基因芯片法检测浙江省部分汉族人群乙醛脱氢酶2基因多态性

目的了解浙江省部分汉族人群乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性分布频率。方法在浙江省地区收集1370例汉族人血液标本,对其ALDH2基因12号外显子的特定片段进行特异性扩增,应用基因芯片法判定基因型。结果 ALDH2变异型等位基因在浙江省部分汉族人群中的分布频率为44.5%;此人群的ALDH2基因型频率分布与上海人群之间的差异不存在统计学意义,而与洛阳人群之间存在统计学意义。结论浙江省部分汉族人群ALDH2基因变异型有将近一半,表明此人群中ALDH2酶活性缺乏者占近半数;中国汉族人群的ALDH2基因多态性似存在南北地区差异。

松花粉对D-半乳糖衰老模型小鼠学习记忆功能的影响及机制研究

目的探讨松花粉对脑衰老的作用及其相关机制。方法以100mg/kg D-半乳糖皮下注射建立小鼠衰老模型,灌胃给予模型小鼠高、中、低三个剂量(500mg/kg、1000mg/kg、1500mg/kg)的松花粉,并以非酶糖基化抑制剂盐酸氨基胍(AG)为阳性对照,连续给药8周后,采用跳台法测定小鼠的学习记忆能力。处死小鼠获取血清及脑组织,检测晚期糖基化终末产物(AGE)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活力、MDA水平以及炎症因子IL-6和TNF-α水平等衰老相关指标。结果跳台法检测模型组较正常组潜伏期显著缩短,5min内错误次数显著增加(P<0.05),而松花粉处理后能显著逆转这一变化(P<0.05),高剂量组效果最佳;同时,松花粉处理组能显著抑制模型组血清及脑组织中AGE水平及IL-6、TNF-α水平的升高(P<0.05),提高血清及脑组织SOD活力(P<0.05)并下调MDA水平(P<0.01)。结论松花粉能显著改善衰老模型小鼠的学习记忆功能,并上调抗氧化活性和降低衰老相关的炎症介质水平,抑制体内非酶糖基化可能是其发挥延缓衰老作用的机制之一。

紫菜半乳聚糖结构与生物活性研究进展

紫菜是日常生活中常见的海洋食品之一。紫菜半乳聚糖是由半乳糖和硫酸基为主要组成的水溶性杂多糖,是紫菜的主要营养成分之一,在医药、食品、化妆品等领域有着广泛应用。尤其近二十年来,有关紫菜半乳聚糖的生物活性研究迅速增多,并在许多新领域有所报道。本文综述了紫菜半乳聚糖在各个领域的生物活性和作用机制的主要研究进展,为紫菜的深入开发和高值化应用提供参考。

木瓜蛋白酶对凝血功能的抑制作用及机制的体外研究

目的:观察木瓜蛋白酶体外对凝血功能的抑制作用,并探讨其可能机制。方法:将不同剂量木瓜蛋白酶分别与贫血小板血浆(PPP)和富血小板血浆(PRP)作用,分为生理盐水组、10U/L组和20U/L组,分别以血凝仪测定PPP和PRP的凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT),以血气分析仪和血凝仪分别测定PPP的Ca2+浓度和凝血因子V、VII、VIII、IX、X和XI活性(FV:C、FVII:C、FVIII:C、FIX:C、FX:C和FXI:C);将新鲜全血与前述3种浓度木瓜蛋白酶作用,采用硅化管法测定全血凝血时间(CT)。同时测定0、20、40、60和80U/L木瓜蛋白酶PPP的PT和APTT值。结果:10 U/L和20U/L木瓜蛋白酶组PPP和PRP的PT和APTT值、全血CT值分别显著高于生理盐水组和10U/L木瓜酶组(P<0.01),FV:C和FVIII:C水平分别显著低于生理盐水组和10U/L木瓜酶组(P<0.05);三组PPP与PRP之间PT和APTT值、各组间Ca2+浓度以及其余凝血因子活性差异均无显统计学意义(P>0.05)。PPP的PT和APTT值均与木瓜蛋白酶剂量呈显著正相关(r=0.995和0.991,P<0.01)。结论:木瓜蛋白酶可通过抑制凝血因子V和VIII活性,从而对凝血功能有剂量依赖性的抑制作用,具有抗凝的功效。

