益气补肾调脂方通过调控CDKN1A改善非酒精性脂肪性肝炎的研究

目的网络药理学筛选益气补肾调脂方(Yiqi-Bushen-Tiaozhi formula,YBTF)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的机制;体内实验完成验证。方法TCMSP数据库、HPLC-MS明确YBTF成分、靶点;GSE89632数据集,筛选NASH与正常组差异基因;GeneCards、Disgenet数据库筛选疾病基因。交集为YBTF治疗NASH的靶基因。基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、疾病本体论(Disease Ontology,DO)富集分析,蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)、拓扑分析,明确治疗NASH关键基因。分子对接(molecular docking)预测活性成分、靶点能否结合,发挥疗效;油红O、HE染色检测肝脏脂肪变、炎症;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)检测肝细胞衰老;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR),蛋白质免疫印迹法验证靶基因mRNA、蛋白表达。结果YBTF可调控周期依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)改善细胞衰老,治疗NASH。结论网络药理学结合实验可为研究YBTF治疗NASH的机制提供新的思路。

非酒精性脂肪性肝病进展中肝组织细胞衰老相关基因P21、SIRT6和NF-κB mRNA表达

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)进展中肝组织细胞衰老相关基因P21、SIRT6和NF-κB表达的变化情况。方法采用高脂饮食建立NAFLD模型小鼠,分别在喂养第8、16、24周3个时间点,RealTime-PCR动态检测肝组织P21、SIRT6和NF-κB mRNA,研究肝组织细胞衰老相关基因P21、SIRT6和NF-κB表达的变化。结果RealTime-PCR结果显示,P21 mRNA表达水平在模型8周组与正常8周组差异无统计学意义[(1.38±0.70)比(1.10±0.51),P>0.05],而模型16周组和24周组则较正常组同期显著增高[(2.04±0.94)比(1.17±0.59),P<0.05;(1.83±0.64)比(1.04±0.31),P<0.05,P<0.01];SIRT6 mRNA表达水平在模型8周组较正常8周组明显增高[(1.82±0.50)比(1.14±0.67),P<0.05],而模型16周组较正常16周组有下降趋势,但差异无统计学意义[(0.88±0.43)比(1.27±1.03),P>0.05],模型24周组则较正常24周组明显下降[(0.56±0.18)比(1.14±0.65),P<0.05];NF-κB mRNA随造模时间(8周、16周、24周)增加而稍有增强,但与同期正常组相比差异均无统计学意义[(1.08±0.64)、(1.21±0.24)、(1.44±0.67)比(1.06±0.37)、(0.95±0.42)、(1.08±0.43),P均>0.05]。结论随NAFLD进展,肝细胞衰老现象逐渐增多,SIRT6在疾病进展中出现特征性的先升高后降低趋势,SIRT6基因在肝细胞衰老过程中起着重要作用。

血清趋化素Chemerin及相关炎性细胞因子在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的观察非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清趋化素Chemerin及相关炎性细胞因子CCL2、TNF-α的变化,探讨其在NAFLD发病中的作用。方法收集2018年4~6月在浙江中医药大学附属第一医院下沙院区接受体检,符合NAFLD临床诊断标准以及本研究纳入、排除标准的110例NAFLD患者,同时收集同期健康体检人群50例为对照组。采用液相芯片技术检测血清趋化素Chemerin、CCL2、TNF-α水平,分析血清趋化素Chemerin与BMI、血压、血糖、血脂和肝功能酶学等之间的关系。结果NAFLD组患者BMI、血糖、血压、TG、TC、LDL-C、ALT、AST、GGT、血清趋化素Chemerin、CCL2、TNF-α水平明显高于对照组(P<0.01),HDL-C水平显著低于对照组(P<0.01)。血清趋化素Chemerin与炎性细胞因子CCL2(R=0.490,P<0.01)、TNF-α(R=0.308,P<0.01)呈正相关。血清趋化素Chemerin与肝功能指标ALT(R=0.275,P<0.01)、AST(R=0.233,P<0.01)、GGT(R=0.359,P<0.01)呈正相关。血清趋化素Chemerin与MS相关标志物BMI(R=0.269,P<0.01)、TG(R=0.318,P<0.01)、SBP(R=0.310,P<0.01)、DBP(R=0.282,P<0.01)、血糖(R=0.242,P<0.05)呈正相关,与HDL-C(R=-0.335,P<0.01)呈负相关。结论血清趋化素Chemerin可能参与了NAFLD的炎性反应,与MS存在相关性。

