原位杂交技术在肿瘤生物学中的应用

原位杂交技术在肿瘤生物学中的应用浙江医科大学肿瘤研究所及分子生物学实验室（３１０００６）莫益群，郑树原位杂交技术是指用标记的ＤＮＡ或ＲＮＡ探针，在原位检测组织细胞内特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ序列，从而对组织细胞中的待测核酸进行定性、定位和相对性定量分析的一...

新大肠癌相关HSU 17714基因在大肠癌及其它肿瘤组织中的表达研究

HSU17714是应用减式杂交技术筛选出来的大肠癌相关基因，为了进一步了解此基因在大肠癌及其它肿瘤组织中的表达情况。采用RNAdotblot进行了研究。结果显示：50例大肠腺癌中，表达降低的有16例，占32％，而且与是否伴有淋巴结转移有关。15例乳腺癌中有3例表达降低，占20％。另外，在急淋、急粒、肺腺癌、食管鳞癌各1例中亦有表达降低现象。说明HSU17714在大肠癌组织中可能存在着不同程度的表达缺陷，可能是大肠癌晚期的分子事件。同时，HSU17714基因亦可能是其它肿瘤发生发展的一个分子标志。

端粒、端粒酶与恶性肿瘤

端粒、端粒酶与恶性肿瘤浙江医科大学肿瘤研究所及分子生物学实验室（杭州３１０００６）陆敏综述郑树审校肿瘤是一种体细胞遗传病，越来越多的事实证明肿瘤的发生与遗传物质的改变密切相关，因此，人们刚开始就注意到遗传物质的载体一染色体在肿瘤形成中的改变，而端粒（...

野生型p53基因重组质粒的构建及其对人肠癌细胞的抑瘤效应

人p53基因是一种抑癌基因,p53蛋白作为一种细胞增殖的负调节因子,调控细胞的生长和分化,维持基因组DNA的稳定,其突变、缺失或与细胞、病毒、肿瘤蛋白结合所致的p53失功能,在恶性肿瘤发生发展中起着非常重要的作用.为了进一步探讨野生型p53基因的抗肿瘤特性,我们采用分子克隆方法将人野生型p53基因(WT-p53)cDNA全长正向插入到哺乳动物表达载体(pREP9)的BamHl位点,构建了pREP9-p53重组体,用电穿孔方法将其导入有p53基因突变的人肠癌SW1116细胞,通过标记基因Neo^R筛选带外源p53基因的G418抗药性克隆,以观察抗药性克隆数量,同时对G418抗药性细胞的生长速度及细胞增殖周期进行观察.结果表明,导入WT-p53基因能使肠癌SW1116细胞的G418抗药性克隆形成减少,细胞生长速度较对照细胞明显减慢,细胞增殖周期GI期增加、S期下降.这些结果证明人野生型p53基因能抑制肠癌细胞的生长.本研究为大肠癌WT-p53实验性基因治疗提供了理论依据,说明基于恢复P53肿瘤抑制基因功能的基因治疗在治疗结、直肠癌方面有着广阔的应用前景.

转染外源p53基因在荷瘤裸鼠人肠癌细胞中表达的检测

采用直接注射外源ＤＮＡ－脂质体复合物的方法分别在荷瘤裸鼠人肠癌组织中转染外源正义ｐ５３ｃＤＮＡ和反义ｐ５３ｃＤＮＡ的重组表达质粒及非整合型哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９，并以注射等量生理盐水为对照，然后应用链菌素亲生物蛋白－过氧化酶免疫组化法检测肿瘤组织中突变型ｐ５３蛋白的表达。结果表明：体外培养ＳＷ１１１６细胞中约有５０％为突变型ｐ５３蛋白阳性；转染反义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组的裸鼠移植瘤细胞ｐ５３蛋白阳性率为２５％，而注射生理盐水、转染ｐＲＥＰ９及正义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组阳性率分别为６６．７％，７７．８％，６６．７％；前者与后三者之间有显著住差异（Ｐ＜０．０１，Ｘ［２］检验），但各组间肿瘤大小并无显著性差异。据此认为，肿瘤体内直接转染外源反义ｐ５３基因能封闭肠癌ＳＷ１１１６细胞中突变型ｐ５３基因的表达。

HSU17714基因反义重组质粒的构建及其对人大肠癌细胞生长的影响

我所应用减式杂交方法筛选人大肠癌负相关基因,得到一与已知基因同源性仅50％的cDNA片段,已作为新发现的基因被NCBI收录入国际基因库,我们将此cDNA片段反向克隆至非整合型哺乳动物表达载体pREP9的多克隆位点中,构建了HSU17714基因的反义RNA表达载体,并籍脂质体将之导入人结肠癌SW1116细胞中,双层软琼脂集落培养试验、流式细胞技术分析及MTT比色法等结果分别提示转染该重组体的肠癌细胞的非锚着依赖性生长能力、增殖周期活性和细胞生长速度均受到不同程度的抑制,说明外源重组体pREP9+HSU17714(AS)对肠癌SW1116细胞的生长具有抑制作用。

野生型P53基因对人肠癌细胞株的抑瘤效应

为了探讨野生型P53基因对人肠癌细胞株的抑瘤效应。用电穿孔方法将正向携带有野生型P53基因cDNA全长的反转录病毒重组质粒(Dol p53)导入有P53基因突变的人肠癌SW1116细胞,通过标记基因NeoR筛选带外源P53基因的G418抗药性克隆,以观察抗药性克隆数量,同时对G418抗性细胞的生长速度及细胞增殖周期等方面进行观察,结果表明:导入WT-P53基因能使肠癌SW1116细胞的G418抗药性克隆形成减少,细胞生长速度较对照细胞明显减慢,细胞增殖周期G1期增加、S期下降。结果证明人野生型P53基因对肠癌细胞有明确的抑瘤效应,说明基于恢复P53肿瘤抑制基因功能的基因治疗在治疗结直肠癌方面有广阔应用前景。