正常人和肝病患者血中“致密体”及其与纳米细菌的关系

目的研究正常和肝病患者血液中圆球体样微生物的生物学特性,初步确定纳米细菌与该种可滤过物的关系。方法将正常人和肝病患者培养阴性的血培养物进行细菌L型、真菌和厌氧菌培养。同时取沉淀用透射电镜观察。L型培养液用0.45μm和0.22μm滤器过滤,接种RPMI1640培养基,细胞培养条件下培养45d,用鼠抗纳米细菌单克隆抗体8D10免疫组化和钙盐染色进行纳米细菌鉴定。血浆纳米细菌培养阳性者12000×g离心后,进行普通和L型细菌培养。结果36/39患者和60/60健康对照血培养液中呈现类似于L型的巨型体、圆球体、原生小体的不明微生物。电镜观察圆球体内为电子致密样物质,周围未见细胞壁结构。电镜和光镜下可见其粘附在红细胞上或存在于红细胞内。滤过后培养物钙盐染色有5/39阳性,但纳米细菌免疫组化染色均阴性。纳米细菌阳性的培养物转种,未见一般细菌、细菌L型和上述血中"致密体"。结论血培养中致密体样微生物与纳米细菌无关,可能在维持机体正常免疫功能上具有一定意义。

慢性肝病和肝癌患者血液中纳米细菌的检测

目的研究纳米细菌的分离与鉴定方法,了解慢性肝病和肝癌患者血液纳米细菌(NB)感染状况。方法对68例慢性乙型肝炎(CHB)、54例慢性重型乙型肝炎(CSHB)、66例肝硬化(CL)、23例肝癌(HCC)患者采用培养、免疫组化、钙染色,检测血液中纳米细菌,并与40例健康人结果比较。部分培养物用透射电镜观察。结果CHB、CSHB、CL、HCC病人和健康人血清纳米细菌免疫组化阳性率分别为23.91%、36.84%、38.89%、26.09%和7.50%。钙染色分别为29.55%、45.45%、37.14%、18.18%和5.00%,肝病阳性率均高于健康人(P<0.05)。显微镜下,纳米细菌阳性组出现针状、巢装集落或结晶者为82.35%,而阴性者40.00%,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化阳性的培养物透射电镜可见纳米细菌样微生物。结论单克隆抗体免疫组化联合透射电镜、钙染色可用于纳米细菌的检测。部分慢性肝病、肝癌病人存在血液纳米细菌感染,肝病患者血液纳米细菌感染率高于健康人。

增菌荧光定量PCR检测痰及血液中结核杆菌的临床应用

目的:评价增菌荧光定量PCR(FQ-PCR)检测痰及血液中结核杆菌的临床应用价值。方法:对61例菌阴和难治性结核患者的痰液、血液以及增菌痰液、增菌血液分别进行FQ-PCR检测,比较相互之间的差异性。结果:痰液、增菌痰液FQ-PCR检测阳性率分别为27.87%(17/61)、40.43%(19/47),二者比较2χ=3.92,P<0.05,差异有统计学意义。血液、增菌血液FQ-PCR检测阳性率分别为0(0/35)、22.5%(9/40),二者比较2χ=8.94,P<0.005,差异有统计学意义。痰液总阳性率为45.90%(28/61),较血液总阳性率22.5%(9/40)高,二者比较2χ=5.70,P<0.05,差异有统计学意义。结论:增菌FQ-PCR在菌阴性和难治性结核杆菌的检测中可作为结核病的辅助诊断之一。痰液FQ-PCR阳性率明显高于血液,但痰液、血液联合FQ-PCR检测可提高结核杆菌的检出率。

肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量PCR检测的意义

目的评价荧光定量PCR(FQ-PCR)和结核菌(MTB)L型检测的临床价值。方法收集61例痰阴性肺结核患者痰、血标本分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用染色、免疫组化和FQ-PCR技术进行检测和鉴定,部分标本透射电镜观察。结果痰MTB及其L型检测的阳性率为72.4%,血液阳性率为28.3%,而痰血检测总的阳性率为75.4%。痰直接FQ-PCR33.3%,培养后FQ-PCR40.4%,总阳性率45.5%。血直接FQ-PCR0/35,培养后FQ-PCR 22.5%。痰血FQ-PCR阳性率比较,χ2=5.3028,P<0.05,差异有统计学意义,痰阳性率明显高于血。痰和血FQ-PCR阳性率低于相应的涂片和培养结果。结论分枝杆菌L型的分离和FQ-PCR的应用可提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。FQ-PCR阴性不能完全排除结核病,但可用于痰及血中分枝杆菌L型的辅助诊断,尤其对不易从感染部位取得标本的患者更有帮助。

艾滋病合并隐球菌脑膜炎患者实验室相关指标分析

目的探讨艾滋病及其合并隐球菌脑膜炎患者实验室相关指标的变化及其临床意义。方法将我院收治的58例艾滋病患者，分为26例艾滋病患者（单纯感染组）、32例艾滋病合并隐球菌脑膜炎患者（合并感染组），分别对脑脊液和外周血常规及生化指标、T细胞亚群进行检测，分析两组间实验室检测指标的差异。结果合并感染组的脑脊液蛋白质为（601．284±545．24）mmol／L，高于单纯感染组（t=0．494，P〉0．05）；合并感染组的脑脊液氯化物和葡萄糖分别为（121．57±5．255）mmol／L和（1．944±0．678）mg／L，低于单纯感染组（t=0．129、1．984，P〉0．05）；合并感染组的外周血淋巴细胞、CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞分别为（495．0±141．1）、（479．9±137．4）、（35．1-I-32．2）、（413．9±104．8）个／μL，均低于单纯感染组，两组比较差异有统计学意义（t=2．236、2．007、2．767、1．997，P〈0．05）。结论艾滋病合并隐球菌脑膜炎患者CIN细胞显著下降，临床上出现CD4细胞计数小于100个／止，CD3和CD8细胞明显下降或淋巴细胞绝对值明显低值，应重视病原学检验。．