白细胞介素4调节人脐带间充质干细胞的增殖和造血支持能力

目的:间充质干细胞(MSC)被认为在多种自身免疫系统疾病和移植物抗宿主病中有良好的应用前景,但是其在各种炎症因子作用下生物学功能的变化仍然值得进一步研究。本文探讨了白细胞介素4(IL-4)对脐带间充质干细胞(UC-MSC)的多种生物学特性以及造血支持作用的影响。方法:IL-4刺激UC-MSC后,使用流式细胞术检测UC-MSC免疫表型;使用MTT检测细胞活力改变,并使用Brd U-ELISA的方法,检测其增殖能力;使用油红O和茜素红染色来检测UC-MSC成脂和成骨分化;使用实时荧光定量PCR的方法,检测UC-MSC中mRMA表达的差异;收集IL-4刺激的UC-MSC的上清,检测其在促进CD34+细胞集落形成能力的变化。结果:IL-4刺激后,UC-MSC表面的CD11b、CD19、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105、人类白细胞抗原(HLA)-DR和HLA-ABC并未有明显改变。MTT和Brd U-ELISA都表明,IL-4处理组UC-MSC的增殖在72 h后相对于未处理组明显下降(P<0.05)。IL-4处理后,UC-MSC成脂和成骨分化能力未检测到明显的变化。此外,IL-4可以明显增强UC-MSC中IL-6mRNA表达(P<0.01),增强UC-MSC培养上清的促CD34+细胞粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的集落形成能力(P<0.01)。结论:IL-4可以抑制UC-MSC增殖,促进UC-MSC造血支持能力。

林区居民高血压患病率及相关因素的横断面研究

目的了解浙江省遂昌县林区居民高血压的患病率及影响因素。方法采用随机整群抽样方法抽取遂昌县白马山林区≥18岁社区居民2007人，进行问卷调查、体格检查及生化指标检测。结果该县林区居民患高血压病474例，患病率为23．62％，标化患病率为18.09％。高血压患病率随年龄增加而增加，且不同年龄段患病率具有性别差异：〈40岁，男性患病率大于女性；≥50岁，女性患病率显著高于男性；40～50岁，两者相当。多因素Logistic回归分析显示，性别、年龄、BMI、家族史、糖代谢异常、脂代谢异常为高血压患病的危险因素。结论遂昌县林区居民高血压患病率较全国水平低，但老年高血压患病率明显升高，性别、年龄、家族史、肥胖、糖和脂代谢异常是高血压患病的主要危险因素。

遂昌县白马山生态景区居民血脂异常及其影响因素调查

目的了解浙江省遂昌县白马山生态景区成年居民血脂分布状况及其影响因素。方法采用整群抽样调查方法调查遂昌县农村居民2036人,测定人群的血压、身高、体重、体重指数(BMI)、血脂及载脂蛋白(apo)。以Lo-gistic回归筛选血脂异常危险因素。结果人群中高甘油三酯(TG)比例为19.30%(394/2036),高总胆固醇(TC)为8.15%(166/2036),低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)为6.93%(141/2036)、高低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)为7.96%(162/2036)。Logistic回归结果表明调查人群血脂异常(高TC和或高TG)患病率与年龄、BMI、血压、血糖、饮酒情况、肉食为主习惯呈正相关(P<0.05),与饮茶呈负相关(P<0.05)。结论调查人群的血脂异常危险因素为年龄、BMI高、高血压、高血糖、饮酒、肉食为主,而饮茶为保护因素。