抗早1号对DEHP联合BPA诱导的雌性性早熟大鼠的治疗作用及机制研究

目的观察抗早1号对邻苯二甲酸二酯(DEHP)联合双酚A(BPA)诱导的雌性大鼠性早熟模型的影响和作用机制。方法将雌性幼龄SD大鼠32只,按随机数字表法分为正常组、模型组及抗早1号低、高剂量组[5.04、10.08 mg/(g·d)],每组8只。除正常组外,其余组大鼠均于21日龄采用DEHP 400 mg/kg联合BPA 200 mg/kg双诱导建立性早熟模型。抗早1号低、高剂量组于28日龄给药干预,正常组、模型组予等剂量生理盐水灌胃,共干预7 d。染毒后的24 h开始,检查阴道开口情况,1次/d;末次给药后,对大鼠子宫和卵巢进行病理学观察,计算子宫、卵巢系数;采用酶联免疫吸附试验检测各组血清雌二醇(E2)和黄体生成素(LH)的含量;通过超高效液相色谱-质谱联用仪检测尿邻苯二甲酸酯(PAEs)代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)、邻苯二甲酸单乙基酮基己基酯(MEOHP)、邻苯二甲酸单乙基羟基己基酯(MEHHP)、邻苯二甲酸乙基羟基戊基酯(MECCP)、单邻苯二甲羟基己基酯(MCMHP)的含量。结果与正常组比较,性早熟模型组大鼠阴道开口时间显著提前[28.25±1.16)d比(33.38±1.30)d,P<0.01],子宫系数明显增加[(26.83±5.56)×10^(-4)比(18.21±3.87)×10^(-4),P<0.05],卵巢系数有升高趋势,但差异无统计学意义[(7.84±0.75)×10^(-4)比(6.76±1.25)×10^(-4),P>0.05]。与模型组比较,抗早1号低、高剂量组阴道开口时间显著延缓[(31.75±1.91)d、(32.25±1.49)d比(28.25±1.16)d,P均<0.01],高剂量组子宫、卵巢系数降低[子宫系数:(16.05±6.40)×10^(-4)比(26.83±5.56)×10^(-4),P<0.01;卵巢系数:(6.51±0.57)×10^(-4)比(7.84±0.75)×10^(-4),P<0.05]。抗早1号低、高剂量组血清E2水平降低[(68.67±9.21)ng/L、(58.20±6.67)ng/L比(85.80±14.08)ng/L,P<0.05或P<0.01],高剂量组血清LH水平降低[(8.09±2.48)mIU/mL比(11.05±2.15)mIU/mL,P<0.01]。抗早1号低、高剂量组尿PAEs代谢物水平明显下降[MEHP:(0.83±0.33)μg/mL、(1.16±0.86)μg/mL比(13.01±5.83)μg/mL;MEOHP:(125.55±28.19)μg/mL、(71.96±27.62)μg/mL比(466.26±129.03)μg/mL;MEHHP:(39.06±13.60)μg/mL、(27.71±14.67)μg/mL比(289.15±68.13)μg/mL;MECPP:(15.56±6.76)μg/mL、(6.51±4.31)μg/mL比(223.55±85.41)μg/mL;MCMHP:(2.73±1.30)μg/mL、(2.67±1.38)μg/mL比(99.26±28.05)μg/mL,P均<0.01]。结论环境内分泌干扰物DEHP联合BPA可成功诱导建立雌性性早熟大鼠模型。抗早1号可能通过降低血清LH、E2值,下调尿PAEs代谢产物表达水平,从而治疗性早熟。