不同产地三叶青中27种矿质元素的综合评价

目的综合评价不同产地三叶青Tetrastigma hemsleyanum中27种矿质元素。方法采用电感耦合等离子体质谱法进行含有量测定,采用SPSS 19. 0、Matlab (R2015b)软件,主成分分析、聚类分析进行综合评价。结果所测27种元素都有检出,所有样品中均检出13种元素,其中K、Mg、Ca、Al、Fe、Mn平均含有量较高,所有样品中有害元素含有量均达到中国药典限量标准,Hg、Ag、Tl、U等仅在极个别样品中有检出。不同产区样品间各元素含有量差异较大,主成分分析得3个主成分,其累计方差贡献率达80. 70%。第一主成分的方差贡献率为36. 33%,其中Ca、Cu、Ni、Ba、Al、K有较高的载荷值,为三叶青的特征元素。聚类分析显示不同产地三叶青中矿质元素呈现一定的选择性累积和地域差异。西部地区三叶青样品的矿质元素与东部地区的差异较大,广西与其他产区样品差异最大,单独聚为一类;浙江、福建、江西等东南产区的样品差异较小,聚为一大类。结论该方法准确稳定,重复性好,为三叶青质量评价、药效物质基础研究与资源开发利用提供理论依据。

三叶青块根发育时期RT-qPCR内参基因的筛选与体系建立

三叶青为珍稀药用植物,药用部位地下块根产量低,生长周期长,相关基因表达和调控研究缺乏,为了解其块根发育的分子机制,需筛选稳定表达的内参基因。本研究利用课题组前期的转录组测序数据,选取了β-actin、GAPDH、RNA polymerase Ⅱ和GBSS四个候选内参基因,以不同块根发育阶段的三叶青根、茎、叶、芽组织为材料,通过反转录PCR初筛,实时荧光定量PCR检测表达量,并利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta Ct程序和RefFinder在线网站评价内参基因的稳定性。结果表明:GAPDH在不同块根发育及不同组织中的稳定性优于其他基因;β-actin的扩增效果相对较差;经综合分析稳定性顺序为GAPDH>GBSS>RNA polymerase Ⅱ>β-actin,因此本研究认为在研究三叶青块根发育中选用GAPDH作为内参,在后续的基因定量表达验证中结果更为可靠。此外,也可以考虑GAPDH和GBSS或GAPDH,GBSS和RNA polymerase Ⅱ的多内参共同校准的方法以进一步提高结果的准确性。本研究建立了三叶青实时荧光定量PCR内参基因的筛选体系,为后期开展三叶青块根发育过程中基因的功能调控和表达研究提供了理论依据。