秦皮乙素促进成骨细胞分化延缓增龄性骨质疏松的研究

目的探讨秦皮乙素对成骨细胞分化的调控及对增龄性骨质疏松症的治疗作用。方法取7月龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、秦皮乙素200 mg/kg组与秦皮乙素400 mg/kg组,分别灌胃给予生理盐水与秦皮乙素。给药3个月后取材,X射线检测小鼠胫骨骨密度,q PCR检测成骨细胞分化标记基因表达,成骨诱导液诱导28 d后茜素红染色检测成骨细胞矿化结节形成能力,胫骨组织HE染色观察骨组织形态。结果 10月龄时灌胃给予200 mg/kg秦皮乙素的小鼠胫骨骨密度略高于对照组,而灌胃给予400 mg/kg秦皮乙素的小鼠胫骨骨密度明显高于对照组。HE染色结果同样显示400 mg/kg组小鼠骨小梁显著多于对照组。成骨诱导分化与茜素红染色结果显示,秦皮乙素400 mg/kg组骨髓来源间充质干细胞矿化结节形成能力增强。q PCR结果表明秦皮乙素剂量依赖地促进成骨细胞分化标记基因碱性磷酸酶、骨涎蛋白、Col1与Runx2的表达,同时发现经典Wnt信号关键基因Dkk1与Lef1表达也明显升高。结论秦皮乙素促进成骨细胞分化能力,进一步延缓增龄性骨质疏松症,其可能与调控经典Wnt信号相关。

Notch信号在脂多糖诱导的骨髓间充质干细胞中的作用

目的:探讨Notch信号对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和趋化因子CXCL1分泌的影响。方法:全骨髓培养法制备BMSCs;采用q PCR与Western blot实验比较LPS对BMSCs中Notch信号通路配体、受体及靶基因表达的变化;MTT法和活细胞计数检测Notch信号对细胞增殖的影响;并以ELISA法检测Notch信号通路抑制剂DAPT对IL-6和CXCL1分泌的调节作用。结果:经10μg/L、100μg/L和1 mg/L的LPS刺激后,BMSCs增殖和IL-6分泌呈现上升趋势(P<0.05或P<0.01)。q PCR与Western blot结果显示Notch信号通路受体和配体在BMSCs中均有表达,但LPS对其mRNA与蛋白水平并无明显影响,然而LPS可显著诱导Notch信号靶基因Hes1与Hey1的蛋白表达。Notch信号通路抑制剂DAPT可以降低LPS诱导的BMSCs活力的上升(P<0.01),同时对LPS诱导的BMSCs增殖有抑制作用。另外,LPS显著诱导BMSCs中IL-6与CXCL1的分泌,而抑制Notch信号通路可显著抑制LPS所诱导的IL-6与CXCL1的分泌(P<0.05)。结论:抑制Notch信号可以抑制LPS诱导的BMSCs增殖,并抑制IL-6与CXCL1的分泌。

黄芪多糖修复LPS诱导的内皮祖细胞功能损伤机制的实验研究

目的运用microRNA芯片方法检测黄芪多糖对脂多糖(LPS)刺激下人内皮祖细胞(EPCs)细胞功能损伤的诱导作用及相关的miRNA表达变化,分析其分子机制。方法将EPCs分为3组:对照组、LPS处理组(LPS组)和黄芪多糖预处理组(APS组),进行miRNA表达谱分析与验证,并利用生物信息方法分析miRNA调控的靶基因功能与信号通路。结果有15个miRNA与LPS诱导的细胞功能损伤相关。19个miRNA在黄芪多糖预处理后表达发生了改变。7个miRNA分子即hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-7977、hsa-miR-19a-3p、hsa-miR-377-3p、hsa-miR-7114-5p及hsa-miR-424-5p在LPS组与APS组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中3个miRNA经RT-PCR验证结果与芯片结果相符。7个miRNA的靶基因主要参与蛋白泛素化调节等基因本体(GO)功能分类以及PI3K-Akt等信号通路。结论 APS对LPS诱导的EPCs功能损伤有保护修复作用,该作用可能与miRNA分子的表达改变相关。

电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化

目的探究采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称p G)转染老年人成纤维细胞,从中寻找最佳的参数。方法采用电穿孔法将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒p G转染老年人成纤维细胞。荧光显微镜下观察EGFP表达并测定转染效率、细胞存活率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果本实验室电穿孔法介导的老年人成纤维细胞转染的最佳电转条件:电压:240 V;电容:750μF;DNA剂量:8μg。48 h后电穿孔法的转染率接近30%。结论用电穿孔法将质粒pG稳定转染老年人成纤维细胞耗时短,有利于在体外对老年人成纤维细胞进行后续实验。