结核分枝杆菌滤过型的初步研究

目的研究结核分枝杆菌滤过型的生物学特性与检测方法。方法菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌及其L型的液体培养物经0.45μm滤膜过滤后,涂片观察细菌形态,滤液分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用荧光基因定量法进行结核菌DNA检测。培养物用免疫组化染色鉴定,并采用透射电镜观察。结果30例痰、血滤前、滤后FQ-PCR检测同时阳性为53%,同时阴性为13%,滤前、滤后FQ-PCR结果符合率为67%。滤过后液体培养9例涂片见少许抗酸颗粒或椭圆性球菌。透射电镜见细胞壁缺失的"致密体"样细菌和细胞壁缺如菌。结论菌阴肺结核痰及血培养物中存在结核菌滤过型,滤过型携带遗传信息并可自我复制,采用生物学方法可以对其进行检测。

结核分枝杆菌L型及其巨球体诊断价值的研究

目的:研究结核分枝杆菌L型及其巨球体在肺结核细菌学诊断上的价值。方法:以非结核患者痰标本作为对照,观察52例菌阴肺结核患者痰培养前后结核分枝杆菌L型及其巨球体的镜下形态和阳性率,并采用免疫组化染色和荧光定量PCR技术(FQ-PCR)对其进行鉴定。部分标本透射电镜观察。结果:患者痰有60%(31/52)检出结核分枝杆菌L型。结核菌L型阳性者中L型巨球体阳性率为55%(17/31),而对照组均阴性。结核菌L型巨球体者免疫组化染色均阳性,FQ-PCR检测阳性率71%(12/17),透射电镜发现缺壁结核菌。结论:结核分枝杆菌L型检测可提高肺结核患者细菌学诊断阳性率;巨球体是分枝杆菌L型重要的存在形式,可作为线索用于菌阴肺结核的辅助诊断。

肝硬化患者气单胞菌败血症的临床特点和死亡因素分析

目的研究肝硬化患者气单胞菌败血症的临床特点和死亡危险因素，为治疗提供依据。方法回顾性分析2001年9月至2008年9月我院29例（31例次）肝硬化并发气单胞菌败血症患者的临床资料、微生物学特点和死亡危险因素。同一患者间隔2个月以上发生的气单胞菌败血症被认为独立发生的2例败血症。结果29例患者共发生气单胞菌败血症31例次，有2例发生2次败血症。29例患者中乙型肝炎后肝硬化27例（合并原发性肝癌2例），酒精性肝硬化2例。31例次患者共培养气单胞菌32株，其中嗜水气单胞菌31株，温和气单胞菌1株。主要临床表现依次为是发热（96．8％）、腹痛（32．3％）、恶心及呕吐（32．3％）、腹泻（29．0％）等。1例为多病原体感染。3例在败血症发生48h内死亡。从采血行病原菌培养到死亡的平均时间为7．4d。感染性休克（偏回归系数1．649，RR=5．2，P〈0．01）是死亡的独立危险预测因子。气单胞菌对亚胺培南及哌拉西林／他唑巴坦的耐药率分别为51．6％和35．5％，对四代头孢菌素、氨基糖苷类、氟喹诺酮类抗菌药物敏感性较高。结论肝硬化患者有发热并怀疑气单胞菌感染时，尤其要注意对感染性休克的防治。四代头孢菌素、氨基糖苷类及氟喹诺酮类是目前治疗气单胞菌感染的首选抗菌药物。

荧光定量PCR对血及痰培养物中结核分枝杆菌DNA的检测

目的评价荧光定量PCR（FQ—PCR）检测血及痰培养物中结核分枝杆菌的临床价值。方法81例临床诊断为结核病的痰涂片阴性患者中，单纯肺结核40例（肺结核组），合并HIV感染的患者41例（合并感染组）。患者的血、痰样本分别进行结核分枝杆菌及其L型培养，采用VQ-PER技术检测血及痰培养液中结核分枝杆菌DNA。结果肺结核组结核分枝杆菌痰培养FQ—PCR阳性率为54．1％（20／37）；血培养阳性率为27．5％（11／40），血培养FQ-PCR阳性率为垒2．5％（9／40），血培养及其FUPCR总阳性率42．5％（17／40）。合并感染组10例痰样本培养后2例FQ-PCR阳性；血培养阳性率为7．3％（3／41），血培养FQ-PER阳性率为17．1％（7／41）。合并感染组血培养物FQ-PER阳性率（17．1％）与肺结核组（22．5％）相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组痰与血培养物FQ—PER总阳性率分别为65．0％（26／40）和22．0％（9／41），差异有统计学意义（Х^2=15．305，P〈0．01）。结论痰或血培养物FQ-PER检测有助于提高结核或结核合并艾滋病患者的诊断，同时显著提高了痰涂片阴性肺结核患者的诊断。