿二仙胶对化疗小鼠的抗凋亡作用及作用机理。方法将荷瘤昆明种小鼠72只随机分为环磷酰胺(CTX)加龟鹿二仙胶高、中、低3个剂量组,CTX组,单纯中药组,生理盐水组6组。给药9天后处死小鼠取脾组织,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡;RT-PCR法检测bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达。结果CTX组荧光素标记的膜联蛋白阳性(FITC+AnnexinV)/碘化丙啶(PI)染色阴性比例(FITC+/PI-)T细胞较生理盐水组增高,差异有统计学意义(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组FITC+/PI-T细胞比例较CTX组明显降低(P<0·05)。CTX组bcl-2 mRNA表达量较生理盐水组减少(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组其表达量较CTX组明显升高(P<0·05)。Caspase-3 mRNA表达量CTX组升高(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组表达量较CTX组明显减少。结论龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠淋巴细胞凋亡。上调bcl-2 mRNA表达、下调Caspase-3 mRNA表达可能是其作用机理之一。

丹参酮对爪蟾卵母细胞外源清道夫受体-AⅠ基因表达的影响

目的从基因调控水平探讨丹参酮对清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)基因表达的影响以及抗动脉粥样硬化的作用机制。方法将人SR-AⅠ基因构建在其调控元件SRad-SRap的下游,并经显微核注射导入爪蟾卵母细胞,建立SRad-SRap元件调控的SR- AⅠ表达系统；氧化低密度脂蛋白(OXLDL)刺激培养牛主动脉平滑肌细胞,制备平滑肌细胞条件培养液(SCM)；分别用SCM和含有丹参酮的SCM培养注射后的卵母细胞,用荧光标记配体法和ABC-Elisa法定性、定量检测卵母细胞膜上SR-AⅠ的表达。结果丹参酮可以抑制卵母细胞膜SR-AⅠ表达,且有量效关系。结论OXLDL可通过诱导平滑肌细胞产生相关因子,经SRad-SRap调控途径的作用上调SR-AⅠ的表达；丹参酮可以阻止SR-AⅠ的过量表达,可能是治疗As的作用机制之一。

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠骨髓CD_(34)^+细胞凋亡的研究

目的:探讨滋阴益气补阳法(龟鹿二仙胶)对化疗小鼠骨髓CD34+造血干/祖细胞凋亡的影响。方法:小鼠采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)造模,分组处理,9天后处死。流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡;RT-PCR法检测其Cyt-C、bcl-2mRNA的表达。结果:CTX组FITC+/PI-细胞比例较盐水组明显升高(P<0.05);而高、中、低3个剂量组及单纯中药组FITC+/PI-细胞比例明显降低,与单纯CTX组比较,差异有显著性(P<0.01)。单纯CTX组Cyt-CmRNA表达较盐水组升高(P<0.05),而中、低2个剂量组及单纯中药组表达较单纯CTX组降低(P<0.05);单纯CTX组bcl-2mRNA表达较盐水组减少;而高、中、低3个剂量组及单纯中药组bcl-2mRNA表达较单纯CTX组明显升高,差异有显著性(P<0.01)。结论:滋阴益气补阳法组方的龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠骨髓CD34+造血干/祖细胞凋亡,上调bcl-2mRNA表达可能是其机理之一。

肝郁气滞型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术进行肝郁气滞型乳腺增生组织的蛋白质组研究。方法:提取正常乳腺组织及肝郁气滞型乳腺增生组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCydcr6.5软件进行分析,筛选表达量有差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果:在肝郁气滞型乳腺增生组织中,有8个蛋白质表达水平具显著变化。其中S-腺苷谷胱甘肽水解酶、蛋白体5、超氧化物岐化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、过氧化物酶5、肽酰脯氨酰顺反式异构酶表达量增加,而三联组氨酸核酸结合蛋白1表达量显著下降。结论:8种差异蛋白质可能与肝郁气滞型乳腺增生疾病的发生与发展有关。

国内无菌动物无菌检查的现状与分析

无菌动物已应用到医学和生物学研究的各个领域。本文简要介绍了国内无菌动物无菌检查方法的现状,并结合现行国内实验动物微生物检测标准与一些国家药典的无菌检查方法,阐述现行方法的局限性及无菌动物无菌检查中的影响因素。提出目前我国无菌动物的无菌检查技术在取样、培养基的选择与灵敏度、环境与人员控制,以及结果判断等方面有待于进一步完善与改进。

硫唑嘌呤或骁悉治疗的肾移植患者术后早期并发症比较

目的:比较硫唑嘌呤(azathioprine,Aza)或霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)联合环孢素+激素两种免疫抑制方案的肾移植患者,在术后并发症方面的差异,探讨较理想的免疫抑制方案。方法:收集两组肾移植患者249例:Aza组(即应用Aza+CsA+激素)、MMF组(MMF+CsA+激素),统计两组患者在术后1年内各种并发症(包括排斥反应、各种感染、肝损害、白细胞减少等)的发生。结果:Aza组与MMF组术后1年急性排斥反应的发生率差异显著;两组总的感染率、肺部感染率相近,但发生急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及肺部感染病死率后者明显高于前者。在肝损害、白细胞减少、糖尿病等方面,两组也无统计学差异。结论:MMF组在减少急性排异方面优于Aza组,但增加重症肺部感染机会,肺部感染的病死率升高,且费用贵,故临床上应根据具体情况选择。