鼠尾草酸延缓人胚肺二倍体成纤维2BS细胞衰老的实验研究

目的研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)延缓细胞衰老的作用及相关机制。方法采用体外细胞模型人胚肺二倍体成纤维2BS细胞系,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定CA对2BS细胞活力的影响,筛选获得最佳CA培养浓度,再用该浓度的CA对2BS进行传代培养,观察其对细胞代龄、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平、细胞周期分布和衰老相关蛋白p53、p21的影响。结果 MTT实验表明CA在1μmol/L、5μmol/L能够上调2BS细胞活力;采用含1μmol/L CA的培养液对2BS细胞从30PD(population doubling,倍增次数,亦称作"代")开始培养,直至完全停止生长,同时设立对照。对照组细胞于54PD左右发生衰老,SA-β-Gal染色阳性率达85%,而55PD的CA处理组仅为20%左右,接近年轻细胞水平;此时CA组细胞内MDA水平显著低于对照组,处于G1/G0期细胞的比例显著低于对照组,而S期比例则显著高于对照组,p53、p21蛋白水平均显著低于对照组,CA组细胞继续培养至61PD左右才出现衰老。结论 CA在1μmol/L剂量下能延缓2BS细胞的复制性衰老,该作用可能与其抗氧化能力有关。

EGFR信号通路相关的miR-125a-5p调控肺癌转移的研究

[目的]了解表皮生长因子受体(EGFR)信号通路和microRNA(miRNA)表达的关系,探讨miRNA在肺癌转移中的作用。[方法]采用miRNA芯片分析表皮生长因子(EGF)刺激前后肺癌细胞中miRNA表达谱的改变;利用Transwell Insert迁移与侵袭实验,体外划痕愈合实验了解miR-125a-5p抑制肺癌细胞迁移与侵袭的能力;微管形成实验了解脐静脉血管内皮细胞(ECV304)体外形成血管的能力。[结果]芯片检测与RT-PCR显示34个miRNA的表达受到EGFR信号通路活化的影响,其中miR-125a-5p改变最明显;转染miR-125a-5p抑制物后PC9细胞的迁移数(286.67±10.51 vs 218.00±9.54,P=0.001),侵袭数(245.67±5.51 vs 186.33±5.03,P<0.001),创伤愈合能力(P<0.05)较阴性对照增加,ECV304细胞形成的微管数量也增多。[结论]miR-125a-5p可能受EGFR信号通路调节,并且对肺癌细胞具有转移抑制作用。

探讨电穿孔法介导转染32DP210细胞的参数

目的:采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称pG)转染32DP210细胞,从中寻找最佳的参数。方法:分别采用LipofectamineTM2000、transfast、脂质体DMRIC-E和电穿孔法,将能表达G418抗性蛋白和绿色荧光蛋白(GFP)的质粒pG转染32DP210细胞;荧光显微镜下观察GFP表达并测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果:本实验室电穿孔法介导的32DP210细胞转染其最佳电转条件为电压270 V,电容950μF,DNA剂量14μg。48 h后电穿孔法的转染效率达50.81%,其它三种方法转染效率都小于3%。结论:用电穿孔法将质粒pG转染32DP210细胞是最佳的转染方法。

