锌指蛋白403对卵巢上皮IOSE80细胞增殖的影响

目的探讨锌指蛋白403(zinc finger protein 403,ZFP403)在卵巢上皮细胞中的生物学功能及相关机制。方法通过构建ZFP403-shRNA慢病毒,转染卵巢上皮细胞IOSE80,嘌呤霉素抗性筛选得到稳定沉默ZFP403的细胞株;通过qRT-PCR和Western blotting评价ZFP403沉默效果;采用平板集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞生长能力的变化;采用软琼脂集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞锚着非依赖性生长能力;通过流式细胞术评价沉默ZFP403后对细胞周期的影响;通过Westernblotting试验研究沉默ZFP403后影响细胞周期的相关机制。结果经嘌呤霉素筛选成功构建了ZFP403稳定沉默的细胞株(IOSE80-ZFP403-shRNA1,2)及阴性的对照细胞株(IOSE80-shRNA-NC);平板集落形成试验结果表明沉默ZFP403能明显促进上皮细胞的生长;软琼脂集落形成试验结果表明沉默ZFP403后,上皮细胞具有锚着非依赖性增长能力;流式细胞术结果表明沉默ZFP403能明显促进细胞周期进程;Western blotting结果表明ZFP430通过影响p-cdc2,cdc2,cyclinB1,p21蛋白的表达而影响细胞周期。结论ZFP403通过影响卵巢上皮细胞的异常生长而发挥其生物学功能。ZFP403的表达水平可能影响了卵巢上皮细胞向卵巢癌的转变,具有作为早期卵巢癌临床诊断标志物的可能性。

花旗松素基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α介导的抗氧化通路对顺铂致急性肾损伤小鼠的保护作用及机制

目的探讨花旗松素(taxifolin,TAX)改善顺铂(cisplatin)致急性肾损伤的作用及机制。方法(1)40只C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、TAX组、顺铂组、顺铂+TAX组。测量各组小鼠体重情况。检测各组小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;通过HE染色观察小鼠肾组织病理学改变;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清炎性因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;通过试剂盒测定各组小鼠肾组织氧化应激指标[活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)];实时荧光定量PCR法测定炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β,抗氧化基因解耦联蛋白2(UCP2)、SOD2、CAT以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)mRNA表达情况;通过测定肾组织ATP水平和线粒体DNA(mtDNA)含量评价线粒体功能;通过Western印迹法测定腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化(p)-AMPK蛋白表达情况。(2)通过建立Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型评价TAX对顺铂化疗效果的影响。结果与对照组比较,TAX组小鼠体重未明显降低,且未出现明显肾损伤(均P>0.05),提示口服TAX具有良好的安全性。与顺铂组比较,TAX能够显著延缓顺铂引起的小鼠体重下降,降低小鼠血清Scr和BUN水平,并缓解肾组织病理学改变(均P<0.05)。TAX能够显著下调顺铂诱导的小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α水平,以及肾脏炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达(均P<0.05)。TAX能够显著降低顺铂致急性肾损伤小鼠肾组织ROS和MDA水平,并提高SOD、CAT和GSH活性(均P<0.01)。同时,TAX能够显著上调顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏抗氧化基因UCP2、SOD2、CAT mRNA以及PGC-1αmRNA表达,并提高肾组织ATP和mtDNA水平(均P<0.01)。Western印迹结果显示,TAX显著促进顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏AMPK磷酸化蛋白表达(P<0.01)。此外,通过Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型证实,TAX对顺铂抗肿瘤疗效无显著影响。结论TAX能够改善顺铂引起的肾脏氧化损伤,其机制可能与激活AMPK/PGC-1α通路有关。