桂枝茯苓汤抗小鼠移植性肿瘤的实验研究

目的:研究桂枝茯苓汤体内抗移植性肿瘤的作用及其对机体的免疫调节作用,为桂枝茯苓汤的临床应用提供理论依据。方法:桂枝茯苓汤灌饲接种过H22的荷瘤小鼠,并通过测定其抑瘤率、胸腺指数、脾指数及碳廓清指数(K值)和吞噬指数(a值)来进一步探讨其抗瘤活性和对机体的免疫调节作用。结果:桂枝茯苓汤具有抗移植性肿瘤H22的作用,抑瘤率达33.26%;同时对机体也有明显的免疫促进作用。结论:桂枝茯苓汤具有抗移植肿瘤的作用,并可提高荷瘤小鼠的机体免疫力。

参麦有效部位对血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨参麦中提取的总皂苷、总多糖对血管内皮细胞增殖和迁移的影响.方法：用MTT法检测不同浓度的总皂苷、总多糖及总皂苷＋总多糖对ECV-304、胃癌SGC-7901细胞增殖及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖的影响;用琼脂糖刮除法检测它们对血管内皮细胞迁移的影响.结果：当参麦总多糖浓度为0.18～2.44mg/mL时,对ECV-304、胃癌SGC-7901增殖及SGC-7901诱导ECV-304增殖均无影响;当参麦总皂苷浓度为0.05～0.8mg/mL时,对胃癌SGC-7901增殖无影响,而对ECV-304及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖有抑制作用,抑制率为13.16%～62.77%.参麦总多糖对ECV-304迁移没有影响,参麦总皂苷对ECV-304迁移有明显抑制作用,抑制率为42%～80%.总皂苷＋总多糖抑制ECV-304增殖和迁移作用与参麦总皂苷相比差异无显著性.结论：参麦中提取的总皂苷对血管内皮细胞和胃癌细胞条件培养液诱导的血管内皮细胞增殖具有抑制作用,并能抑制血管内皮细胞的迁移,是参麦抗血管生成的有效部位.

脱甲氧基姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的:从脱甲氧基姜黄素对内皮细胞增殖和迁移的影响角度,探讨脱甲氧基姜黄素抗血管生成的作用机制。方法:用MTT法检测脱甲氧基姜黄素对牛主动脉内皮细胞及人胃腺癌细胞系SGC-7901细胞增殖的影响;用琼脂糖刮除法检测脱甲氧基姜黄素对牛内皮细胞迁移的影响。结果:脱甲氧基姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖,对非内皮细胞与肿瘤细胞也有抑制作用,但与前者相比,差异有统计学意义。脱甲氧基姜黄素能显著抑制牛内皮细胞迁移,在实验浓度范围内,其抑制作用呈明显量效关系。结论:脱甲氧基姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂。抑制内皮细胞增殖和迁移可能是脱甲氧基姜黄素抑制血管生成的机制之一。

姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的:从姜黄素对内皮细胞增殖和迁移的影响角度,探讨姜黄素抗血管生成的作用机理。方法:用MTT法检测姜黄素对牛主动脉内皮细胞及人胃腺癌细胞系SGC-790l细胞增殖的影响;用琼脂糖刮除法检测姜黄素对牛内皮细胞迁移的影响。结果:姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖,对非内皮细胞包括肿瘤细胞也有抑制作用,但同内皮细胞相比,差异显著,说明姜黄素能特异性抑制内皮细胞增殖;姜黄素能显著抑制牛内皮细胞迁移,在实验浓度范围内,其抑制作用呈明显量效关系。结论:姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂:抑制内皮细胞增殖和迁移可能是姜黄素抑制血管生成的机理之一。

彩色多普勒超声联合核素动态显像在肾移植术后的应用

目的:探讨彩色多普勒超声、核素动态显像在肾移植术后早期并发症诊断与鉴别诊断中的应用价值。方法:收集肾移植术后肾功能恢复不佳且行彩色多普勒超声和核素肾动态显像检查的患者59例,分为3组:急性排斥反应组18例,加速性排斥反应组12例、急性肾小管坏死组29例,同时收集术后肾功能恢复良好的正常组20例,分别统计上述4组彩色多普勒的阻力指数(RI)、移植肾体积、血流分布,分析彩色多普勒在鉴别诊断中的价值。计算核素肾动态显像的指标:灌注相内1min时腹主动脉放射性计数与移植肾放射性计数比值(K1min/A1min),功能相20min时膀胱/移植肾放射性计数比值(B/K),分析其诊断价值。结果:彩色多普勒检查指标中,当移植肾体积增大、血流减少、阻力指数升高均提示移植肾病变,以阻力指数较敏感,但特异性不高。根据核素肾动态显像指标的计算数据,K1min/A1min比值联合B/K比值在诊断排斥反应与肾小管坏死方面准确性较高,分别达到96.7%和89.7%;K1min/A1min<4和B/K<1提示排斥反应,K1min/A1min≥4和B/K<1提示肾小管坏死。结论:彩色多普勒联合核素动态显像对于肾移植术后排异、急性肾小管坏死、移植肾功能延迟恢复的诊断与鉴别诊断具有很好的临床价值,二者联合应用,互补长短。