肝素结合蛋白对成人脓毒症诊断价值的Meta分析

目的 系统评价肝素结合蛋白(HBP)在成人脓毒症诊断中的价值.方法 检索美国国立医学图书馆PubMed数据库、荷兰医学文摘Embase数据库、Cochrane临床试验数据库、万方数据库、中国知网、维普数据库收录的自建库至2019年7月发表的有关HBP诊断成人脓毒症的中、英文文献.由2位研究者独立提取相关资料;采用诊断准确性研究的质量评价工具QUADAS-2对文献进行质量评价;用Meta-Disc 1.4和STATA 12.0软件进行Meta分析,计算合并的敏感度、特异度、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)和诊断优势比(DOR)等指标,绘制拟合受试者工作特征曲线(SROC)并计算曲线下面积(AUC);采用Deek检验法检测发表偏倚.结果 最终纳入10项研究共1 884例患者,文献质量相对适中.所有研究均采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中HBP水平.Meta分析结果显示,各研究间存在异质性,随机效应模型分析显示,合并敏感度、合并特异度、合并PLR、合并NLR和合并DOR分别为0.80 〔95%可信区间(95%CI)为0.77~0.83〕、0.80(95%CI为0.78~0.82)、3.96(95%CI为2.45~6.41)、0.28(95%CI为0.20~0.39)、14.63(95%CI为6.83~31.30);合并AUC为0.86,Cochran-Q=0.79.为了探索异质性的潜在来源,对疾病严重程度、脓毒症诊断标准和地区进行亚组分析,结果显示无方法学上的共变量影响HBP的诊断准确性,表明仍存在不能解释的异质性.此外,通过逐个剔除各项研究进行敏感度分析,未发现异常值研究,结果相对稳定可靠.Deek检验显示纳入文献不存在发表偏倚.结论 HBP对成人脓毒症具有较好的诊断价值,但仍需进一步扩大样本量进行验证.

吴茱萸碱抑制破骨细胞分化延缓骨丢失的研究

目的探讨吴茱萸碱对破骨细胞分化与骨吸收功能的调控及对骨质疏松症的治疗作用。方法取小鼠原代骨髓来源巨噬细胞分别给予0、10、20、50、100、200μmol/L吴茱萸碱处理,CCK8检测细胞活力;然后利用原代骨髓来源巨噬细胞给予小鼠重组可溶性核因子κB受体活化因子配体与集落刺激因子行破骨细胞分化诱导,分别给予20与50μmol/L吴茱萸碱干预。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞形成能力,荧光定量PCR分析破骨细胞分化相关基因表达,免疫荧光检测F肌动蛋白(F-actin)形成,扫描电镜观察破骨细胞骨吸收能力。7月龄C57BL/6小鼠灌胃给予100与200 mg/kg吴茱萸碱,给药3个月后Micro-CT检测小鼠骨密度与骨质量。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果CCK8结果显示,与对照组相比,给予10、20、50、100μmol/L吴茱萸碱处理后细胞活力无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);而给予200μmol/L吴茱萸碱的细胞活力下降(100.64±0.18比47.54±5.58),差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,20μmol/L吴茱萸碱的TRAP染色阳性细胞数[(200.57±28.35)比(142.29±19.21)个]、Trap(1.00±0.13比0.55±0.16)、组织蛋白酶K(Ctsk)(1.01±0.17比0.59±0.11)mRNA水平、骨吸收面积比(1.00±0.15比0.79±0.19)均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,50μmol/L吴茱萸碱的TRAP阳性细胞数[(200.57±28.35)比(112.71±12.18)个]、Trap(1.00±0.13比0.46±0.17)、Ctsk(1.01±0.17比0.49±0.12)、树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-Stamp)(1.00±0.10比0.55±0.14)、c-Fos(1.01±0.10比0.58±0.14)、活化T细胞核因子c1(Nfatc1)(1.00±0.10比0.59±0.14)、H+转运ATP酶v0亚基d2(Atp6v0d2)的mRNA表达(1.00±0.10比0.59±0.18)、F-actin数量[(165.00±18.50)比(98.33±21.15)个]和骨吸收面积比(1.00±0.15比0.62±0.10)均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Micro-CT结果显示,与生理盐水组相比,100 mg/kg吴茱萸碱组小鼠骨密度有一定升高[(0.19±0.03)比(0.21±0.01)g/cm3],但差异无统计学意义(P>0.05);与生理盐水组相比,200 mg/kg吴茱萸碱组小鼠胫骨的骨密度[(0.19±0.03)比(0.23±0.01)g/cm3]、骨体积比[(9.79±1.39)﹪比(11.62±1.18)﹪]、骨小梁数量[(2.43±0.29)比(3.08±0.43)/mm]上升,骨小梁分离度[(0.44±0.06)比(0.27±0.05)mm]下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论吴茱萸碱通过抑制破骨细胞分化与骨吸收功能延缓小鼠骨量丢失。