基于B16细胞评价体系研究复方中药的美白功效

酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是黑色素合成过程中的关键性限速酶,检测中药提取物对TYR活性的影响,筛选出对TYR活性抑制效果较好的美白中药,并对其进行组方,筛选出其中高效低毒的最佳复方,测定最佳复方对B16细胞中TYR活性和黑色素含量的影响并研究其作用机制。方法 体外检测中药提取物对TYR活性的影响,MTT检测复方中药安全浓度范围,测定B16细胞中TYR活性和黑色素含量,并通过进行CAMVA,对其进行眼刺激性分析;ELISA与RT-qPCR法分别检测最佳复方对B16细胞内参与调控酪氨酸酶表达的TYR、TRP-1、TRP-2、MITF蛋白表达水平与mRNA转录水平,并探讨其作用机制。结果 7种中药提取物对TYR活性均有抑制作用,且抑制率与样品浓度呈正相关,浓度为30 g·L-1时抑制率最高;5种复方对TYR活性均有抑制作用,且抑制率跟样品浓度呈正相关,其中复方E对TYR活性的抑制作用最强且细胞毒性最小,复方E处理细胞的安全浓度范围为0~1 g·L-1,CAMVA试验结果显示复方E浓度小于20 g·L-1时具有良好安全性;当复方E质量浓度为0.25~1 g·L-1时,对TYR活性具有明显抑制作用(P < 0.05)。0.05~1 g·L-1复方中药对黑色素生成均具有抑制作用,且其抑制率呈现一定的浓度依赖性。经复方E处理后B16细胞内TYR、TRP-1、TRP-2、MITF的蛋白表达水平与mRN转录水平明显抑制(P < 0.05),当复方E浓度为1 g·L-1时抑制效果最强。结论 复方中药可以通过下调TYR、TRP-1、TRP-2、MITF蛋白的表达,进而抑制TYR活性,最终达到减少黑色素形成的目的。